专利名称：一种pH敏感的还原响应性纳米凝胶及其制备方法
技术领域：
本发明涉及凝胶材料领域，特别是一种PH敏感的还原响应性纳米水凝胶的制备方法。
背景技术：
纳米凝胶是一种尺寸介于1(Γ1000纳米且能够在水溶液中分散的水凝胶颗粒，通常由物理或化学交联的聚合物网络结构所组成。它不仅具有水含量高，生物相容性好和可调节的化学和机械性能，而且高的比表面积可耦合生物大分子，交联网络可包覆治疗分子， 可调节的粒径尺寸利于调节其体内分布。这些特性使纳米凝胶在组织工程、生物医学置入物、生物纳米技术和药物传递系统方面有着广泛的应用潜力。目前，纳米凝胶的制备方法归纳起来可分为物理方法和化学方法。物理方法是利用亲水性天然高分子或合成高分子在交联剂的存在下通过物理方式(如搅拌、超声等方式) 作用使分子自聚集或粒子分散获得纳米凝胶。化学方法一般是在功能交联剂的存在下采用亲水性或水溶性单体进行非均相聚合制备。海藻酸钠是一种无毒、具有良好生物相容性、生物可降解的天然多糖，已被广泛应用于医药、化妆品、食品等领域。在药物制剂中，以海藻酸钠为基质材料制备纳米粒子载体的研究已有报道，其制备方法可概括为离子交联法、复凝聚法和自组装法三种。离子交联法是利用海藻酸钠易与多价阳离子结合的性质制备纳米粒子，如文献 (European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceuticsj 2009 ；73(1) :25-33)才艮道了用钙离子交联海藻酸钠制备出一系列平均粒径为39Γ558ηπι的纳米粒子。美国专利US2007/0202183A1公开了一种海藻酸钠纳米胶囊的制备方法，该方法是将海藻酸钠的水溶液加入到含表面活性剂的油相中，获得半固化的胶囊，再经钙离子交联得到粒径为 IOO^lOOOnm的纳米胶囊。中国专利CN101549158公开了一种海藻酸钠肝靶向纳米给药系统及其制备方法，以甘草次酸为肝靶向化合物，通过海藻酸钠的羧基与甘草次酸-乙二胺的胺基反应制得甘草次酸-海藻酸钠，再通过钙离子交联获得海藻酸钠肝靶向载药纳米粒。复凝聚法是利用海藻酸钠聚阴离子的性质与聚阳离子聚合物复合制备纳米粒子， 如文献(Nanomedicine Nanotechnology, Biology and Medicine，2007 ;3 :239-243)报道了海藻酸钠与壳聚糖复合制得了平均粒径为2 !!的纳米粒子。自组装法则是对海藻酸钠进行疏水改性，使其成为两亲性高分子然后在溶液中自组装形成纳米粒子，如中国专利CN101565469公开了一种酰胺接枝的海藻酸钠纳米材料的制备方法与应用，在海藻酸钠羧基基团上用化学合成的方法接枝疏水性酰胺进行疏水修饰形成两亲性材料，然后在去离子水中自组装形成粒径在4(Tl000nm之间的纳米粒子，该纳米粒子可作为多种疏水性药物的缓释载体。文献(Journal of Agricultural and Food, 2011 ；59:1962-1967)报道了用油酸酰氯对海藻酸钠进行疏水改性，然后产物在水溶液中自组装形成平均粒径为20(T400nm的纳米粒子，用作维生素D3的缓释载体。海藻酸钠纳米粒子作为药物载体具有诸多优点(1)可使大分子药物顺利通过上皮组织，促进药物的渗透吸收；(2)可延长药物在体内的循环时间，有效地提高药物的利用度，增加药物的吸收；(3)可降低药物的不良反应，减少副作用；(4)通过对海藻酸钠纳米粒子进行适当的修饰，能赋予它对特定器官或病灶组织的靶向作用。然而，目前文献报道的海藻酸钠纳米粒子及其制备方法尚存在以下不足 粒子的稳定性不高，体内易导致纳米粒子过早崩解，药物或活性剂提前释放。粒子用作靶细胞的药物载体，不能响应细胞内环境释放药物。纳米粒子粒径分布较宽，且容易聚集。离子交联法和复凝聚法制备的海藻酸钠纳米粒子不能负载疏水性的药物。个别制备方法如美国专利US2007/0202183A1还使用了表面活性剂及油相有机溶剂。人体细胞内外的氧化还原电位有很大差别，使得药物的运输有潜在的响应性信号。氧化还原电势作为刺激响应性信号在药物的传递方面受到越来越多的重视，其中研究最广的就是利用二硫键的可逆断裂性能制备还原响应性纳米载体。这类还原响应性纳米载体主要利用二硫键在还原性物质如谷胱甘肽和二硫苏糖醇的作用下断裂，从而引起载体结构的变化从而诱发其性能的变化，实现在特定环境下的功能作用。研究表明，谷胱甘肽是细胞中含量比较丰富的一种三肽，它在细胞内的浓度要远高于在细胞外的浓度，这种浓度上的差异为设计还原响应性的纳米凝胶提供了可能。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了解决现有技术中存在的问题，提供一种新型的PH敏感的还原响应性纳米水凝胶的制备方法，该方法制备的纳米水凝胶结构均勻，稳定性高，可以实现原位载药，在生物医学置入物、生物纳米技术和药物传递系统等领域有着广泛的应用潜力。本发明解决其技术问题采用以下的技术方案
