专利名称：4'－三氟甲基联苯基－2－羧酸[2－(2h－[1,2,4]三唑－3－基甲基)－1,2,3,4－四氢 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及如下式Ⅰ表示的4’-三氟甲基联苯基-2-羧酸[2-(2H-[1,2,4]三唑-3-基-甲基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基]-酰胺，特别涉及到用于制备化合物Ⅰ的改良方法和中间体。化合物Ⅰ是微粒体甘油三酯转移蛋白C和/或载脂蛋白B(Apo B)分泌的抑制剂，化合物Ⅰ由于可降低血清脂，因而可用于预防和治疗动脉粥样硬化及其临床表现和相关疾病。
微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)可催化甘油三酯、胆固醇酯和磷脂的转运，已被认为能参与含有脂蛋白的Apo B集合物的形成，该生物分子与动脉粥样硬化病灶的形成有关。参见欧洲专利申请0643057A1,0584446A2和Wetterau等，科学，258,999-1001,(1992)。因此，能抑制MTP和/或Apo B分泌的化合物可用于动脉粥样硬化的治疗，也可用于治疗其他的可通过抑制MTP和Apo B的分泌，降低血清胆固醇和甘油三酯水平而缓解的疾病，如高胆固醇血症、高甘油三酯血症、胰腺炎和肥胖症，和与胰腺炎、肥胖症、糖尿病有关的高胆固醇血症、高甘油三酯血症和高脂血症。
本发明提供了制备式Ⅰ表示的化合物的方法，
包括用a)或b)中化合物处理式Ⅲ化合物
其中R表示H或R2,R2选自烯丙基或取代的甲基，其中取代基包括一至三个(C6-C12)芳基，其中芳基可被一或多个选自硝基和(C1-C6)烷氧基的取代基取代；a)式Ⅹ化合物
其中J代表离去基团，如卤素，叠氮基团，(C1-C6)酰氧基或(C6-C12)芳酰氧基，优选氯或溴原子；b)当R代表R2时，步骤a)产物用酸进一步用酸，如三氟乙酸(TFA)，对甲苯磺酸(PTSA)，甲磺酸或三氟甲磺酸，乙酸中HBr，优选三氟乙酸处理。
“杂环”指的是含有至少一个杂原子的任意单环或稠合环系统，其中杂原子独立选自O,N,S。因此含有一或多个饱和的、部分不饱和的或芳香的(通常是苯环)的稠合碳环的多环稠合环系统在杂环的定义内，只要该系统也含有至少一个稠合环，该稠合环中含至少一个前述杂原子。作为取代基，该杂环可以与碳环(如苯环)或杂环分子的余下部分相连接。
含“一或多个环”的部分指的是含有单环或稠合环的部分，这些环可以是饱和的或部分不饱和的，芳香的或非芳香的碳环或杂环。
稠合的多环系统或基团指的是系统中所有的环都是稠合的。
“卤素”除非特别说明，指的是氟，氯，溴，碘。“芳基’’取代基(如(C6-C12)芳基)指的是环或取代基是碳环。含有一个或多个杂原子的芳香部分包括在如上讨论的术语“杂环”的定义中。
“酰基”取代基指的是一个通过取代基键合与羰基相连的脂肪族或环状的烃部分。
“烷基”和“烷氧基”包括当含有两个以上碳原子时，直链或支链环链基团，但应理解单个基团如“丙基”或“丙酰基”仅包括直链基团(“正常”)，而如“异丙基”或“异丙氧基”的支链异构体称为特殊。
下式表示的一些中间体
和它们的互变异构体是本发明的另一特征，其中Y代表NH2或NO2。本领域技术人员应理解，上述化合物可以几种互变异构体形式存在，这些互变异构体也包括在本发明中。本发明提供的另一个中间体是式Ⅱ化合物
其中R代表R2，优选CH3OC6H4CH2-。
在下面反应路线和描述中，R,R2,J,K和Y及式Ⅰ至Ⅹ均如上定义。
路线1
路线2
路线3
如路线Ⅰ中所示，化合物Ⅸ是在碱性条件下通过1,2,4-三唑与式R2K(其中K代表定义如上卤素)化合物反应而制备的。R2K优选为4-甲氧基苄基氯。反应在室温于极性溶剂中进行，极性溶剂如N,N-二(C1-C6)烷基羧酰胺，如二甲基乙酰胺(DMAC)和二甲基甲酰胺(DMF)；酮，如丙酮和甲基乙基酮；(C1-C6)烷醇，如乙醇，甲醇，异丙醇；和其混合物。用于本发明实施的碱包括碱金属氢氧化物，碳酸盐和碳酸氢盐。优选DMF和NaOH。
