一种α-L-岩藻糖苷酶比色法检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及临床体外检测试剂技术领域，特别设及一种a-k岩藻糖巧酶比色法 检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] a-k岩藻糖巧酶（AlphaA-Fucosidase, A即）广泛分布于人体内的各种组织、 细胞及体液中，在肝、肺、脑、肾、膜、胎盘组织、细胞培养液中的成纤维细胞、白细胞W及血 清、尿液、唾液、泪液和垂体液中均含此酶;该酶基本功能是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖蛋 白及糖巧的水解代谢，其本质是一种糖蛋白，在包括免疫反应、信号转导等多种方面发挥重 要作用。a-k岩藻糖巧酶最初应用于岩藻糖巧胆积病的诊断，之后研究者陆续发现〇-心岩 藻糖巧酶对多种疾病的发生及发展均有重要的意义。Deugnier等于1980年首先发现原发性 肝癌患者血清〇-心岩藻糖巧酶升高，具有较高的特异性和灵敏性，多项研究证实a-k岩藻 糖巧酶可作为原发性肝癌的肿瘤标志物。
[0003] 化学显示法不能完全解决溶血和血清黄痘等对测定结果的影响并且该方法过程 比较繁琐，尤其在肝脏疾病诊断中最为突出。该试剂盒采用的是动力学连续检测法，W醋酸 盐为缓冲液，并在试剂中增添了 120 mmol/L氯化钢，使该试剂盒具有准确度好，稳定性强， 灵敏度高的特点。
【发明内容】
[0004] 针对于现有技术存在的问题，本发明提供了一种α-レ岩藻糖巧酶比色法检测试 剂盒，该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性和线性范围比常规的检测试剂盒要好，分 析灵敏度高，有利于试剂在临床上的推广应用。
[000引本发明是通过W下措施实现的： 一种0寸-岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R和校准品，其中 试剂R组成为：100 mmol/L醋酸钢、100 mmol/L 2-氯-4-硝基苯-0寸-岩藻糖巧(CNPF)、120 mmol/L氯化钢、7.7 mmol/L叠氮钢。所述试剂R在使用时和血清的比例250:25。
[0006] 本发明所使用的校准品为北京九强生物技术有限公司生产的AFU校准品。
[0007] 本发明的试剂盒在自动生化分析仪日立7180上进行，其具体使用方法如下： R:试剂 U:样品
生理盐水、U或 记录吸光度A1 记录吸光度A2 S:25 μ1; R:250 μ1 计算 ΔΑ/min 加入生理盐水、样本或校准品25 μ1,之后再加入R试剂250 μ1延迟3 min后，记录吸 光度Al，反应2min后记录吸光度值A2，计算ΔA/min。
[000引本发明的有益效果： 本发明提供的αΑ-岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒，W醋酸钢为缓冲体系，增强了试剂 的稳定性;通过添加 120 mmol/L氯化钢，降低了血清黄痘和溶血对试剂准确度的影响，提 高了试剂灵敏度。
【附图说明】
[0009] 图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。
【具体实施方式】
[0010] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
[00川实施例1 一种0寸-岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒，它包括试剂R和校准品。
[0012] 其中试剂R组成为： 二硫苏糖醇缓冲液 100 mmol/L 2-氯-4-硝基苯-日寸-岩藻糖巧(CNP巧 100 mmol/L 叠氮钢 7.7 mmol/L 本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用日立7180自动分析仪，操作 如下： 加入生理盐水、样本或校准品25山，之后再加入R试剂250 μ1延迟3min后，记录吸光 度值A1,反应2 min后记录吸光度值A2,计算ΔΑ/min。
[0013] 本实施例所使用的校准品为北京九强生物技术有限公司生产的AFU校准品。
[0014] 实施例2 一种〇寸-岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒，它包括试剂R和校准品。
[001引其中试剂R组成为： 醋酸钢缓冲液 100 mmol/L 2-氯-4-硝基苯-日寸-岩藻糖巧(CNP巧 100 mmol/L 氯化钢 50 mmol/L 叠氮钢 7.7 mmol/L 本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用日立7180自动分析仪，操作 如下： 加入生理盐水、样本或校准品25μ1,之后再加入R试剂25化1延迟3min后，记录吸光度 值A1,反应2min后记录吸光度值A2,计算Δ A/min。
[0016] 本实施例所使用的校准品为北京九强生物技术有限公司生产的AFU校准品。
[0017] 具体测定方法同实施例1。
[001引 实施例3 一种0寸-岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒，它包括试剂R和校准品。
[0019] 其中试剂R组成为： 醋酸钢缓冲液 100 mmol/L 2-氯-4-硝基苯-日寸-岩藻糖巧(CNP巧 100 mmol/L 氯化钢 100 mmol/L 叠氮钢 7.7 mmol/L 本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用日立7180自动分析仪，操作 如下： 加入生理盐水、样本或校准品25μ1,之后再加入R试剂25化1延迟3min后，记录吸光度 值A1,反应2min后记录吸光度值A2,计算Δ A/min。
[0020] 本实施例所使用的校准品为北京九强生物技术有限公司生产的AFU校准品。
[0021] 具体测定方法同实施例1。
[0022] 实施例4 一种〇寸-岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒，它包括试剂R和校准品。