本发明提供的PH敏感的还原响应性纳米凝胶，其有效组成为二硫键交联的海藻酸钠衍生物，该纳米凝胶由以下方法制成取海藻酸钠的水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 :(0.01 10)向其中加入高碘酸盐，避光反应得到双醛海藻酸钠；然后取双醛海藻酸钠的水溶液与4-巯基苯胺的乙醇溶液，按照双醛海藻酸钠的醛基与4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 :(0.0广10)，于(T25°C避光搅拌混合均勻后加入硼氢化物反应， 获得巯基化海藻酸钠；巯基化海藻酸钠在水溶液中自组装并经溶液中的氧气氧化形成二硫键交联的纳米粒，即得所述PH敏感的还原响应性纳米凝胶。所述的海藻酸钠水溶液，按W/V计，其浓度为0. 59Γ5%。所述的双醛海藻酸钠水溶液重量浓度为彡5%，优选重量浓度为0. 019Tl%。所述的4-巯基苯胺的乙醇溶液的重量浓度为< 50%，优选重量浓度为 0. 019Tl0%。本发明提供的ρΗ敏感的还原响应性纳米水凝胶的制备方法，其步骤包括 (1)双醛海藻酸钠的制备
取海藻酸钠的水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 :(0.01 10) 向其中加入高碘酸盐，控制温度2(T40°C，避光搅拌反应后加入乙二醇终止反应；然后加入乙醇使其析出沉淀，并减压抽滤获得白色产物，该产物经去离子水重新溶解，并用乙醇重新析出后，干燥即得不同氧化程度的双醛海藻酸钠；
(2)巯基化海藻酸钠的制备
取双醛海藻酸钠的水溶液，按双醛海藻酸钠的醛基与4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为 1 :(0. 0广10)，加入4-巯基苯胺的乙醇溶液，搅拌反应Mi后加入NaBH4,用0. IMHCl调节pH 值为7. 0，控温在4°C以下继续搅拌反应lh，在氮气保护下透析后，冷冻干燥即得；
(3)还原响应性纳米凝胶的制备
取0. 5^5mg/mL巯基化海藻酸钠的去离子水溶液，静置24h后超声3min，即得所述还原响应性纳米水凝胶。上述方法制备的还原响应性纳米水凝胶，其用于生物医学置入物、生物纳米技术或药物传递系统领域。上述方法制备的还原响应性纳米水凝胶，其用于制备还原响应性的靶向纳米凝胶。或者，通过上述方法步骤(1)、(2)和(3)制备的还原响应性纳米凝胶表面羧基耦合靶分子或靶分子衍生物，获得还原响应性的主动靶向纳米凝胶。所述还原响应性纳米凝胶表面羧基耦合靶分子或靶分子衍生物为特异性的配体， 或高度特异性抗体，或者是至少一种特异性的配体与至少一种高度特异性抗体。所述特异性的配体为叶酸及其衍生物、转铁蛋白、麦胚凝集素、半乳糖及其衍生物、甘露糖及其衍生物中的一种。所述高度特异性抗体为Fab抗体片段、肺内皮细胞抗体34A、急性髓系白血病细胞CD33抗体、抗人表皮生长因子受体2的单克隆抗体Mabs或抗B细胞淋巴瘤的单克隆抗体 LL2。本发明采用无毒、可生物降解且水溶性良好的海藻酸钠为基质，通过巯基化，在水溶液中自组装并经溶液中的氧气氧化形成二硫键交联的纳米凝胶，其与现有技术相比具有以下的主要优点
(1)在氧化交联之前，通过室温搅拌，巯基化海藻酸钠在水溶液中可自组装形成纳米粒，不需要加入乳化剂等其他物质。(2)通过溶液中空气氧化巯基原位形成二硫键交联，不仅能锁定纳米粒的形态，而且获得的纳米凝胶具有很好的稳定性。(3)采用原位交联方式可实现药物的原位负载，方便剂型成型，作为药物的缓控释载体具有潜在的应用价值；而且由于整个交联过程可在室温或室温以下进行，非常适合热不稳定药物的负载与剂型的成型。(4)由于形成二硫键交联，纳米凝胶内的药物可避免提前释放出来；一旦进入目标细胞，又能响应细胞内的谷胱甘肽浓度的升高，发生二硫键断裂释放药物，从而具有智能控释性。(5)纳米凝胶表面的羧基通过耦合靶分子或靶分子衍生物，可获得靶向纳米凝胶。(6)载体基质材料具有无毒和可生物降解性。
