专利名称：可用作药物或保健品的具有增强免疫力、抗肿瘤活性的寡糖的制作方法
技术领域：
本发明是关于有免疫、抗肿瘤活性的，特别是涉及可用作增强免疫力、抗肿瘤，治疗癌症的保健品或药物的寡糖。
根据目前所知，能增强动物免疫能力并具有抗肿瘤活性的糖，大多为多糖，如香菇多糖、灵芝多糖等由实用菌中提取的多糖，或中草药中提取的多糖。已研究清楚的、有明确免疫、抗肿瘤活性的寡糖并不多，如α-L-Fuc(1-2)-β-D-Gal(1-3)-β-D-GalNAc-(1-3)-α-D-Gal-(1-4)-β-D-Gal-(1-4)-β-D-Glu(由岩藻糖、半乳糖、N-乙酰基半乳糖及葡萄糖组成的7糖)，是一个能作为抗乳腺癌的7糖抗原(见J.Am.Chem.Soc.,117,1995,7840)，正在进行临床研究。香菇多糖是有明确抗肿瘤活性、提高人体免疫力的多糖，它不是直接去攻击肿瘤细胞，而是通过激活人体的免疫系统从而杀死肿瘤细胞，它在起作用时首先与哪个受体结合，至今仍未搞清。最先发现香菇多糖抗肿瘤活性的日本科学家认为，香菇多糖的三重螺旋结构是保持它活性的必要结构，并举例说未经处理的分子量为百万的香菇多糖，与经过酸水解的分子量为1.4万的小香菇多糖都具有三重螺旋结构，因此具有类似的活性[[Carbohydr.Res.1993,245,81-96.Nature1969,222,687]。但我们认为其三重螺旋结构是由其一级结构，即组成多糖的重复单元寡糖的结构决定的，由这个寡糖与受体作用，启动免疫过程。我们在前一个专利(宁君孔繁祚中国专利申请号99126224.7)中已报道了香菇多糖核心片段的首次合成，本发明即是关于香菇多糖的核心片段寡糖的免疫、抗肿瘤活性的研究结果及其它可用作增强免疫力、抗肿瘤，治疗癌症的保健品或药物的寡糖。
下图为香菇多糖重复单元7糖的结构。 Repeating unit of lentinan heptasaccharide本发明的目的在于确认具有免疫、抗肿瘤活性寡糖的结构及可做为免疫增强剂、抗肿瘤，治疗癌症的保健品或药物用的寡糖的结构。
本发明的目的是这样实现的用合成的香菇多糖核心片段3糖、4糖、5糖、6糖、7糖、8糖，9糖，10糖，11糖，12糖，13糖，14糖及它们的类似物对健康人外周血单核细胞IL-2和TNF-α的基因表达水平的影响以及抑制肿瘤效果的情况进行实验。
通过这些试验确定的有免疫、抗肿瘤活性并能作为增强免疫力、抗肿瘤，治疗癌症的寡糖的结构为(1)该寡糖主链为4糖或5糖。R→R→R→RR→R→R→R→RR=糖(2)该寡糖主链上具有两个侧链。 R=糖 R1=糖 R2=糖(3)含有这种主链和侧链基本结构的更大的寡糖(如8糖-14糖)如 R=糖 R1=糖 R2=糖所述的4糖或5糖主链中的糖为均一的葡萄糖。
即主链为Glu→Glu→Glu→Glu或Glu→Glu→Glu→Glu→GluGlu=葡萄糖所述的主链为1→3β连接。
即主链为β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-Glu或β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-Glu所述的寡糖为游离寡糖(还原端为羟基)或为寡糖的烷基、芳基苷或寡糖肽。
所述的侧链R1及R2为单糖或寡糖。
所述的侧链可紧密并排排列，亦可由主链的葡萄糖隔开排列。
如
所述的侧链中的糖为葡萄糖、或其它的任何种糖。
所述的侧链中的糖与主链的连接为1→6β或1→6α连接。
所述的侧链中的寡糖可以任何方式连接。
所述的寡糖在使用时可注射或口服(单独用或与其它物质合用)。可用作增强免疫力、抗肿瘤，治疗癌症的保健品或药物。
下面结合实施例对本发明进行详细地说明。
1．所述的寡糖对健康人外周血单核细胞IL-2和TNF-α的基因表达水平和活性有显著影响，在0.5毫克/升-15毫克/升的浓度范围内，随浓度增加该基因表达水平及活性增加，诱导免疫反应。
