超声波提取桑叶槲皮素的方法
【专利摘要】本发明公开了超声波提取桑叶槲皮素的方法，包括如下步骤：取过20目筛的干桑叶粉加入石油醚脱脂后收集残渣，将残渣烘干后按液料比为5～35:1加入体积分数为40～90％的乙醇溶液，在125～250W、55～80℃条件下超声波提取3次，每次10～60min，抽滤，合并滤液，真空减压浓缩，回收乙醇，用甲醇溶解得桑叶槲皮素提取液，该提取方法操作简单，能够用于工业化提取，并且提取时间短，提取效率高，平均提取效率达11.13mg/g，为桑叶中槲皮素的利用奠定了基础。
【专利说明】超声波提取桑叶槲皮素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学领域，具体涉及超声波提取桑叶槲皮素的方法。
【背景技术】
[0002] 桑叶是蔷薇目桑科桑属桑种植物的叶，味苦、甘，性寒，不仅可用于养蚕，还可作为 中药入药，在《神农本草》、《本草纲目》及《中国人民共和国药典》均有详细记载，被卫生部 认定为药食两用植物。桑叶中含有多种黄酮类物质，包括芸香苷、桑苷、槲皮素、异槲皮素、 槲皮素-3-0-葡糖苷等。槲皮素化学名为3,5,7,3'，4' -五羟基黄酮，属于黄酮醇类化合 物，是桑叶中的重要活性物质。槲皮素具有抗氧化、抗菌消炎、抗血小板聚集、抗癌、抗心律 失常、抗多药耐药作用、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等多种生物活性作用，是目前国内外研究 的热点课题。我国是栽桑养蚕大国，拥有丰富的桑树资源，目前全国有桑园约1197万亩，而 每年随着我国茧丝绸产业下滑，桑园利用率逐年下降，造成资源的极大浪费。桑叶中含有的 丰富活性物质，可作为天然活性产物提取的植物来源。
[0003] 目前，桑叶中槲皮素提取工艺文献报道较少，主要关于桑叶总黄酮的提取，浸提 法、加热法是桑叶黄酮物质传统的提取方法，具有操作简单的优点，但存在提取时间长、试 剂消耗大、温度高、提取率低等问题。因此，急需一种提取桑叶中槲皮素，具有操作方法简 单，提取时间短，提取效率1?等优点。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提供超声波提取桑叶槲皮素的方法，操作简单，提取 时间短，提取效率高。
[0005] 为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
[0006] 超声波提取桑叶槲皮素的方法，包括如下步骤：取过20目筛的干桑叶粉加入石油 醚脱脂后收集残渣，将残渣烘干后按液料质量比为5?35:1加入体积分数为40?90%的 乙醇溶液，在125?250W、55?80°C条件下超声波提取3次，每次10?60min，抽滤，合并 滤液，真空减压浓缩，回收乙醇，用甲醇溶解得桑叶槲皮素提取液。
[0007] 优选的，按干桑叶粉与石油醚的比例为1:20 (g/mL)加入石油醚。
[0008] 优选的，所述脱脂为在50 C超声波回流提取2次，每次20min。
[0009] 优选的，所述残渣是在温度为70°C条件下烘干。
[0010] 优选的,所述料液质量比为15?30:1。
[0011] 更优选的，所述料液质量比为26:1。
[0012] 优选的，所述乙醇溶液的体积分数为40?80%。
[0013] 更优选的，所述乙醇溶液的体积分数为51%。
[0014] 更优选的，所述超声波提取是在150?225W、60?75°C条件下提取10?30min。
[0015] 最优选的，所述超声波提取是在200W、70°C条件下提取30min。
[0016] 本发明的有益效果在于：本发明公开了超声波提取桑叶槲皮素的方法，以桑叶槲 皮素提取量为指标，通过单因素试验，探讨液料比、乙醇体积分数、超声时间、超声功率及超 声温度等对槲皮素提取量的影响，利用响应面法对影响槲皮素提取量的4个主要因素进行 优化，分别获得最佳乙醇体积分数、液料比、超声功率和超声温度，在最佳条件下桑叶槲皮 素的提取效率高，达11. 13mg/g ;并且与其他方法相比使用的乙醇体积分数和超声温度更 低，可以减少试剂用量和节约能耗，为桑叶槲皮素的利用奠定了基础。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：
[0018] 图1为液料比对槲皮素提取量的影响。
[0019] 图2为乙醇体积分数对槲皮素提取量的影响。
[0020] 图3为超声时间对槲皮素提取量的影响。
[0021] 图4为超声功率对槲皮素提取量的影响。
[0022] 图5为超声温度对槲皮素提取量的影响。
[0023] 图6为乙醇体积分数㈧和液料比⑶对槲皮素提取量的等高线和响应面图（A 为乙醇体积分数对槲皮素提取量的等高线和响应面图；B为液料比对槲皮素提取量的等高 线和响应面图）。
[0024] 图7为乙醇体积分数（A)和超声功率（C)对槲皮素提取量的等高线和响应面图（A 为乙醇体积分数对槲皮素提取量的等高线和响应面图；B为超声功率对槲皮素提取量的等 高线和响应面图）。
[0025] 图8为乙醇体积分数（A)和超声温度（D)对槲皮素提取量的等高线和响应面图（A 为乙醇体积分数对槲皮素提取量的等高线和响应面图；B为超声温度对槲皮素提取量的等 高线和响应面图）。