图1为本发明制备的pH敏感的还原响应性纳米凝胶的透射电镜图。
图2为本发明制备的还原响应性纳米凝胶在不同pH缓冲溶液中的粒径变化曲线图。
具体实施例方式下面结合实施例及附图对本发明作进一步说明，但并不局限于下面所述内容。本发明提供了有别于现有技术的pH敏感的还原响应性纳米凝胶，其有效组成为二硫键交联的海藻酸钠衍生物。该纳米凝胶由以下方法制成取海藻酸钠的水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 :(0.01 10)向其中加入高碘酸盐，避光反应得到双醛海藻酸钠；然后取双醛海藻酸钠的水溶液与4-巯基苯胺的乙醇溶液，按照双醛海藻酸钠的醛基与4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 :(0.0广10)，于(T25°C避光搅拌混合均勻后加入硼氢化物反应，获得巯基化海藻酸钠；巯基化海藻酸钠在水溶液中自组装并经溶液中的氧气氧化形成二硫键交联的纳米粒，即得所述PH敏感的还原响应性纳米凝胶。按W/V计，所述的海藻酸钠水溶液的浓度为0. 59Γ5%。所述的双醛海藻酸钠水溶液重量浓度为< 5%，其中优选重量浓度为0. 019Tl%。所述的4-巯基苯胺的乙醇溶液的重量浓度为< 50%，其中优选重量浓度为 0. 019Tl0%。本发明还提供了以下方法制备pH敏感的还原响应性纳米凝胶，例如 实施例1
(1)取1% (W/V)的海藻酸钠水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 0.5向其中加入高碘酸盐，在25°C下避光搅拌反应后加入乙二醇终止反应。然后，加入乙醇使其析出沉淀，并减压抽滤获得白色产物。产物经去离子水重新溶解，并用乙醇重新析出后，干燥得到氧化度为44. 36%的双醛海藻酸钠。(2)取重量百分比为0. 3%的上述双醛海藻酸钠水溶液，按双醛海藻酸钠的醛基与 4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 :1，加入4-巯基苯胺的乙醇溶液，混合搅拌反应他后加入 NaBH4,用0. IMHCl调节pH值为7. 0，控温在4°C以下继续搅拌反应lh，在氮气保护下透析后， 冷冻干燥得到巯基含量为四8. 9 μ mol/g的巯基化海藻酸钠。(3)取lmg/mL巯基化海藻酸钠的去离子水溶液，静置24h后超声3min，获得平均粒径为171nm的还原响应性纳米水凝胶(图1)。将制备的还原响应性纳米凝胶均分为两组， 一组置于谷胱甘肽浓度为0，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米凝胶粒径为168nm，多分散系数为0. 063 ；另一组置于谷胱甘肽浓度为10mM，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米粒子粒径为 197nm，多分散系数为0. 183。实施例2
(1)取2% (W/V)的海藻酸钠水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 0.5向其中加入高碘酸盐，在25°C下避光搅拌反应他后加入乙二醇终止反应。然后，加入乙醇使其析出沉淀，并减压抽滤获得白色产物。产物经去离子水重新溶解，并用乙醇重新析出后，干燥得到氧化度为42. 57%的双醛海藻酸钠。(2)取重量百分比为0. 2%的上述双醛海藻酸钠水溶液，按双醛海藻酸钠的醛基与 4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 :0. 75，加入4-巯基苯胺的乙醇溶液，混合搅拌反应他后加入NaBH4,用0. IMHCl调节pH值为7. 0，控温在4V以下继续搅拌反应lh，在氮气保护下透析后，冷冻干燥得到巯基含量为270. 1 μ mol/g的巯基化海藻酸钠。(3)取lmg/mL巯基化海藻酸钠的去离子水溶液，静置24h后超声3min，获得平均粒径为ISOnm的还原响应性纳米水凝胶。将制备的还原响应性纳米凝胶均分为两组，一组置于谷胱甘肽浓度为0，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米凝胶粒径为177nm，多分散系数为0. 060 ；另一组置于谷胱甘肽浓度为10mM，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米粒子粒径为 236nm，多分散系数为0. 218。实施例3
