一种从茶多酚提取物提取高纯度egcg的制备方法
【专利摘要】本发明从低含量茶多酚粗提物提取一种高纯度EGCG的制备工艺，解决已有制备工艺污染高，成本高，收率低，工艺繁琐的问题。包括如下步骤：(1)粗提物处理：取茶多酚粗提物（EGCG含量重百分比20%-60%），用其重量5-8倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤。(2)聚酰胺柱层析：样品上样量为5-8：1，用梯度乙醇水溶液洗脱，洗脱液PH值均以冰醋酸调节至PH4-5。分步收集，浓缩备用。(3)自制MCC柱层析：以步骤(2)下的洗脱液浓缩物为原料，以2-3倍体积水稀释，以柱体积20-30:1上样，洗脱液为8%乙醇水溶液（以冰醋酸调节PH值至4-5），分步收集EGCG重量百分比含量为95-98%及98%以上的溶液。(4)浓缩干燥：对各段产品浓缩干燥，冷冻保存。
【专利说明】一种从茶多酚提取物提取高纯度[(30(3的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明与药品、健康食品、食品、饮料、化妆品的原料及其添加剂生产工艺有关。
【背景技术】
[0002]郎⑶是表没食子儿茶素没食子酸酯的简称，是从茶叶中分离得到的儿茶素类单体，是茶多酚生物活性的主要成份，其分子式为￠221118011( (2? 3^-5，办0x7-2-(3,4，—3，4—(11117己!'0—211—0111X1111611—3—71 3, 4，5—1:11117己!'0X7)36112081:6 ), ^茶树中主要的活性和水溶性成份，占绿茶毛重的9%-13%。因郎⑶具有非常强的抗氧化活性，在食品工业上用于抗氧化、保鲜、祛臭，医药工业上用于抗菌、抗癌、抗衰老，日化产品上作特殊功能添加剂。
[0003]目前，茶叶消费日趋高档化，而中、低档茶受消费人群影响常滞销、积压，制约着茶叶产业的发展。与此同时，在茶叶生产及加工过程中还有大量修剪枝叶及加工副产品，这些产品多作为废弃物而未加以充分利用。从老茶叶及茶树修剪枝叶中提取高纯度郎⑶不仅能解决传统废弃茶资源的问题，而且可以从低廉原料中获得价值极高的食品及医药原料。
[0004]国内外对于郎⑶提取分离方法的研究中，大多只局限于茶多酚的提取，由于茶多酚中除了郎⑶外，还含有一定含量的其他物质，因此提取出的郎⑶纯度不高.因此，有一些研究人员开始了对单组分郎⑶的提取。目前大多数人都选择单一的传统硅胶柱层析来制取高含量产物，这样就导致了提取物的纯度偏低、试剂复杂、污染较大、工艺重复繁琐等缺陷；或者是利用高效逆流色谱技术、分子印迹聚合物的制备等先进设备简单却高成本的制得，达不到工业生产的要求。随着工业原料例如苯乙烯聚合物填料、聚酰胺填料等的工业化生产技术的改进和成本的降低，在传统生产工艺上引入新型调料，研发一套更为低廉、环保、高效、适宜工业化生产的郎⑶生产工艺极为必要。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种生产成本低、工艺简单、无污染、收率高、纯度高、可循环使用、适合工业化生产的高纯度郎⑶的制备工艺。
[0006]本发明一种高纯度郎⑶的制备工艺，包括如下步骤:
(1)粗提物处理:取茶多酚粗提物含量重百分比20%-6090，用其重量5-8倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤。
[0007](2)聚酰胺柱层析:所溶样品以柱体积5-8:1上样，用乙醇水溶液梯度洗脱，洗脱液四值均以冰醋酸调节至四4-5。洗脱液分别为水(2-387),30%乙醇(4-587),40%乙醇(5-887).分步收集，合并无郎⑶临近杂质的洗脱液，浓缩备用。
[0008](3)1(^柱层析:以步骤⑵下的洗脱液浓缩物为原料，以2-3倍体积水稀释，以柱体积20-30:1上样，洗脱液为8%乙醇水溶液(以冰醋酸调节值至4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量为95-98%及98%以上的溶液。
[0009](4)浓缩干燥:对各段产品浓缩干燥，冷冻保存。
[0010]步骤(1)中茶多酚粗提物原料为含量20-60%的茶叶下脚料提取物；所有步骤中所述溶液均为工业乙醇水溶液。