化合物Ⅷ通过在热水中将化合物Ⅸ与甲醛一起加热而制备，反应应用大约100至135℃外部热源在回流温度下进行，反应用的过量甲醛可直接用37％的水溶液(也称为福尔马林)或线性多聚体(多聚甲醛)和三聚体(三氧杂环己烷)。多聚甲醛在热水中分解，三氧杂环己烷在含有强酸的水溶液中变成甲醛。优选福尔马林。
在三苯基膦和二(C1-C6)烷基或二哌啶基偶氮基羧酸酯存在的条件下，将化合物Ⅷ与苯邻二甲酰亚胺进行Mitsunobu反应而得到化合物Ⅶ，优选的二哌啶基偶氮基羧酸酯是二异丙基酯。反应可以在非质子溶剂如四氢呋喃(THF)，异丙基醚和二噁烷中，在大约0-65℃温度范围内进行，优选THF和15℃。
将化合物Ⅶ悬浮在非质子悬浮介质如(C1-C6)烷醇(如甲醇，乙醇或异丙醇)中用肼处理可转变成化合物Ⅵ。肼优选用它的水合形式，优选悬浮介质为甲醇。反应可在室温至65℃温度范围内进行，优选室温。
在碱和非质子溶剂中，用式Ⅴ化合物处理化合物Ⅵ可形成化合物Ⅳ(R=R2)，
其中Y选自卤素和选择取代的(C1-C6)烷基-或(C1-C6)芳磺酰氧基，优选CH3SO3(甲磺酰氧基)。反应可在惰性气氛如氮气或氩气中，在环境温度至溶剂的回流温度下进行。碱可以选有机碱如三(C1-C6)烷胺，吡啶和N-甲基吗啉。非质子溶剂包括THF，CH2Cl2和DMF。反应优选在THF，氮气和溶剂的回流温度下进行，优选的碱是三乙基胺。在低温和惰性气氛中，在(C1-C6)卤代烷烃中，在碱存在的条件下，将Y代表OH的化合物Ⅴ与甲磺酰氯反应可制备Y代表甲磺酰氧基的化合物Ⅴ，该处碱的选择和惰性气氛的选择参见上述。温度在大约-40至0℃，反应条件优选在氮气，于30℃，在三乙基胺存在下进行。
如路线3所示，用酸如三氟乙酸(TFA)，对甲苯磺酸，甲磺酸或三氟甲磺酸和HBr的乙酸溶液，优选三氟乙酸，处理化合物Ⅳ(R=R2)可转变成化合物Ⅳ(R=H)，该反应可在室温至60℃温度范围内进行，优选室温，TFA可以用纯的或溶于二氯甲烷中。
在氢化催化剂和有机溶剂存在下，在大约1至3个大气压下用氢气处理R代表H的化合物Ⅳ可得到R代表H的化合物Ⅲ，氢化催化剂包括Pd,Pt和阮内Ni，这些金属可以盐的形式使用如Pd(OH)2，或在载体上如碳。氢化反应可在大约室温至50℃温度范围内进行，优选室温。优选氢化反应催化剂是10％Pd/C，优选的溶剂是甲醇。
R代表H的化合物Ⅲ在溶剂和碱存在下，用4’-三氟甲基联苯基-2-羰基源处理可转变成化合物Ⅰ，这些源选自氯化物，叠氮化物和混合的酸酐。该反应可在大约室温至50℃温度范围内进行，优选室温，所使用的溶剂包括如上所述的非质子溶剂，卤代烷烃和其混合物，优选THF和二氯甲烷的混合溶剂，当羰基化合物的二氯甲烷溶液加到化合物Ⅲ(R=H)的THF溶液中时，就形成了该混合溶剂。
另外，如路线3所示，将R代表R2的化合物Ⅲ与如上定义的4’-三氟甲基联苯基-2-羧基源反应形成式Ⅱ化合物后，再用酸如三氟乙酸TFA，对甲基苯磺酸，甲磺酸或三氟甲基磺酸和氢溴酸的乙酸溶液，优选如上所述的三氟乙酸处理也可制备化合物Ⅰ。优选R2代表p-CH3OC6H4CH2-，且4’-三氟甲基联苯基-2-羰基源为氯化物。
式Ⅰ化合物和其互变异构体形成酸加成盐或表达为药用盐，这些盐包括但并不局限于盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，磷酸氢盐，磷酸二氢盐，乙酸盐，琥珀酸盐，柠檬酸盐，甲基磺酸盐，和对甲苯磺酸盐。也可形成多元加成盐。
将式Ⅰ化合物的碱形式与适当的酸反应，可制备式Ⅰ化合物和其互变异构体的酸加成盐，当盐源于一元酸(如盐酸，氢溴酸，对甲苯磺酸，乙酸)，二元酸的一氢酸形式(如硫酸氢盐，琥珀酸盐)，或三元酸的二氢酸形式(如磷酸二氢盐，柠檬酸盐)时，酸的用量至少为一个摩尔当量，通常为摩尔过量。然而，当需要这样的盐是硫酸盐，半琥珀酸盐，磷酸氢盐或磷酸盐时，酸的适宜的或确切的化学当量一般将会用到。游离碱和酸通常在助溶剂中结合，生成的盐形成沉淀或通过浓缩和/或加入不溶的溶剂而分离。
