专利名称：一种提取腺苷的方法
技术领域：
本发明涉及一种从发酵液中分离提取腺苷粗品的方法
背景技术：
腺苷作为药物，在国际上首次投入市场是由日本藤泽药厂的子公司Lyhomed于1989年在美国投入市场，随后又在英国。比利时。法国等很多国家获得批准，腺苷，又名腺嘌呤核苷，分子式CltlH13N5O4，分子量267. 24，无臭、无味、白色结晶性粉末，难溶于水、乙醇和乙醚，熔点233-238°C，比旋度-68.0° -72. 0°是一种遍布人体细胞的内源性核苷，可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还参与扩张冠脉血管，增加血流量。腺苷对心血管系统和肌体的许多其它系统及组织均有生理作用。腺苷生产发酵液是指腺苷生物发酵过程所得到的含有糖、氮源、无机盐等多种腺苷培养基混合物，由于微生物生长代谢是一个十分复杂的过程，产生多种初级及次级的代谢产物，使发酵液成分变得非常 复杂，如细胞自溶产生的细胞碎片以及细胞本身，微生物代谢生成的糖。蛋白质类胶体物质，还有培养基中违背完全吸收和利用的残余营养物质，而产品腺苷只是占了其中很少的一部分。为了得到发酵液中的腺苷，首先需要将发酵液中各种破碎的微生物细胞、糖、蛋白质等胶态以及纤维颗粒物等固态杂质分离去除。由于生物发酵也是一个复杂体系，同时微生物细胞及碎片细胞，糖、蛋白质类胶粘物质增加了发酵液的粘度，从而使固态杂质的去除变得困难。目前发酵液固液分离方法主要采用一下几种方法高速离心法，该方法设备投资较大，运行维护费用较高超滤法，该方法操作简单，产品收率较高，但超滤膜维护困难，实用周期较短；混凝法(单独投加硫酸铝等铝盐混凝剂)，强力搅拌或离心进行固液分离，由于发酵液中存在大量的分子各异得胶体杂质，且铝盐分子量较小，电荷较低，难以完全絮凝沉淀，因而分离去除率低，产品收率不高，尤其针对腺苷发酵液，难以完全絮凝沉淀。
发明内容
针对上述技术问题，本发明提供一种经济有效的腺苷粗品提取方法，该方法具有操作简便、投资少。为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是一种提取腺苷的方法，步骤为A、将腺苷发酵液用碱溶液调节pH值至7 8，加热搅拌后加入絮凝剂，60± 10分钟后，调整转速为60± 10转/分，再搅拌5 7分钟，静置10 15分钟后压滤，所述絮凝剂是聚合硫酸氯化铁铝PAFCS，加入絮凝剂的量占整个腺苷发酵液的体积百分比是(20±5)% ;B、将步骤A的滤液在旋转式薄膜蒸发器中进行浓缩得浓缩液，所述的浓缩温度控制在70± 10°C，真空度-0. 095±. 0IMpa ;C、将步骤B的浓缩液室温放置，自然冷却2± lh，然后继续降温至0°C以下，冷冻结晶得结晶液；D、将步骤C的冷冻结晶液抽滤，得到湿品，将湿品放置烘箱中烘干10±lh得到干燥腺苷粗品。
进一步在上述提取腺苷的方法中，所述步骤A的碱溶液是NaOH液，聚合硫酸氯化铁铝PAFCS的质量浓度为4%。所述步骤A加热搅拌的加热温度为50 60°C，搅拌速度为180±20转/分，压滤是用板框压滤机实现压滤工艺。所述步骤B的浓缩液体积是滤液体积的1/4 1/5。所述步骤C冷冻结晶的时间是24±3h。与现有技术相比，本发明在固液分离除菌步骤中采用一种絮凝剂一聚合硫酸氯化铁铝(PAFCS)，该絮凝剂脱色能力优、絮凝物比重大、絮凝速度快、易过滤、出水率高、且其原料均来源于工业废渣、成本较低、来源广，生产工艺简单。一般情况下，絮凝效果会随着絮凝剂的用量增加而提高，但过量时会使絮凝剂重新变为稳定的胶体，其最佳用量是根据悬浮物的含量通过具体的实验而得出的。PH值对胶体颗粒表面电荷的电位、絮凝剂的性质和作用等都有很大的影响。