2．所述的寡糖对肿瘤的抑制作用所述的寡糖的抗癌及抑制癌细胞转移作用的情况肿瘤 宿主 寡糖剂量 途经 注射时间 寡糖肿 肿瘤完全(1mg/kg×d)瘤抑制率 消退率肉瘤180CD-1/JCR 1×10 i.p. 1to10 100 10/10A/J5×4i.p. 1to496.59/10DBA/2N 5×4i.p. 1to4100 10/10SWM/Ms 1×10 i.p. 1to10 100 10/10艾氏腹腔癌 CD-1/ICR 1×10 i.p. 1to10 54.70/5CCM腺癌SWM/Ms 1×10 i.p. 1to10 65.30/10MC.S1纤维肉瘤 A/J1×10 i.p. 1to10 100 18/18MC.CS1纤维肉瘤 DBA/2N 1×10 i.p. 1to10 76.52/7MM-46癌C3H/HeN5×2i.v. 13,15 100 9/9M-109癌BALB/c 25×2 i.p. 15,18 91 8/22MC-原发瘤 DBA/2N 1×10 i.p. 1to10 80.52/5MH,134肝癌 C3H/HeN1×14 i.p. 21to40 100 10/14甲基胆蒽 SWM/Ms 1×10 i.p. 21to31 83→33％甲基胆蒽 DBA/2N 1×10 i.p. 14to24 78→37％腺病12型 C3H/HeN3×10 i.p. 14to18 79→40％由此可见，所述的寡糖不仅对S180等同种移植癌而且对同系癌，自发癌的生长也能明显抑制，并对化学致癌，病毒致癌均有预防效果。
所述的寡糖抑制肿瘤作用的特点是对肿瘤细胞没有直接细胞毒作用，其作用依赖于宿主；有最适剂量，过量使用使抑制肿瘤作用及免疫增强作用减弱；其作用因小鼠种系不同而有显著差异。A/J,DBA/2,CD-1等小鼠对寡糖最敏感，肿瘤可完全消失。对C3H/He不消失，BALB/C,CBA中等。对敏感小鼠接种甲基胆蒽(MC)，建立了纤维肉瘤株，以此移植于近交系小鼠后，给与寡糖后肿瘤消失。
所述的寡糖对化学致癌有强的抑制作用。接种MC35周后几乎所有小鼠均发生癌，但在接种MC2～3周后开始腹腔投与寡糖，致癌率约降低至30％。这是因为接种MC产生的少数癌细胞由于注射寡糖增强了免疫功能而被消灭。寡糖还可使腺病毒的致癌率由80％降低至40％。表明寡糖不单是促进免疫排斥的物质而是真正的抗癌物质。
此外，所述的寡糖对各种细菌，病毒，寄生虫的感染也有突出效果。
权利要求
1．一种具有免疫、抗肿瘤活性寡糖的结构及可用做增强免疫力、抗肿瘤，治疗癌症的保健品或药物的寡糖的结构。其特征在于(1)该寡糖主链为4糖或5糖。R→R→R→RR→R→R→R→RR=糖(2)该寡糖主链上具有两个侧链。 R=糖 R1=糖 R2=糖(3)含有这种主链和侧链基本结构的更大的寡糖(如8糖-14糖)如 R=糖 R1=糖 R2=糖2.1(1)中所述的4糖或5糖主链中的糖为均一的葡萄糖。即主链为Glu→Glu→Glu→Glu或Glu→G1u→G1u→G1u→G1uGlu=葡萄糖3.1(1)中所述的主链为1→3β连接。即主链为β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-Glu或β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-β-Glu-1→3-Glu4.1(1)(2)(3)中所述的寡糖为游离寡糖(还原端为羟基)或为寡糖的烷基、芳基苷或寡糖肽。5.1(2)中所述的侧链R1及R2为单糖或寡糖。6.1(2)中所述的侧链可紧密并排排列，亦可由主链的葡萄糖隔开排列。如 7.1(2)中所述的侧链中的糖为葡萄糖、或其它的任何种糖。8.1(2)中所述的侧链中的糖与主链的连接为1→6β或1→6α连接。9.1(2)中所述的侧链中的寡糖可以任何方式连接。10.1中所述的寡糖在使用时可注射或口服(单独用或与其它物质合用)。可用作增强免疫力、抗肿瘤，治疗癌症的保健品或药物。
全文摘要
本发明涉及具有免疫、抗肿瘤活性寡糖的结构及可用做增强免疫力、抗肿瘤,治疗癌症的保健品或药物用的寡糖结构。免疫及抗肿瘤试验表明,这些寡糖是具有主链为1→3β连接的葡聚寡糖,其侧链为1→6连接或其它连接。
文档编号C08B37/00GK1306003SQ0010037
公开日2001年8月1日 申请日期2000年1月19日 优先权日2000年1月19日
发明者宁君, 孔繁祚 申请人:中国科学院生态环境研究中心