式Ⅰ化合物，及其互变异构体和其药用盐(今后称活性化合物)可口服，相应地可与适用于口服剂型的药用载体或稀释剂结合。适宜的药用载体包括惰性固体填充剂，稀释剂和无菌水或有机溶液。该活性化合物在药物组合物中以足够量存在以提供下述的剂量范围。因此该化合物的口服制剂可混有适宜的固体或液体载体或稀释剂，以形成胶囊，片剂，粉剂，糖浆，溶液，悬浮剂等，如果需要，药物组合物还可含其它成份如调味剂，甜味剂，赋形剂等，含有该活性化合物的药物组合物适用于治疗动脉粥样硬化，胰腺炎，肥胖症，高胆固醇血症，高甘油三酯血症，高脂血症和糖尿病，其包括如上所述的式Ⅰ化合物和药用载体。
该活性化合物可能通过抑制MTP而抑制或降低apo B的分泌，尽管可能还会有其他机制。该化合物用于任何可引起apo B，血清胆固醇和/或甘油三酯水平升高的疾病或症状，因此，本发明进一步提供了治疗选自(动脉粥样硬化，胰腺炎，肥胖症，高胆固醇血症，高甘油三酯血症，高脂血症和糖尿病的症状的方法，其包括给予需治疗的哺乳动物，特别是人，足够降低载脂蛋白B分泌的量的如上定义式Ⅰ化合物。前述疾病亚类包括动脉粥样硬化，肥胖症，胰腺炎和糖尿病，更具体的亚类包括动脉粥样硬化。
此处对活性化合物来说，术语“治疗”有预防和治疗的意思。
片剂，丸剂，胶囊等也可含有粘合剂，如树胶，阿拉伯胶，玉米淀粉，或明胶；赋形剂，如磷酸二钙；崩解剂，如玉米淀粉，土豆淀粉，藻酸；润滑剂，如硬脂酸镁；和甜味剂，如蔗糖，乳糖或糖精。当剂量单位是胶囊时，除了可以含有上述类型的物质外，还可含有液体载体，如脂肪油。
各种其它物质也可加入，如包衣或修饰剂量单位的物理形式的物质。例如，片剂可以用紫胶，糖或二者来包衣，糖浆或酏剂除了活性成分还可含有作为甜味剂的蔗糖，作为防腐剂的对羟苯甲酸甲酯或丙酯，染料和调味剂如樱桃或橙子香精。
该活性化合物也可胃肠道外给药，该化合物的胃肠外制剂可以加入无菌水或有机介质以形成可注射的溶液或悬浮剂，这些活性化合物的溶液或悬浮剂可以在水中与适宜的表面活性剂如羟基丙基纤维素混合而制备，分散剂也可在芝麻或花生油，乙醇，水，多元醇(如甘油，丙二醇和液态聚乙二醇)，它们的适宜混合物，植物油，N-甲基葡糖胺，聚乙烯吡咯烷酮，或它们的油混合物及该化合物可溶性药用盐的水溶液中制备。在一般的贮存和使用条件下，这些制剂可含防腐剂以防微生物生长。以该方式制备的注射液可静脉注射，腹腔注射，皮下注射或肌肉注射。
适用于注射的药物剂型包括无菌水液或无菌注射溶液或分散剂的临时制备的分散剂和无菌粉末。所有情况中，制剂必须被灭菌，必须容易从注射器中流出，在制备和贮存条件下必须稳定，必须防腐以防止微生物如细菌和霉菌的污染。
活性化合物所用剂量一般可按本领域已知的原则如所治疗疾病的严重程度和给药途径而改变，通常，活性化合物给予温血动物(如人)，其有效剂量，可接受的单次或分次服用的日剂量大约为0.1至15mg/kg体重，优选大约1-5mg/kg体重。总的可接受的日剂量通常在1-1000mg之间，优选5-350mg之间。
该活性化合物也可与其它药物包括其它的降脂制剂结合。这样的制剂包括胆固醇生物合成抑制剂，特别是HMG CoA还原酶抑制剂和鲨烯合成酶抑制剂；胆汁酸多价螯合剂；纤溶酶(fibrates)；胆固醇吸收抑制剂；和烟酸。
如果受试化合物在下列筛选中是活性的，则认为该化合物是有活性的。
活性化合物的活性可通过测定对HepG2细胞分泌apo B的抑制作用来评估。
HepG2细胞在含10％胎牛血清的修饰的Dulbecco’s Eagles培养液(Gibco)中生长，用96孔培养板，在5％二氧化碳的潮湿环境下，直到70％铺满。受试化合物溶于二甲基亚砜，浓度为10-20mM，然后在生长培养液中稀释到1uM。再在生长培养液中1∶1稀释该贮液，分别取100μl加到含有HepG2细胞的96孔板分开孔中，24小时后收集生长培养液，用对apoB特异的ELISA分析，用apo A1浓度做对照，抑制剂为这样的的化合物，即减少apo B向介质中分泌而不影响apo A1的分泌。apo B的ELISA测定按下述进行抗人apo B的单克隆抗体(Chemicon)用磷酸盐缓冲液/叠氮化物(PBS+0.02％叠氮Na)稀释到5ug/mL，取100μl加到96孔板(NUNC Maxisorb)的每个孔中，室温孵育过夜，除去抗体液，每孔用PBS/叠氮化物洗三次。