[0026] 图9为液料比⑶和超声功率（C)对槲皮素提取量的等高线和响应面图（A为液 料比对槲皮素提取量的等高线和响应面图；B为超声功率对槲皮素提取量的等高线和响应 面图）。
[0027] 图10为液料比⑶和超声温度⑶对槲皮素提取量的等高线和响应面图（A为液 料比对槲皮素提取量的等高线和响应面图；B为超声温度对槲皮素提取量的等高线和响应 面图）。
[0028] 图11为超声功率（C)和超声温度⑶对槲皮素提取量的等高线和响应面图（A为 超声功率对槲皮素提取量的等高线和响应面图；B为超声温度对槲皮素提取量的等高线和 响应面图）。
【具体实施方式】
[0029] 下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体 条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0030] 本发明实施例中使用的桑叶由重庆市绿之歌农业科技开发有限公司提供，经鉴定 为桑树的叶，经过干燥粉碎后过20目筛。槲皮素标准品（纯度99%)经中国食品药品检定 研究院检测；无水乙醇、石油醚、甲醇、磷酸（分析纯）购自成都市科龙化工试剂厂。
[0031] 本发明使用的实验仪器如下：101A-2型数显电热鼓风干燥箱购自上海浦东荣丰 科学仪器有限公司JA2003A电子分析天平购自上海精天电子仪器有限公司；KQ-250DB型 超声波清洗仪购自昆山市超声仪器有限公司；5810型台式高速离心机购自德国Eppendorf 公司；C-2010A高效液相色谱仪购自日本岛津公司；RE52CS-1旋转蒸发器购自上海亚荣生 化仪器厂；HH-8数显恒温水浴锅购自常州奥华仪器有限公司。
[0032] -、超声波提取桑叶槲皮素
[0033] 超声波提取桑叶槲皮素的方法，包括如下步骤：采摘新鲜桑叶，干燥后粉碎，过20 目筛；然后称取过20目筛的干桑叶粉0. 5g，按1:20 (g/mL)加入石油醚，接着在50°C超声波 回流提取2次，每次20min，弃去上清液，残渣于70°C烘箱中烘干，在桑叶残渣中，按照液料 比加入乙醇溶液，超声波提取3次，抽滤，合并滤液，真空减压浓缩，回收乙醇，定容至50mL， 获得桑叶槲皮素提取液。
[0034] 二、槲皮素检测方法
[0035] 1、色谱条件
[0036] 高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC)检测条件：色 谱柱：Alltima C18(4.6mmX250mm，5ym);流动相：甲醇和0.2%磷酸（体积比75:25);检 测器紫外波长：360nm ;进样量：5μ L ;流速：1. OmL/min ;柱温：25°C。
[0037] 桑叶槲皮素提取原液稀释200倍进样，吸取桑叶槲皮素提取原液0. ImL定容至 20mL。桑叶槲皮素提取量计算公式如下。
[0038]
【权利要求】
1. 超声波提取桑叶槲皮素的方法，其特征在于，包括如下步骤：取过20目筛的干桑叶 粉加入石油醚脱脂后收集残渣，将残渣烘干后按液料质量比为5?35:1加入体积分数为 40?90%的乙醇溶液，在125?250W、55?80°C条件下超声波提取3次，每次10?60min， 抽滤，合并滤液，真空减压浓缩，回收乙醇，用甲醇溶解得桑叶槲皮素提取液。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：按干桑叶粉的质量与石油醚的体积比为 1:20加入石油醚。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述脱脂为在50°C超声波回流提取2次， 每次20min。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述残渣是在温度为70°C条件下烘干。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述料液质量比为15?30:1。
6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述料液质量比为26:1。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述乙醇溶液的体积分数为40?80%。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述乙醇溶液的体积分数为51 %。
9. 根据权利要求1?8任一项所述的方法，其特征在于：所述超声波提取是在150? 225W、60?75°C条件下提取10?30min。
10. 根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述超声波提取是在200W、7(TC条件下 提取30min。
【文档编号】C07D311/40GK104402854SQ201410657300
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月12日 优先权日:2014年11月12日
【发明者】王海燕, 曾秀, 李睿, 黄勇, 王介平, 王永亮, 周婵, 吕金凤, 张成平 申请人:重庆市畜牧科学院