专利名称：一种海葱皂甙c的提取分离方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其涉及ー种海葱皂甙C的提取分离方法。
背景技术：
海葱阜式C (Agapanthussaponin A)属三職阜苷类，分子式为C65Hltl4O33,分子量1413. 51。海葱皂甙C对环磷酸腺苷(cAMP)磷酸ニ酯酶有抑制活性，其IC5tl为112 μ M ;能抑制TPA诱导的32Ρ掺入到HeLa细胞磷脂中，在5 μ g/ml时，抑制率22. 5%。海葱皂甙C主要来源于百合科(Liliaceae)Chionndoxa gigantea Hort.的鳞莖。目前，国内尚未见海葱皂甙C的エ业提取纯化方法的相关文献和专利的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供ー种海葱皂甙C的提取分离方法，该方法操作简
单，广品含量尚。本发明是采用以下技术方案来实现的
1)取蓝光花鱗茎粉碎，加入超临界萃取釜中进行超临界CO2萃取，脱除油脂类物质，放出原料残渣；
2)原料残渣中加入50-80%こ醇溶液微波提取1-3次，过滤得到提取液；
3)提取液加入液体量的2-4%(W/V)的活性炭50-70°C保温脱色20_40min，过滤得脱色
液；
4)脱色液加入超滤膜系统中超滤，透过液再加入纳滤膜系统中浓縮，截留物干燥得到粗品；
5)以石油醚-こ酸こ酷-こ醇-水(6-7:2-5:5-7:4-7)作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品用下相溶解，注入高速逆流色谱仪，收集高含量海葱皂甙C流分，浓缩干燥即得海葱皂甙C产品。所述步骤I)中超临界CO2萃取温度为40_60°C，萃取压カ为15_25MPa，解析温度为30-50°C，解析压カ为5-9MPa，CO2流量为18_20L/h。所述步骤2)中微波提取功率为600-800W。所述步骤3)中超滤膜为截留分子量的3000-10000的中空纤维素超滤膜，纳滤膜为截留分子量为500-800的中空纤维素纳滤膜。所述步骤4)中高速逆流色谱仪转速750-900r/min,流动相流速I. 5-2. 5ml/min。本发明的积极效果是
O采用超临界CO2萃取杂质，因为海葱皂甙C不易被萃取出，而小分子和低极性的物质，很容易被萃取出，这种除杂方式操作简便，而且周期较短；
2)高速逆流色谱法分离，无需使用载体，減少了操作过程中样品的损失，分离效果好，制备量大。
具体实施例方式下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。实施例I :
蓝光花鱗茎粉碎，称取3kg，加入超临界萃取釜中进行超临界CO2萃取，萃取温度为600C，萃取压カ为25MPa，解析温度为50°C，解析压カ为9MPa，CO2流量为20L/h，脱除油脂类物质，放出原料残渣，加入80%こ醇溶液微波提取3次，微波提取功率为800w，过滤得到提取液，提取液加入液体量的4%(W/V)的活性炭70°C保温脱色20min，过滤得脱色液，脱色液加入截留分子量的3000的中空纤维素超滤膜系统中超滤，透过液再加入截留分子量为800的中空纤维素纳滤膜系统中浓缩，截留物干燥得到粗品；以石油醚-こ酸こ酷-こ醇-水(7:4:7:6)作为两相溶剂系统,混匀后置分液漏斗中静置分层,取上相为固定相，下相为流动相，将粗品用下相溶解，通过进样阀进样，毎次进样量为150mg，设定色谱仪转速为850r/min，流动相流速为2. 5ml/min，收集高含量海葱皂甙C流分，浓缩干燥即得海葱皂甙C产品， 含量99. 1%。实施例2:
蓝光花鱗茎粉碎，称取3kg，加入超临界萃取釜中进行超临界CO2萃取，萃取温度为400C，萃取压カ为15MPa，解析温度为30°C，解析压カ为5MPa，CO2流量为18L/h，脱除油脂类物质，放出原料残渣，加入70%こ醇溶液微波提取3次，微波提取功率为600w，过滤得到提取液，提取液加入液体量的3%(W/V)的活性炭50°C保温脱色40min，过滤得脱色液，脱色液加入截留分子量的10000的中空纤维素超滤膜系统中超滤，透过液再加入截留分子量为500的中空纤维素纳滤膜系统中浓缩，截留物干燥得到粗品；以石油醚-こ酸こ酷-こ醇-水(6:4:7:6)作为两相溶剂系统,混匀后置分液漏斗中静置分层,取上相为固定相，下相为流动相，将粗品用下相溶解，通过进样阀进样，毎次进样量为200mg，设定色谱仪转速为SOOr/min，流动相流速为2. Oml/min，收集高含量海葱皂甙C流分，浓缩干燥即得海葱皂甙C产品，含量98. 6%。实施例3