用于PBS/叠氮化物中制备的1％(w/v)的小牛血清白蛋白(BSA)溶液孵育1-3小时的方法来阻断塑料表面上的非特异结合位点，加100μl来源于HepG2细胞或apo B标准物(用0.004％吐温20/1％BSA的PBS/叠氮化物制备)到每个孔中并孵育18个小时。将各孔吸干，用0.1％吐温20的PBS溶液洗三次，然后加100μl1/1000稀释的第二抗体-山羊抗人apo B(Chemicon)。室温孵育3个小时，吸干溶液，再如上所述洗三次。加100μl 1∶1600稀释的(在PBS/1％BSA/2mM MgCl2中)与碱磷酸酶(Sigma)共轭的兔抗山羊IgG到每孔中。室温孵育1小时后，再吸干，每孔如上所述洗四次，加100μl 1mg/mL对硝基苯磷酸(pNPP；Sigma)的25mM碳酸氢钠2mM MgCl2溶液，pH9.5，到每个孔中孵育20-30分钟，然后加50μl 0.2N的NaOH终止反应。在405nM读每一孔的吸收值，650nM的吸收值作为本底。从标准曲线上算出Apo B的浓度，用平行测定的纯化的LDL标准来构建Apo B标准曲线，Apo A1的测定除了使用Apo A1抗体(Chemicon)代替apo B抗体抗原培养是在37℃而不是在室温外，按相似方法进行。
如果受试化合物直接抑制MTP活性，也可确认其活性。
化合物抑制MTP的活性可通过在人的可溶性MTP存在中，观察放射标记的甘油三酯从源囊到受体囊的转移抑制来测定，MTP的制备方法源于Wetterau和Zilversmit的方法(Biochem.Biophys.Acra(1986)857∶610)，该方法简述如下人的肝组织块于-80℃C冷冻，在冰上解冻，剁碎，用冰冷的0.25M蔗糖冲洗数次，所有步骤均在冰上操作，用Potter-Elvehjem聚四氟乙烯匀浆器制备0.25M蔗糖的50％匀浆液，用0.25M蔗糖1∶1稀释匀浆液，并于4℃以10,000xg离心20分钟。用蔗糖重新悬浮沉淀，于10,000xg再离心20分钟，合并上清液，于105,000xg离心75分钟收集微粒体沉淀。弃去上清，用最小体积的0.25M蔗糖悬浮微粒体沉淀，用0.15M Tris-HCl(pH8.0)稀释到3mL/起始肝重g。将悬浮液分成12份，105,000xg离心75分钟。弃去上清，将微粒体沉淀冻存于-80℃至用时。要在进行测定之前制备MTP，用12mL冷的50mM Tris-HCl,50mM KCl,5mM MgCl2,pH7.4悬浮解冻的沉淀和将1.2mL 0.54％去氧胆酸盐(pH7.4)缓慢加入溶液混合，以破坏微粒体膜。在温和混合且在冰上孵育30分钟后，于105,000xg离心该悬浮液75分钟。含有可溶的MTP蛋白的上清液可用四种测定缓冲液(150mM Tris-HCl,40mMNaCl,1mM EDTA,0.02％NaN3,pH7.4)，在2-3天内进行分析。人的肝MTP在4℃贮存，临用前用测定缓冲液5倍稀释。MTP制备物贮存30天没有明显的转移活性丢失。
脂质体可在室温，氮氛下，400 uM卵磷脂酰胆碱(PC)，75uM小牛心磷脂，和0.82uM14C-三油酸甘油酯(110 Ci/mol)的分析缓冲液的分散体超声浴中制备。氯仿中的质脂在与测定缓冲液水合之前，按适量加入并在氮蒸气中干燥。脂质体受体可在室温，氮氛条件下，1.2uM PC,2.3uM三油酸甘油酯和30pM3H-PC(50Ci/mol)分析缓冲液的分散体超声浴中制备。脂质体的源和受体在7℃，于160,000xg离心2小时，含有小的单片儿脂质体的顶端80％的上清液被小心移出，4℃贮存，待用于转移测定。
通过可溶性的MTP和受试化合物一起与源和受体小泡混和起动。转移测定以此来检测MTP活性。往100μl 5％BSA(对照)或含有受试化合物的5％BSA中加入500μl测定缓冲液，100μl脂质体源，200μl脂质体受体和100μl稀释的MTP蛋白。37℃孵育45分钟后，通过加入500μl 50％(w/v)DEAE纤维素的测定缓冲液的悬浮液终止甘油三酯的转移。振摇4分钟后，结合到DEAE纤维素上的脂质体源通过低速离心被选择沉淀等份含有脂质体受体上清液被计数，3H和14C计数用于计算脂质体受体的回收百分数和甘油三酯按一级动力学的转移百分数，与无受试化合物存在的对照组相比，因为14C的放射活性明显降低，说明受试化合物对甘油三酯转移有抑制作用。