另外温度高水温时，反应速度过快，形成的絮凝体细小，低水温时反应速度过慢，影响处理的水量，同时过高的粘度对絮凝剂的撕裂作用也会使絮凝体变得细小。搅拌速度和时间速度过快，时间过长，会将大颗粒的固体搅碎成小颗粒，将能沉淀的颗粒搅碎成不能沉淀的颗粒。速度过慢，时间过短絮凝剂与固体不能充分接触，不利于絮凝剂捕固体胶体颗粒，且絮凝剂的浓度也分布不均，更不利于发挥絮凝的效果。采用本方法 从发酵液中提取腺苷，得到的腺苷粗品含杂量少，产品腺苷损失较少，明显提高后续纯化工艺，精制工艺的腺苷收率。且整个提取方法经济有效。
具体实施例方式下面，将通过本发明的实施例进行更加详细的说明。但以下这些实施例只是为了对本发明进行详细的说明而列举的示例，本发明的范围并不只局限于这些实施例。实施例I取腺苷发酵液2. 5L放至混凝器中，测试其腺苷含量20. 12g/L，则理论产量50. 30g，加入浓度为25%的NaOH溶液(25%是NaOH的浓度，NaOH溶液是用NaOH固体与水配成的，25 %是质量分数)调节PH值至7，然后在每分钟180转的搅拌速度下加入浓度为4%的聚合硫酸氯化铁铝(PAFCS)絮凝剂600mL，一分钟后，调整转速为60转/分，再搅拌5分钟，形成大块絮凝颗粒，静置10分钟后倾出上清液，用2L水洗涤沉渣，洗水与上清液混合，经板框压滤机压滤，沉渣也经板框压滤，两次得到滤液混合，总体为5L。将滤液在旋转式薄膜蒸发器中进行浓缩，滤液分四次浓缩完毕，每次1250ml，浓缩温度控制在65°C左右，真空-0. 095Mpa，待浓缩至1/4体积时放料。将浓缩液室温放置，自然冷却2h，然后继续降温至0°C，冷冻结晶24h，此时有大量结晶析出。将冷冻结晶液抽滤，得到湿品117g，将湿品放置烘箱中烘干IOh得到干燥粗品47. 79g，粗品含量为94%，理论产量44. 92，粗品收率为89. 3%。实施例2取腺苷发酵液2. 5L放至混凝器中，测试其腺苷含量20. 12g/L，则理论产量50. 30g，加入浓度为25%的NaOH溶液(25%是NaOH的浓度，NaOH溶液是用NaOH固体与水配成的，25%是质量分数)调节PH值至8，然后在每分钟180转的搅拌速度下加入浓度为5%的聚合硫酸氯化铁铝(PAFCS)絮凝剂500mL，一分钟后，调整转速为40转/分，再搅拌7分钟，形成大块絮凝颗粒，静置15分钟后倾出上清液，用2L水洗涤沉渣，洗水与上清液混合，经板框压滤机压滤，沉渣也经板框压滤，两次得到滤液混合，总体为5L。将滤液在旋转式薄膜蒸发器中进行浓缩，滤液分四次浓缩完毕，每次1250ml，浓缩温度控制在65°C左右，真空-0. 095Mpa，待浓缩至1/4体积时放料。将浓缩液室温放置，自然冷却2h，然后继续降温至0°C，冷冻结晶24h，此时有大量结晶析出。将冷冻结晶液抽滤，得到湿品125g，将湿品放置烘箱中烘干IOh得到干燥粗品49. 22g，粗品含量为95%，理论产量46. 759g，粗品收率为
92.96%。实施例3取腺苷发酵液2. 5L放至混凝器中，测试其腺苷含量20. 12g/L，则理论产量50. 30g，加入浓度为25%的NaOH溶液(25%是NaOH的浓度，NaOH溶液是用NaOH固体与水配成的，25%是质量分数)调节PH值至7 8，然后在每分钟180转的搅拌速度下加入浓度为4%的聚合硫酸氯化铁铝(PAFCS)絮凝剂600mL，一分钟后，调整转速为60转/分，再搅拌5分钟，形成大块絮凝颗粒，静置10分钟后倾出上清液，用2L水洗涤沉渣，洗水与上清液混合，经板框压滤机压滤，沉渣也经板框压滤，两次得到滤液混合，总体为5L。将滤液在旋转式薄膜蒸发器中进行浓缩，滤液分四次浓缩完毕，每次1250ml，浓缩温度控制在65°C左右，真空-0. 095Mpa，待浓缩至1/5体积时放料。