蓝光花鱗茎粉碎，称取3kg，加入超临界萃取釜中进行超临界CO2萃取，萃取温度为500C，萃取压カ为20MPa，解析温度为40°C，解析压カ为7MPa，CO2流量为20L/h，脱除油脂类物质，放出原料残渣，加入70%こ醇溶液微波提取2次，微波提取功率为800w，过滤得到提取液，提取液加入液体量的3%(W/V)的活性炭60°C保温脱色30min，过滤得脱色液，脱色液加入截留分子量的6000的中空纤维素超滤膜系统中超滤，透过液再加入截留分子量为600的中空纤维素纳滤膜系统中浓缩，截留物干燥得到粗品；以石油醚-こ酸こ酷-こ醇-水(5:2:5:4)作为两相溶剂系统,混匀后置分液漏斗中静置分层,取上相为固定相，下相为流动相，将粗品用下相溶解，通过进样阀进样，毎次进样量为250mg，设定色谱仪转速为SOOr/min，流动相流速为2. Oml/min，收集高含量海葱皂甙C流分，浓缩干燥即得海葱皂甙C产品，含量98. 3%。实施例4:
蓝光花鱗茎粉碎，称取10kg，加入超临界萃取釜中进行超临界CO2萃取，萃取温度为550C，萃取压カ为22MPa，解析温度为45°C，解析压カ为7MPa，CO2流量为20L/h，脱除油脂类物质，放出原料残渣，加入60%こ醇溶液微波提取2次，微波提取功率为600w，过滤得到提取液，提取液加入液体量的3%(W/V)的活性炭65°C保温脱色35min，过滤得脱色液，脱色液加入截留分子量的6000的中空纤维素超滤膜系统中超滤，透过液再加入截留分子量为600的中空纤维素纳滤膜系统中浓缩，截留物干燥得到粗品；以石油醚-こ酸こ酷-こ醇-水(7:5:7:6)作为两相溶剂系统,混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品用下相溶解，通过进样阀进样，毎次进样量为250mg，设定色谱仪转速为750r/min，流动相流速为2. 5ml/min，收集高含量海葱皂甙C流分，浓缩干燥即得海葱皂甙C产品，含量99. 0%。 实施例5:
蓝光花鱗茎粉碎，称取20kg，加入超临界萃取釜中进行超临界CO2萃取，萃取温度为500C，萃取压カ为18MPa，解析温度为40°C，解析压カ为6MPa，CO2流量为18L/h，脱除油脂类物质，放出原料残渣，加入70%こ醇溶液微波提取2次，微波提取功率为800w，过滤得到提取液，提取液加入液体量的3%(W/V)的活性炭60°C保温脱色25min，过滤得脱色液，脱色液加入截留分子量的8000的中空纤维素超滤膜系统中超滤，透过液再加入截留分子量为500 的中空纤维素纳滤膜系统中浓缩，截留物干燥得到粗品；以石油醚-こ酸こ酷-こ醇-水(7:3:5:7)作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品用下相溶解，通过进样阀进样，毎次进样量为150mg，设定色谱仪转速为900r/min，流动相流速为I. 5ml/min，收集高含量海葱皂甙C流分，浓缩干燥即得海葱皂甙C产品，含量98. 0%。
权利要求
1.ー种海葱皂甙C的提取分离方法，其特征在于包含以下步骤(1)取蓝光花鱗茎粉碎，加入超临界萃取釜中进行超临界CO2萃取，脱除油脂类物质，放出原料残渣；(2)原料残渣中加入50-80%こ醇溶液微波提取1-3次，过滤得到提取液；(3)提取液加入液体量的2-4%(W/V)的活性炭50-70°C保温脱色20_40min，过滤得脱色液；(4)滤液加入超滤膜系统中超滤，透过液再加入纳滤膜系统中浓缩，截留物干燥得到粗品;(5)以石油醚-こ酸こ酯-こ醇-水(6-7:2-5:5-7:4_7)作为两相溶剂系统，混匀后置 分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品用下相溶解，注入高速逆流色谱仪，收集高含量海葱皂甙C流分，浓缩干燥即得海葱皂甙C产品。
2.如权利要求I所述的海葱皂甙C的提取分离方法，其特征在于所述步骤(I)中超临界CO2萃取温度为40-60°C，萃取压カ为15-25MPa，解析温度为30_50°C，解析压カ为5-9MPa, CO2 流量为 18_20L/h。
3.如权利要求I所述的海葱皂甙C的提取分离方法，其特征在于所述步骤(2)中微波提取功率为600-800w。
4.如权利要求I所述的海葱皂甙C的提取分离方法，其特征在于所述步骤(3)中超滤膜为截留分子量的3000-10000的中空纤维素超滤膜，纳滤膜为截留分子量为500-800的中空纤维素纳滤膜。
5.如权利要求I所述的海葱皂甙C的提取分离方法，其特征在于所述步骤(4)中高速 逆流色谱仪转速750-900r/min,流动相流速I. 5-2. 5ml/min。
全文摘要
本发明涉及一种海葱皂甙C的提取分离方法，方法是将蓝光花鳞茎粉碎，加入超临界萃取釜中进行超临界CO2萃取，脱除油脂类物质，放出原料残渣，加入50-80%乙醇溶液微波提取，提取液加入活性炭脱色，过滤得脱色液，脱色液加入超滤膜系统中超滤，透过液再加入纳滤膜系统中浓缩，截留物干燥得到粗品，再采用高速逆流色谱法对粗品进行分离纯化，得到海葱皂甙C。本方法制备量大，样品损失少，生产周期短，效率高，污染小，适合工业化生产。
文档编号C07J21/00GK102827236SQ201210346089
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月18日 优先权日2012年9月18日
发明者刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司