受试化合物作为MTP抑制剂的活性也可在体内测定，方法如下雄性小鼠(20-30g.；杂系)口腔管饲(0.25mL/25g.体重)受试化合物的0.5％甲基纤维素悬液，一天几次，连续几天，或将小鼠麻醉之前90分钟给药一次，采血制备血清，用经济的酶测定法(甘油三酯G:Wako Fine Chemicals)测血清中甘油三酯浓度。用仅喂赋形剂的小鼠作对照，用降低血清甘油三酯的能力鉴定MTP抑制剂。
本发明拟通过下列实施例来说明，然而应该指出的是本发明并不局限在这些实施例的具体描述中。
本领域人员已知的纯化和分离方法和/或技术均可用于本发明化合物的分离。这些技术包括所有类型的层析(HPLC，用一般的吸附剂如硅胶的柱层析，薄层层析)，重结晶，和差异提取技术(如液-液提取)。
制备方法11-(4-甲氧基苄基)-1,2,4-三唑将1,2,4-三唑(7.5g,0.109mol)溶于二甲基甲酰胺(50mL)中，并在氮气氛下于10℃冰浴中搅拌，当部分氢氧化钠(17.5g,0.438mol)颗粒被加入时，导致放热，温度升到大约25℃。于25℃逐滴加入4-甲氧基苄基氯(15mL,0.111mol)的DMF溶液，用时5分钟。室温搅拌4小时后，加入乙酸乙酯和水。分层，水相用乙酸乙酯提取，合并有机相，用水洗四次，盐水洗一次，硫酸镁干燥。过滤混合物，减压蒸发过滤液中溶剂，得到油状标题产物，产率69％；14.14g；1H NMR(CDCl3)δ8.00(s,1),7.93(s,1),7.19(d,2),6.88(d,2),5.23(s,2),3.78(s,3)。质谱m/z109(M+1)。
制备方法25-(羟基甲基)-1-(4-甲氧基苄基)-1,2,4-三唑将制备方法1标题产物(7.6g,40mmol)溶于37％甲醛水溶液(25mL)中，在130℃油浴中加热回流四天。此羟甲基化过程用硅胶TLC监测，洗脱液为乙酸乙酯氯仿3∶1。将反应混合物冷却至室温，倾入水中，用乙酸乙酯提取两次。合并有机相，用1N NaOH，水和盐水依次洗涤，硫酸镁干燥，蒸发，得到的粗产物与少量2-丙醇在己烷中浆化得到标题产物4.9g(产率56％),mp95-100℃。1H NMR(CDCl3)δ7.72(s,1),7.21(d,2),6.85(d,2),5.70(bs,1,OH),5.32(s,2),4.69(s,2),3.78(s,3)。13C NMR(CDCl3)δ159.6,149.8,145.6,129.2,127.0,114.3,55.3,54.9,52.0。IR(KBr)1610,1585,1512cm-1。质谱m/z 220(M+1)。
C11H13N3O2元素分析理论值C,60.26；H,5.98；N,19.17。实测值C,60.30；H,6.16；N,19.66。
用单晶X-射线确认结构。
制备方法35-(邻苯二甲酰亚氨基甲基)-1-(4-甲氧基苄基)-1,2,4-三唑将制备方法2标题产物(8.5g,38.8mmol)，三苯基膦(11.2g,42.7mmol)和邻苯二甲酰亚胺(6.3g,42.7mmol)在室温溶于四氢呋喃(125mL)中得到雾状溶液。逐滴加入二异丙基偶氮羧酸酯(8.4mL,42.7mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液，至少在40分钟加完，用冰水浴将温度控制在15℃。在滴加过程中白色固体状产物沉淀出来。室温搅拌反应混合液过夜，然后用己烷(125mL)稀释。搅拌30分钟后，收集白色固体标题产物，己烷洗涤，真空干燥，得产物12.2g，产率91％；mp167-72℃。1H NMR(CDCl3)δ7.85(s,1),7.81(m,2),7.69(m,2),7.09(d,2),6.77(d,2),5.43(s,2),4.89(s,2),3.72(s,3)。13C NMR(CDCl3)δ150.9,145.6,134.2,131.8,128.3,127.0,123.6,114.3,112.9,112.1,55.2,52.0,32.8。IR(KBr)1772,1720,1689,1612,1586,1519cm-1。质谱m/z349(M+1)。