[0023] 其中试剂R组成为： 醋酸钢缓冲液 100 mmol/L 2-氯-4-硝基苯-日寸-岩藻糖巧(CNP巧 100 mmol/L 氯化钢 120 mmol/L 叠氮钢 7.7 mmol/L 本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用日立7180自动分析仪，操作 如下： 加入生理盐水、样本或校准品25 μ1，之后再加入R试剂250 μ1延迟3 min后，记录吸 光度值A1，反应2 min后记录吸光度值A2,计算ΔΑ/min。
[0024] 本实施例所使用的校准品为北京九强生物技术有限公司生产的AFU校准品。
[0025] 具体测定方法同实施例1。
[0026] 对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
[0027] 准确度验证实验： 将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，市场上获得认可的一种准确度优异的α-1^-岩藻 糖巧酶比色法检测试剂盒（北京某公司生产）作为对照组进行对比实验，对40个样本进 行检测，检测的结果如图1-图3。
[0028] 通过图1-图3的检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检 测结果相关性分别为0.9972、0.9988、0.9997，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市 场上获得认可的具有优异准确度的〇寸-岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒有高度一致性，证 明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的 准确度。
[0029] 线性相关性验证实验： 找到〇-心岩藻糖巧酶高值样本为120.0 U/L，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不 同浓度的样本，依次为 120.0 U/L、96.0 U/L、72.0 U/U48.0 U/U24.0 U/L、0 U/L浓度 的样本，每个浓度水平各样本分别测定Ξ次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4 的试剂进行检测。检测结果如表1所示。
[0030] 表1实施例1-4线性相关验证实验检测结果_
' 上述检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0.990,但实施例2、3、4的检测I 结果大于0.998,与实施例1相比具有更好的线性相关性，运说明本发明试剂具有更好的 线性相关性。
[0031 ] 稳定性验证实验： 在2°c-8°c、无腐蚀性气体的避光环境中胆存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。四 种试剂每月选取同一样本测定其吸光度Ξ次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果 进行对比，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2。
[0032] 表2稳定性验证实验检测结果
实验结果显示，实施例1试剂在2°c-8°c、无腐蚀'生气体的避光环境中胆存15个月稳 定，而实施例2、3、4试剂在2°C-8°C、无腐蚀性气体的避光环境中胆存24个月稳定，说明在 试剂中醋酸钢缓冲体系和氯化钢二者共同作用有效的提高了 〇-心岩藻糖巧酶比色法检测 试剂盒的稳定性。
[0033] 分析灵敏度验证实验： 用本发明A巧J比色法检测试剂盒测试已知浓度在36.3 UAiL的样本，记录吸光度差值。 分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如表3所示。
[0034] 表3分析灵敏度实验结果
' 通过检测数据可知，实施例2 J、4检测试剂盒的吸光度差值均比实施例1的高，说明I 在试剂中醋酸钢缓冲体系和氯化钢二者共同作用有效的提高了 a-k岩藻糖巧酶比色法检 测试剂盒的分析灵敏度 综合W上分析，本发明提供的〇寸-岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒，在试剂R中醋酸钢 缓冲体系和氯化钢能够有效的提高试剂盒的稳定性和分析灵敏度，线性范围较好，试剂 的准确度也较好。因此，本发明提供的a-k岩藻糖巧酶比色法检测试剂盒有利于在市场中 进一步的推广使用。
【主权项】
1. 一种α-L-岩藻糖苷酶比色法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R和校准品，其 中试剂R组成为：100mmol/L醋酸钠、100mmol/L2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷(CNPF)、 120mmol/L氯化钠、7.7mmol/L叠氮钠。2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，醋酸钠缓冲液和氯化钠使试剂盒具有 准确度好，稳定性强，灵敏性高的特点。3. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R在使用时和血清的比例 250:25。
【专利摘要】本发明公开了一种α-L-岩藻糖苷酶比色法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R和校准品。通过在试剂R中以醋酸钠为缓冲体系和加入一定量的氯化钠，有效的提高了试剂盒的稳定性和分析灵敏度，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。
【IPC分类】G01N21/31, G01N33/52
【公开号】CN105486853
【申请号】CN201510973806
【发明人】甘宜梧, 罗维晓, 王绮
【申请人】山东博科生物产业有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月22日