将浓缩液室温放置，自然冷却2h，然后继续降 温至0°C，冷冻结晶24h，此时有大量结晶析出。将冷冻结晶液抽滤，得到湿品117g，将湿品放置烘箱中烘干IOh得到干燥粗品47. 79g，粗品含量为94%，理论产量44. 92，粗品收率为96. 36%。实施例4取腺苷发酵液2. 5L放至混凝器中，测试其腺苷含量18. 48g/L，则理论产量46. 2g，加入浓度为30%的NaOH溶液(30%是NaOH的浓度，NaOH溶液是用NaOH固体与水配成的，25%是质量分数)调节PH值至7. 5，然后在每分钟180转的搅拌速度下加入浓度为4%的聚合硫酸氯化铁铝(PAFCS)絮凝剂500mL，一分钟后，调整转速为60转/分，再搅拌6分钟，形成大块絮凝颗粒，静置15分钟后倾出上清液，用2L水洗涤沉渣，洗水与上清液混合，经板框压滤机压滤，沉渣也经板框压滤，两次得到滤液混合，总体为5L。将滤液在旋转式薄膜蒸发器中进行浓缩，滤液分四次浓缩完毕，每次1250ml，浓缩温度控制在70°C左右，真空-0. 095Mpa，待浓缩至1/4体积时放料。将浓缩液室温放置，自然冷却2h，然后继续降温至0°C，冷冻结晶24h，此时有大量结晶析出。将冷冻结晶液抽滤，得到湿品122g，将湿品放置烘箱中烘干IOh得到干燥粗品47. 36g，粗品含量为94%，理论产量44. 52g，粗品收率为
93.27%。
权利要求
1.一种提取腺苷的方法，步骤为 A、将腺苷发酵液用碱溶液调节pH值至7 8，加热搅拌后加入絮凝剂，60±10分钟后，调整转速为60± 10转/分，再搅拌5 7分钟，静置10 15分钟后压滤，所述絮凝剂是聚合硫酸氯化铁铝PAFCS，加入絮凝剂的量占整个腺苷发酵液的体积百分比是(20±5)% ; B、将步骤A的滤液在旋转式薄膜蒸发器中进行浓缩得浓缩液，所述的浓缩温度控制在70±10°C，真空度-0. 095±. OlMpa ； C、将步骤B的浓缩液室温放置，自然冷却2±lh，然后继续降温至(TC以下，冷冻结晶得结晶液；· D、将步骤C的冷冻结晶液抽滤，得到湿品，将湿品放置烘箱中烘干10±lh得到干燥腺昔粗品。
2.根据权利要求I所述的提取腺苷的方法，其特征在于所述步骤A的碱溶液是NaOH液，聚合硫酸氯化铁铝PAFCS的质量浓度为4%。
3.根据权利要求2所述的提取腺苷的方法，其特征在于所述步骤A加热搅拌的加热温度为50 60°C，搅拌速度为180±20转/分，压滤是用板框压滤机实现压滤エ艺。
4.根据权利要求3所述的提取腺苷的方法，其特征在于所述步骤B的浓缩液体积是滤液体积的1/4 1/5。
5.所述根据权利要求I所述的提取腺苷的方法，其特征在于所述步骤C冷冻结晶的时间是24±3h。
全文摘要
本发明公开了一种提取腺苷的方法，步骤为A、将腺苷发酵液用碱溶液调节pH值至7～8，加热搅拌后加入絮凝剂，60±10分钟后，调整转速为60±10转/分，再搅拌5～7分钟，静置10～15分钟后压滤；B、将步骤A的滤液在旋转式薄膜蒸发器中进行浓缩得浓缩液，所述的浓缩温度控制在70±10℃，真空度-0.095±.01Mpa；C、将步骤B的浓缩液室温放置，自然冷却2±1h，然后继续降温至0℃以下，冷冻结晶得结晶液；D、将步骤C的冷冻结晶液抽滤，得到湿品，将湿品放置烘箱中烘干10±1h得到干燥腺苷粗品。采用本方法从发酵液中提取腺苷，得到的腺苷粗品含杂量少，产品腺苷损失较少，明显提高后续纯化工艺，精制工艺的腺苷收率。且整个提取方法经济有效。
文档编号C07H1/06GK102731601SQ20121020834
公开日2012年10月17日 申请日期2012年6月14日 优先权日2012年6月14日
发明者刘剑, 宁韩林, 朱义福, 谢畅丰, 郑凝坚, 郑明英, 雷剑芬 申请人:广东肇庆星湖生物科技股份有限公司