C19H16N4O3元素分析理论值C,65.50；H,4.63；N,16.08。实测值C,65.35；H,4.80；N,16.18。
制备方法45-(氨基甲基)-1-(4-甲氧基苄基)-1,2,4-三唑将制备方法3标题产物(5g,14.4mmol)悬浮于甲醇(50mL)中，伴随搅拌加入水合肼(1.6mL,32 mmol)。几分钟后得到透明溶液，室温搅拌反应混合物过夜，在这个过程中邻苯二甲酰肼沉淀出来。用二氯甲烷(50mL)稀释，肼化物的浆状物被搅拌45分钟，过滤，用二氯甲烷洗涤固体。滤液被减压蒸发，残留物被溶于二氯甲烷和1N NaOH中，水层pH为12，分离各层，水层用二氯甲烷提取，合并有机层。有机层用盐水洗涤后，硫酸镁干燥，减压蒸发溶剂得到无色油状的标题产物3g，产率97％。1H NMR(CDCl3)δ7.79(s,1),7.12(d,2),6.81(d,2),5.27(s,2),3.88(s,2),3.74(s,3)1.59(bs,2,NH2)。13C NMR(CDCl3)δ150.3,145.6,130.4,129.0,128.8,127.3,114.3,55.3,51.7,37.7。
制备方法52-[-(4-甲氧基苄基)-2H-(1,2,4)三唑-3-基-甲基]-6-硝基-1,2,3,4-四氢-异喹啉1)氮气下将2-(2-羟乙基)-5-硝基苯基醇(6.38g,32.4mmol)和三乙基胺(11.3mL,81mmol)悬浮在二氯甲烷(100mL)中，然后伴随搅拌冷却到-30℃。滴加甲磺酰氯(5.5mL,71.2mmol)的二氯甲烷(32mL)溶液，至少用15分钟。30分钟后，移去冷浴，加入1N HCl(130mL)，混合物搅拌10分钟，分层。用水，饱和碳酸氢钠和盐水洗涤有机层，硫酸镁干燥，过滤，减压蒸发滤液，得到不需进一步纯化的黄色固体10.7g，产率94％。1H NMR(CDCl3)δ8.17(m,2),7.66(d,1),5.39(s,2),4.50(t,2),3.28(t,2),3.10(s,3),3.00(s,3)。
2)氮气氛下将制备方法4标题产物(1.1g,5mmol)和三乙胺(1.8mL,12.7mmol)溶于四氢呋喃(15mL)中，滴加步骤1)产物(1.75g,5mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液进行处理，室温搅拌反应混合物2小时，然后回流过夜。冷却反应混合物，加入二氯甲烷和1N NaOH。分层，用另外的二氯甲烷提取水相，合并有机相，用水，盐水洗涤，硫酸镁干燥，从二氯甲烷得到的粗产物用硅胶层析纯化，洗脱液为30％乙酸乙酯r氯仿液，得产物1.2g，产率63％，产物为黄色油状物，可缓慢固化。1H NMR(CDCl3)δ7.98(m,2),7.88(s,1),7.10(m,3),6.76(d,2),5.40(s,2),3.81(s,2),3.73(s,3),3.63(s,2),2.95(t,2),2.80(t,2)。13C NMR(CDCl3)δ159.4,151.4,150.4,145.6,141.5,135.6,129.0,127.4,123.7,123.7,120.8,114.1,112.1,55.5,55.2,53.1,52.1,50.1,29.0。IR(KBr)1610,15.84,1517 cm-1。质谱m/z380(M+1)。
制备方法62-[2H-(1,2,4)三唑-3-基-甲基]-6-硝基-1,2,3,4-四氢-异喹啉将制备方法5标题产物(8.8g,23.2mmol)溶于三氟乙酸(88mL)中，室温搅拌过夜。减压蒸发该反应混合物，将得到的油状物溶于二氯甲烷，用1N HCl溶液提取该溶液两次，合并酸提取液，用二氯甲烷洗一次，加新鲜的二氯甲烷使酸提取液分层，用10％碳酸钠水溶液调pH至10，标题产物沉淀，收集沉淀，用水和二氯甲烷洗涤，得产物3.99g，产率66％；mp163-6℃。1H NMR(DMSO-d6)δ8.20(s,1),7.97(d,1),7.92(dd,1),7.30(s,1),3.82(s,2),3.73(s,2),2.92(t,2),2.76(t,2)。13CNMR(DMSO-d6)δ147.8,146.2,143.2,136.5,128.2,123.8,120.8,55.1,53.4,49.6,28.9。质谱m/z 260(M+1)。