[0011]步骤(1)中茶多酚粗提物原料中若包含咖啡因、￡(?等杂质，步骤(2)水洗阶段可收集重量百分比含量85%以上的咖啡因副产物，步骤(3)中可收集到重量百分比含量80%以上的￡(?等副产物。
[0012]步骤⑶中所述自制层析材料的制备方法:以采用悬浮聚合法在优化合成条件下合成的新型聚合物树脂，其中V (苯乙烯):V (二乙烯苯)=8-10: 1，水相分散液为2.5%聚乙烯醇及5%池的水溶液，有机相中20%甲苯为致孔剂，5%过氧化苯甲酰为引发齐0，V (水相):7 (有机相)=4:1混合，反应温度80 (土丨)1、反应时间10-12匕所得聚合物粒径为 100-12011111。
[0013]步骤(2) (3)所用层析材料分别为聚酰胺(80-100目 ?、自制IX，其预处理以洗脱液淋洗1-287，实验完毕尾处理以工业乙醇清洗2-387即可再生使用。
[0014]步骤(3)中浓缩干燥方法为喷雾干燥。
[0015]步骤(2) (3)中杂质较多的洗脱液浓缩干燥后作为原材料进入下次循环，所有步骤中乙醇废液经统一回收后循环使用。
[0016]本发明除使用冰醋酸调节各步骤所需四值外，整个工艺只使用工业乙醇一种有机溶剂，溶剂安全且更易回收循环使用，减少成本和污染。
[0017]80-100目的聚酰胺材料吸附适中，载量大，具有对多酚类化合物的优良分离性能，反相分离性能强，可有效去除郎⑶大部分杂质。
[0018]自制1(1:稳定性高，载量大，分离度高，二次柱层析对步骤(2)难以去除完全的杂质进行了分离，使郎⑶的重量百分比可达98%以上，且收率有了较大提高。
[0019]聚酰胺层析材料和自制1(1:层析材料均可再生重复利用，以工业乙醇淋洗2-3倍柱体即可使(2) (3)层析材料再生循环使用。
[0020]整个工艺所用工业乙醇经收集后统一回收，循环使用。
[0021]用测定上述所得产品的郎⑶含量，最高可达99%以上。
[0022]本发明中郎⑶含量测定方法为测定(按外标法测定)。
[0023]色谱条件为:流动相:甲醇:0.1 %磷酸=30:70 ；
色谱柱:依利特 ￠18 (4.6 X 250111111)；
柱温:30。〇；
流速:1.01111 / 111111 ；
测定波长:27911111, 10111进样。
[0024]本发明与现有技术相比具有如下优点:
(1)本发明精制工艺简单，收率高，以反相层析克服了含杂质郎⑶冷冻状态下亦难结晶的问题。根据不同用途对纯度的要求，按郎⑶重量百分比计，纯度可达95%?99%，收率可达85%以上，其中99%以上产品得率达70-80%。
[0025](2)本发明茶多酚粗提物原料中若包含咖啡因、￡(?等杂质，工艺中可收集重量百分比含量85%以上的咖啡因及重量百分比含量80%以上的￡(?等副产物。
[0026](3)本发明选择工艺充分考虑郎⑶化学特性和溶解性，全反相层析，所有溶解过程均可使用乙醇水溶液溶解，避免了原料不可溶或者层析上样前处理繁琐的问题。
[0027](4)本发明使用溶剂单一，工业乙醇极易回收循环，价格低廉，安全无毒，对环境无污染。
[0028](5)本发明所用层析材料价格低廉，且易于洗脱再生，可多次利用；避免了现有工艺对高设备、高耗材的要求。
[0029](6)本发明自制层析材料稳定性高，吸附量大，杂质分离率高，易洗脱，尤其使高纯度郎⑶的得率明显提高。
[0030]总之，本发明关于郎⑶的制备方法，不仅生产成本低、工艺简单、无污染，整个工艺可循环生产，而且郎⑶的收率高、纯度高，适合工业化生产。
[0031]【具体实施方式】:
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述:
实施例1:
称取苯乙烯201，二乙烯苯2匕有机相中加入20%甲苯，5%过氧化苯甲酰；配制2.5%聚乙烯醇及5%^^1的水相分散液，V (水相)(有机相)=4:1混合，加入反应罐，反应温度80 (土丨)I，搅拌转速40017^111,反应11匕反应结束，分别以水及乙醇洗涤，可得粒径100-12011111 的 10:聚合物颗粒 15.24。
[0032]取市售茶多酚粗提物10008,2(^(}含量重百分比30% (未脱咖啡因),用其重量6倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤。
