专利名称：一种卷团素c的制备方法
技术领域：
本发明属于中药提取分离技术领域，涉及ー种从粘液卷团叶中分离制备卷团素C的方法。
背景技术：
卷团素C来源于番蒸枝科植物番蒸枝科(Annonaceae)粘液卷团Rolliniamucosa (Jacq. ) Vai 11.的叶。粘液卷团叶主要有效成分为こ酰精宁类化合物，以卷团素C含量最高。卷团素C具有细胞毒活性，有显著的选择性细胞毒活性，对A-549、MCF-7、HT-29、A-498、PC-3和PACA-2的细胞株ED5tl (μ g/ml)依次为1.3,1. 1、0· 063、L 4、0· 29和O. 11。目前，番荔枝科植 物次生代谢物こ酰精宁类(annonanceous acetogenins,AAGs)化合物被视为新的抗肿瘤药物的潜在资源，AAGs能抑制人卵巢瘤IA9细胞复制、诱导癌细胞凋亡，是强效的复合物I抑制剂，抗肿瘤药物的候选药物。目前，尚未见高含量卷团素C的制备方法相关专利报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种卷团素C的制备方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
(1)取粘液卷团叶，经粉碎处理，加8-15倍50-80%こ醇溶液在30-45°C的温度下进行连续逆流超声提取30-80min，过滤，得到提取液；
(2)提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为100-500的纳滤膜浓缩，操作压カ为O. 5-2. 5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；
(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸こ酷-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集卷团素C组分；
(4)将卷团素C组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C。所述步骤(I)中超声频率为40-65KHZ。所述步骤(3)中石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-7:5-7:4-7:3-5。本方法的积极效果是
(1)本方法采用连续逆流超声提取，实现了超声提取和连续逆流提取同时进行，提取效果好，同时实现连续作业；
(2)本方法采用膜分离技术，能有效去除多种杂质，且不会破坏有效成分的生物活性，而且与连续逆流超声提取相结合，实现提取浓缩连续作业；
(3)本方法采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短，解决了柱层析效率低而且污染严重的技术缺陷；
(4)本方法エ艺步骤操作较简单，易操作，所得产品纯度高。下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式
实施例I:
取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取1kg，加8倍80%こ醇溶液在45°C的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为60KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为3000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压カ为O. 8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比5:5:6:3石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主 机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量95. 7%。实施例2:
取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取1kg，加12倍50%こ醇溶液在30°C的温度下进行连续逆流超声提取80min，超声频率为45KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为1000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压カ为l.SMPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比7:7:7:4石油醚-こ酸こ酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量96. 4%。实施例3:
取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取2kg，加10倍70%こ醇溶液在35°C的温度下进行连续逆流超声提取60min，超声频率为40KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为1000的超滤膜超滤和截留分子量为200的纳滤膜浓缩，操作压カ为2. 8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比6:6:7:5石油醚-こ酸こ酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量96. 5%。实施例4:
取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取5kg，加8倍70%こ醇溶液在40°C的温度下进行连续逆流超声提取40min，超声频率为50KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为3000的超滤膜超滤和截留分子量为300的纳滤膜浓缩，操作压カ为O. 5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比5:6:7:5石油醚-こ酸こ酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量97. 8%。 实施例5:
取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取10kg，加15倍80%こ醇溶液在45°C的温度下进行连续逆流超声提取70min，超声频率为65KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为1000的超滤膜超滤和截留分子量为100的纳滤膜浓缩，操作压カ为2. 5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比7:6:7:4石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监測，检测波长为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回 流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量97. 9%。
权利要求
1.一种卷团素C的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)取粘液卷团叶，经粉碎处理，加8-15倍50-80%こ醇溶液在30-45°C的温度下进行连续逆流超声提取30-80min，过滤，得到提取液；(2)提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为100-500的纳滤膜浓缩，操作压カ为O. 5-2. 5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸こ酷-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集卷团素C组分；(4)将卷团素C组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C。
2.根据权利要求I所述的ー种卷团素C的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中超声频率为40-65KHz。
3.根据权利要求I所述的ー种卷团素C的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-7:5-7:4-7:3-5。
全文摘要
本发明涉及一种操作简单、污染少的卷团素C的制备方法，工艺步骤为(1)取粘液卷团叶，经粉碎处理，用醇类溶液进行连续逆流超声提取，过滤得到提取液；(2)提取液通过膜分离系统，浓缩干燥得粗提物；(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相为固定相，下相为流动相，收集卷团素C组分；(4)将卷团素C组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶。本发明制备卷团素C，产品纯度高，易于实现产业化放大。
文档编号C07D307/58GK102827112SQ20121034607
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月18日 优先权日2012年9月18日
发明者刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司