C12H13N5O2(0.15 CH2Cl2)元素分析理论值C,53.65；H,4.93；N,25.98。实测值C,53.65；H,4.93；N,25.75。
实施例16-氨基-2-[2H-(1,2,4)三唑-3-基-甲基]-1,2,3,4-四氢-异喹啉将制备方法6标题产物(4.46g,17.4mmol)溶于甲醇(220mL)中，在50psi(大约345kPa)压力下，在10％钯碳(2.23g)上，进行氢化反应4小时，用Celite过滤除去催化剂，减压蒸除滤液中甲醇，得到白色固状的标题产物3.56g，产率91％，mp191-3℃。1H NMR(DMSO-d6)δ6.65(d,1),6.32(dd,1),6.28(d,1),4.79(s,2),3.71(s,2),3.41(s,2),3.34(s,2)。13C NMR(DMSO-d6)δ155.9,147.0,134.5,127.1,122.4,113.8,112.7,55.4,53.9,50.9,29.2。IR(KBr)1633,1612,1584,1513cm-1。质谱m/z 230(M+1)。
C12H15N5元素分析理论值C,62.86；H,6.59；N,30.55；实测值C,62.49；H,6.39；N,30.45。
实施例24’-三氟甲基-二苯基-2-羧酸-2-(2H-1,2,4-三唑-3-基-甲基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基-酰胺(Ⅰ)A)将实施例1产物(3.3g,14.5mmo1)和三乙胺(2.23mL,15.9mmol)悬浮于二氯甲烷(100mL)和四氢呋喃(40mL)中，室温搅拌该悬浮液，同时滴加4’-三氟甲基-联苯基-2-酰氯(4.13g,14.5mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液，反应混合物搅拌过夜，再加入碳酸钠(17g,0.2mol)的水溶液(440mL)，搅拌混合物15分钟。分层，用二氯甲烷提取水层两次，合并有机层，用盐水洗涤，硫酸镁干燥，减压蒸发，得到泡沫样标题产物。鉴定，1H NMR(CDCl3)δ13.88(bs,1),10.21(s,1),7.74(d,2),7.67-7.48(m,6),7.31(s,1),7.20(dd,1),6.91(d,1),3.73(s,2),3.56(s,2),2.73(m,4)。IR(KBr)1651,1618,1603,1545,1510cm-1。质谱m/z478(M+)。
B)将实施例4标题产物(0.49g,8.2mmol)溶于三氟乙酸(5mL)中，室温搅拌过夜，减压除去挥发性组分，用乙酸乙酯溶解残留物，往其中加10％碳酸钠水溶液。分层，用盐水洗涤有机层，硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，得到标题产物，用步骤A得到的标题产物鉴定。
实施例36-氨基-2-(2-(4-甲氧基苄基)-2H-[1,2,4-三唑-3-基-甲基)-1,2,3,4-四氢异喹啉2-(2-(4-甲氧基苄基)-2H-[1,2,4-三唑-3-基-甲基)-6-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(0.5g,1.3mmol)在甲醇中，在50psi(大约345kPa)压力下，在10％Pd/C(0.25g)上，进行氢化反应3小时。过滤反应混合物，减压蒸除溶剂，加乙酸乙酯和水，用碳酸钠固体调pH至10。分层，用另外的乙酸乙酯提取水层，合并有机层，用盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤，减压蒸发，得到油状产物0.4g，产率87％。1H NMR(CDCl3)δ7.86(s,1)，7.18(d,2),6.79(m,3),6.48(m,2),5.42(s,2),3.76(s,3),3.73(s,2),3.50(s,2),2.80(m,2),2.69(m,2)。IR(KBr)1613,1587,1513cm-1。质谱m/z 348(M+-1)。