[0033]所溶样品以80-100目聚酰胺层析，上样量为6: 1，用梯度乙醇水溶液洗脱，洗脱液以冰醋酸调节至四4-5。洗脱液分别为水(38^),30%乙醇(48^),40%乙醇“^乂)。分步收集，合并无郎⑶临近杂质的的洗脱液，浓缩备用。
[0034]取上述浓缩液，以2倍体积水稀释，1(1:柱层析，柱体积20:1上样，洗脱液为8%乙醇水溶液(以冰醋酸调节至四4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量为95-98%及98%以上的溶液。
[0035]对各段产品浓缩喷雾干燥，冷冻保存。各段低含量不合格溶液浓缩干燥后作为粗提物原材料二次循环。
[0036]制备工艺中所用试剂进行回收，循环利用。
[0037]所得郎⑶产品以含量百分比95%计，得率为88.2%，其中含量99%以上产品得率
77.8%。副产物85%以上含量咖啡因得率为75.1%，80%以上含量￡06得率60.6%。
[0038]实施例2:
称取苯乙烯201，二乙烯苯2.5匕有机相中加入20%甲苯，5%过氧化苯甲酰；配制2.5%聚乙烯醇及5%^^1的水相分散液3 (水相IV (有机相)=4:1混合，加入反应罐，反应温度80 (土丨)I，搅拌转速40017^111,反应10卜，分别以水及乙醇洗涤，可得粒径100-120110的聚合物颗粒15.8^0
[0039]取市售茶多酚粗提物20008,2(^(}含量重百分比30% (未脱咖啡因),用其重量8倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤。
[0040]所溶样品用用80-100目聚酰胺层析，上样量为8:1，用梯度乙醇水溶液洗脱，洗脱液四值均以冰醋酸调节至四4-5。洗脱液分别为水(38^),30%乙醇(58^),40%乙醇“^乂)。分步收集，合并无郎⑶临近杂质的的洗脱液，浓缩备用。
[0041〕 取上述浓缩液，以2.5倍体积水稀释，100柱层析，柱体积25:1上样，洗脱液为8%乙醇水溶液(以冰醋酸调节至四4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量为95-98%及98%以上的溶液。
[0042]对各段产品浓缩喷雾干燥，冷冻保存。各段低含量不合格溶液浓缩干燥后作为粗提物原材料二次循环。
[0043]制备工艺中所用试剂进行回收，循环利用。
[0044]所得郎⑶产品以含量百分比95%计，得率为90.1%，其中含量99%以上产品得率
79.8%。副产物85%以上含量咖啡因得率为75.3%，80%以上含量￡(?得率60.8%。
[0045]实施例3:
称取苯乙烯251，二乙烯苯2.8匕有机相中加入20%甲苯，5%过氧化苯甲酰；配制2.5%聚乙烯醇及5%^^1的水相分散液3 (水相IV (有机相)=4:1混合，加入反应罐，反应温度80 (土丨)卜，分别以水及乙醇洗涤，可得粒径100-120110的1(1:聚合物颗粒20.24。
[0046]取市售茶多酚粗提物10008,2(^(}含量重百分比50%(已脱咖啡因),用其重量6倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤。
[0047]所溶样品以80-100目聚酰胺层析，上样量为1:5，用梯度乙醇水溶液洗脱，洗脱液以冰醋酸调节至四4-5。洗脱液分别为水(38^),30%乙醇(4.587),40%乙醇(了^乂)。分步收集，合并无郎⑶临近杂质的的洗脱液，浓缩备用。
[0048]取上述浓缩液，以2倍体积水稀释，1(1:柱层析，柱体积20:1上样，洗脱液为8%乙醇水溶液(以冰醋酸调节至四4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量为95-98%及98%以上的溶液。
[0049]对各段产品浓缩喷雾干燥，冷冻保存。各段低含量不合格溶液浓缩干燥后作为粗提物原材料二次循环。
[0050]制备工艺中所用试剂进行回收，循环利用。
[0051]所得郎⑶产品以含量百分比95%计，得率为89.2%，其中含量99%以上产品得率
80.8%。80%以上含量￡(?得率62.6%。
[0052]实施例4:
称取苯乙烯251，二乙烯苯2.6匕有机相中加入20%甲苯，5%过氧化苯甲酰；配制2.5%聚乙烯醇及5%^^1的水相分散液3 (水相IV (有机相)=4:1混合，加入反应罐，反应温度80 (土丨)搅拌转速40017^111,反应12卜，分别以水及乙醇洗涤，可得粒径100-120110的聚合物颗粒19.54。
[0053]取市售茶多酚粗提物20008,2(^(}含量重百分比50%(已脱咖啡因),用其重量5倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤。
[0054]所溶样品以80-100目聚酰胺层析，上样量为1:7，用梯度乙醇水溶液洗脱，洗脱液以冰醋酸调节至四4-5。洗脱液分别为水(28^),30%乙醇(58^),40%乙醇(了^乂)。分步收集，合并无郎⑶临近杂质的的洗脱液，浓缩备用。
[0055]取上述浓缩液，以2倍体积水稀释，10:柱层析，柱体积30:1上样，洗脱液为8%乙醇水溶液(以冰醋酸调节至四4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量为95-98%及98%以上的溶液。
[0056]对各段产品浓缩喷雾干燥，冷冻保存。各段低含量不合格溶液浓缩干燥后作为粗提物原材料二次循环。
[0057]制备工艺中所用试剂进行回收，循环利用。
[0058]所得郎⑶产品以含量百分比95%计，得率为90.8%，其中含量99%以上产品得率
78.9%。副产物80%以上含量￡06得率63.8%。
【权利要求】
1.一种高纯度郎⑶的制备工艺，其特征在于包括如下步骤: (1)粗提物处理:取茶多酚粗提物含量重百分比20%-6090，用其重量5-8倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤； (2)聚酰胺柱层析:所溶样品以柱体积5-8:1上样，以乙醇水溶液梯度洗脱，洗脱液四值均以冰醋酸调节至？財-5 ； 洗脱液分别为水:(2-387),30%乙醇(4-587),40%乙醇(5-887)； 分步收集，合并无郎⑶临近杂质的的洗脱液，浓缩备用； (3)自制1(1:柱层析:以步骤(2)下的洗脱液浓缩物为原料，以2-3倍体积水稀释，以柱体积20-30:1上样，洗脱液为8%乙醇水溶液(以冰醋酸调节值至4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量为95-98%及98%以上的溶液； (4)浓缩干燥:对各段产品浓缩干燥，冷冻保存。
2.如权利要求1所述的高纯度郎⑶的制备工艺，其特征在于步骤(1)中茶多酚粗提物原料为郎⑶含量20-60%的茶叶下脚料提取物，所有步骤中所述溶液均为工业乙醇水溶液。
3.如权利要求1所述的高纯度郎⑶的制备工艺，其特征在于步骤(1)中茶多酚粗提物原料中若包含咖啡因、￡06等杂质，步骤(2)水洗阶段可收集重量百分比含量85%以上的咖啡因副产物，步骤(3)中可收集到重量百分比含量80%以上的￡(?等副产物。
4.如权利要求1所述的郎⑶的制备工艺，其特征在于步骤(3)中所述自制层析材料的制备方法为:以采用悬浮聚合法在优化合成条件下合成的新型聚合物树脂，其中V (苯乙烯):V (二乙烯苯)=8-10: 1，水相分散液为2.5%聚乙烯醇及5%版101的水溶液，有机相中20%甲苯为致孔剂，5%过氧化苯甲酰为引发剂，V (水相)(有机相)=4:1混合，反应温度80 (土丨)1、反应时间10-12卜，所得聚合物粒径为100-12011111。
5.如权利要求1所述的高纯度郎⑶的制备工艺，其特征在于步骤(2)(3)所用层析材料分别为聚酰胺(80-100目?、100 ；其预处理以其洗脱液淋洗1-28乂，实验完毕尾处理以工业乙醇清洗2-387再生使用。
6.如权利要求1所述的高纯度郎⑶的制备工艺，步骤(3)中浓缩干燥方法为喷雾干燥。
7.如权利要求1所述的高纯度郎⑶的制备工艺，步骤(2)(3)中杂质较多的洗脱液浓缩干燥后作为茶多酚原材料进入下次循环，所有步骤中乙醇废液经统一回收后循环使用。
【文档编号】C07D311/62GK104447667SQ201410716136
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月2日 优先权日:2014年12月2日
【发明者】高平, 林俊杰, 邓小宽 申请人:四川大学