专利名称：一种厚花番荔枝灵的制备方法
技术领域：
本发明属于中药提取分离技术领域，涉及ー种从厚花番荔枝种子中分离制备厚花番荔枝灵的方法。
背景技术：
厚花番蒸枝灵，白色无定形粉末，来源于番蒸枝科植物厚花番蒸枝crassiflora的种子。厚花番荔枝种子主要有效成分为こ酰精宁类化合物，以厚花番荔枝灵为主。厚花番荔枝灵具有抗肿瘤活性，对下列肿瘤细胞的ED50( μ g/ml)为A-549(0.006)；HT-29 (0. 6) ；MCF-7 (0. 004) ；RPMI-7951 (0. 001) ;U_251 (0. 01)。其作用强度与阿霉素相当。 目前,番蒸枝科植物次生代谢物番蒸枝こ酰精宁类(annonanceous acetogenins,AAGs)化合物被视为新的抗肿瘤药物的潜在资源，AAGs能抑制人卵巢瘤IA9细胞复制、诱导癌细胞凋亡，是强效的复合物I抑制剂，抗肿瘤药物的候选药物。目前，尚未见高含量厚花番荔枝灵的制备方法相关专利报道。
发明内容
本发明的目的是提供ー种厚花番荔枝灵的制备方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
(1)取厚花番荔枝种子，超临界ニ氧化碳流体萃取药材中的油脂类物质；
(2)脱脂药材加6-8倍80-90%こ醇溶液，在30-45°C的温度下，进行连续逆流超声提取30-70min,过滤得到提取液，浓缩干燥得粗提物；
(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的厚花番荔枝灵，其两相溶剂系统为石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集厚花番荔枝灵组分；
(4)将厚花番荔枝灵组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得厚花番荔枝灵。所述步骤(I)中所述超临界萃取温度为35_45°C，压カ为25_30MPa，时间为20_50mino所述步骤(2)中超声频率为40-60KHZ。所述步骤(3)中石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水溶剂系统的体积比为4-7:3-4:5-7:2-3。本方法积极效果是
(1)本方法采用超临界流体萃取技术脱除油脂类物质，高效环保；
(2)本方法采用连续逆流超声提取，实现了超声提取和连续逆流提取同时进行，提取效果好，同时实现连续作业；
(3)本方法采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短，解决了柱层析效率低而且污染严重的技术缺陷；
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例I :
取厚花番荔枝种子，取lkg，放入超临界萃取装置中，萃取温度为35°C，萃取压カ为30MPa，CO2流量为15L/h，萃取20min，残留物加6倍90%こ醇溶液在45°C的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为60KHz，过滤，得到提取液，减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的厚花番荔枝灵，以体积比5:4:6:2石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集厚花番荔枝灵组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得厚花番荔枝灵，含量98. 1%。
实施例2:
取厚花番荔枝种子，取lkg，放入超临界萃取装置中，萃取温度为45°C，萃取压カ为29MPa，CO2流量为15L/h，萃取50min，残留物加8倍80%こ醇溶液在30°C的温度下进行连续逆流超声提取70min，超声频率为60KHz，过滤，得到提取液，减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的厚花番荔枝灵，以体积比7:4:7:2石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集厚花番荔枝灵组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得厚花番荔枝灵，含量97. 4%。实施例3:
取厚花番荔枝种子，取lkg，放入超临界萃取装置中，萃取温度为38°C，萃取压カ为26MPa，C02流量为18L/h，萃取30min，残留物加7倍850%こ醇溶液在35°C的温度下进行连续逆流超声提取60min，超声频率为40KHz，过滤，得到提取液，减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的厚花番荔枝灵，以体积比6:4:7:3石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集厚花番荔枝灵组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得厚花番荔枝灵，含量96. 9%。实施例4:
取厚花番荔枝种子，取lkg，放入超临界萃取装置中，萃取温度为40°C，萃取压カ为30MPa，CO2流量为17L/h，萃取50min，残留物加8倍90%こ醇溶液在40°C的温度下进行连续逆流超声提取50min，超声频率为50KHz，过滤，得到提取液，减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的厚花番荔枝灵，以体积比4:3:5:2石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集厚花番荔枝灵组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得厚花番荔枝灵，含量97. 6%。
实施例5:
取厚花番荔枝种子，取lkg，放入超临界萃取装置中，萃取温度为42°C，萃取压カ为25MPa，CO2流量为15L/h，萃取40min，残留物加6倍90%こ醇溶液在45°C的温度下进行连续逆流超声提取40min，超声频率为50KHz，过滤，得到提取液，减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的厚花番荔枝灵，以体积比7:3:7:3石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做 流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集厚花番荔枝灵组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得厚花番荔枝灵，含量98. 3%。
权利要求
1.ー种厚花番荔枝灵的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)取厚花番荔枝种子，超临界ニ氧化碳流体萃取药材中的油脂类物质； (2)脱脂药材加6-8倍80-90%こ醇溶液，在30-45°C的温度下，进行连续逆流超声提取30-70min,过滤得到提取液，浓缩干燥得粗提物； (3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的厚花番荔枝灵，其两相溶剂系统为石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集厚花番荔枝灵组分； (4)将厚花番荔枝灵组分进行真空浓缩，析出 结晶，滤出结晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得厚花番荔枝灵。
2.根据权利要求I所述的ー种厚花番荔枝灵的制备方法，其特征在于所述步骤(I)中所述超临界萃取温度为35-45°C，压カ为25-30MPa，时间为20_50min。
3.根据权利要求I所述的ー种厚花番荔枝灵的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中超声频率为40-60KHz。
4.根据权利要求I所述的ー种厚花番荔枝灵的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水溶剂系统的体积比为4-7:3-4:5-7:2-3。
全文摘要
本发明涉及一种操作简单、污染少的厚花番荔枝灵的制备方法，工艺步骤为(1)取厚花番荔枝种子，超临界二氧化碳流体萃取药材中的油脂类物质；(2)脱脂药材用醇类溶液进行连续逆流超声提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得粗提物；(3)采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的厚花番荔枝灵，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相为固定相，下相为流动相，收集厚花番荔枝灵组分；(4)将厚花番荔枝灵组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入乙酸乙酯回流溶解，放置重结晶。本发明制备厚花番荔枝灵，产品纯度高，易于实现产业化放大。
文档编号C07D307/58GK102827114SQ20121036836
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月28日 优先权日2012年9月28日
发明者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司