实施例44’-三氟甲基二苯基-2-羧酸(2-(2-(4-甲氧基苄基)-2H-1,2,4-三唑-3-基-甲基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-6-基)-酰胺(Ⅰ)将实施例3标题产物(0.38g,1.1mmol)和三乙胺(0.17mL,1.2mmol)溶于二氯甲烷(14mL)中,室温搅拌，逐滴加入4’-三氟甲基联苯基-2-酰氯(0.31g,1.1mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液，4小时后，加10％碳酸钠水溶液，搅拌30分钟。用盐水洗涤二氯甲烷层，硫酸镁干燥，减压蒸发，得到硬泡沫样标题产物0.63g，产率97％。1H NMR(CDCl3)δ7.79(s,1),7.72(d,1),7.64(d,2),7.58-7.34(m,6),7.12(d,2),7.01(s,1),6.90-6.72(m,4),5.38(s,2),3.73(s,3),3.69(s,2),3.50(s,2),2.79(t,2),2.68(t,2)。IR(KBr)1668,1615,1599,1567,1536,1514cm-1。质谱m/z 598(M++1)。
权利要求
1．制备式Ⅰ化合物的方法，其包括
用a)和b)中化合物处理式Ⅲ化合物，
其中R表示H或R2,R2选自烯丙基或取代的甲基，其中取代基包括一至三个(C6-C12)芳基，其中芳基可被一或多个选自硝基和(C1-C6)烷氧基的取代基选择性取代；a)式Ⅹ化合物
其中J代表离去基团，如卤素，叠氮基团，(C1-C6)酰氧基或(C6-C12)芳酰氧基，优选氯或溴原子；和b)当R代表R2时，步骤a)产物用酸进一步处理。
2．权利要求1的方法，其中所说的酸选自三氟乙酸(TFA)，对甲苯磺酸(PTSA)，甲磺酸或三氟甲基磺酸，氢溴酸乙酸溶液。
3．权利要求2的方法，其中所说的酸为三氟乙酸。
4．权利要求1的方法，其中式Ⅲ化合物通过用a)或b)处理式Ⅳ化合物而制备，其中R的定义如上所述，
a)在氢化反应催化剂存在下，使用氢气形成R代表R2的式Ⅲ化合物；b)1)使用酸；和2)在氢化反应催化剂存在的条件下，用氢气处理步骤1)产物，得到R代表H的式Ⅲ化合物。
5．权利要求书4的方法，其中式Ⅳ化合物通过在碱存在下用式Ⅴ化合物处理式Ⅵ化合物来制备
其中R代表R2，
其中Y定义如上。
6．式Ⅰ化合物的制备方法包括如下步骤a)通过在碱存在下用式Ⅴ化合物处理式Ⅵ化合物制备式Ⅳ化合物。
其中Y定义如上。b)如下所示处理式Ⅳ化合物(R=R2)1)ⅰ)用TFA处理形成Ⅳ(R=H)；ⅱ)在氢化反应催化剂存在的条件下，用氢处理Ⅳ(R=H)得到Ⅲ(R=H)；ⅲ)用X处理Ⅲ(R=H)；2)ⅰ)在氢化反应催化剂存在的条件下，用氢处理，得到Ⅲ(R=R2)；ⅱ)用X处理Ⅲ(R=R2)，得到Ⅱ(R=R2)；ⅲ)用TFA处理Ⅱ(R=R2)。
7．权利要求4的方法，其中所说的氢化反应催化剂选自Pd/C,Pd(OH)2，阮内镍和PtO2。
8．权利要求7的方法，其中所说的氢化反应催化剂为Pd/C。
9．下式化合物及其互变异构体
其中Y代表NH2或NO2。
10．权利要求9的化合物和它的互变异构体，其中Y代表NH2。
11．与权利要求9的化合物和它的互变异构体，其中Y代表NO2。
12．式Ⅱ化合物
其中R代表R2,R2如上定义。
13．权利要求12的化合物，其中R2代表CH3OC6H4CH2-。
全文摘要
式(Ⅰ)化合物的制备方法,其包括用a)和b)处理式(Ⅲ)化合物,其中R代表H或R
文档编号C07D401/06GK1216988SQ97194209
公开日1999年5月19日 申请日期1997年3月13日 优先权日1996年4月30日
发明者F·J·厄本 申请人:辉瑞大药厂