(1)取1% (w/ν)的海藻酸钠水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 0. 25向其中加入高碘酸盐，在25°C下避光搅拌反应他后加入乙二醇终止反应。然后，加入乙醇使其析出沉淀，并减压抽滤获得白色产物。产物经去离子水重新溶解，并用乙醇重新析出后，干燥得到氧化度为24. 66%的双醛海藻酸钠。(2)取重量百分比为0. 3%的上述双醛海藻酸钠水溶液，按双醛海藻酸钠的醛基与 4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 :1. 25，加入4-巯基苯胺的乙醇溶液，混合搅拌反应他后加入NaBH4,用0. IMHCl调节pH值为7. 0，控温在4°C以下继续搅拌反应lh，在氮气保护下透析后，冷冻干燥得到巯基含量为191. 8 μ mol/g的巯基化海藻酸钠。(3)取lmg/mL巯基化海藻酸钠的去离子水溶液，静置24h后超声3min，获得平均粒径为203nm的还原响应性纳米水凝胶。将制备的还原响应性纳米凝胶均分为两组，一组置于谷胱甘肽浓度为0，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米凝胶粒径为200nm，多分散系数为0. 088 ；另一组置于谷胱甘肽浓度为10mM，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米粒子粒径为 278nm，多分散系数为0. 223。实施例4
(1)取3% (W/V)的海藻酸钠水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 0.5向其中加入高碘酸盐，在25°C下避光搅拌反应他后加入乙二醇终止反应。然后，加入乙醇使其析出沉淀，并减压抽滤获得白色产物。产物经去离子水重新溶解，并用乙醇重新析出后，干燥得到氧化度为40. 87%的双醛海藻酸钠。(2)取重量百分比为0. 25%的上述双醛海藻酸钠水溶液，按双醛海藻酸钠的醛基与4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 1. 5，加入4-巯基苯胺的乙醇溶液，混合搅拌反应他后加入NaBH4，用0. IMHCl调节pH值为7. 0，控温在4°C以下继续搅拌反应lh，在氮气保护下透析后，冷冻干燥得到巯基含量为310. 6 μ mol/g的巯基化海藻酸钠。(3)取lmg/mL巯基化海藻酸钠的去离子水溶液，静置24h后超声3min，获得平均粒径为IMnm的还原响应性纳米水凝胶。将制备的还原响应性纳米凝胶均分为两组，一组置于谷胱甘肽浓度为0，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米凝胶粒径为152nm，多分散系数为0. 065 ；另一组置于谷胱甘肽浓度为10mM，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米粒子粒径为 186nm，多分散系数为0. 199。实施例5:
(1)取1% (w/ν)的海藻酸钠水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 0.5向其中加入高碘酸盐，在25°C下避光搅拌反应后加入乙二醇终止反应。然后，加入乙醇使其析出沉淀，并减压抽滤获得白色产物。产物经去离子水重新溶解，并用乙醇重新析出后，干燥得到氧化度为49. 78%的双醛海藻酸钠。
(2)取重量百分比为0. 2%的上述双醛海藻酸钠水溶液，按双醛海藻酸钠的醛基与 4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 :1. 5，加入4-巯基苯胺的乙醇溶液，混合搅拌反应他后加入NaBH4,用0. IMHCl调节pH值为7. 0，控温在4°C以下继续搅拌反应lh，在氮气保护下透析后，冷冻干燥得到巯基含量为321. 5ymol/g的巯基化海藻酸钠。(3)取ang/mL巯基化海藻酸钠的去离子水溶液，静置24h后超声3min，获得平均粒径为150nm的还原响应性纳米水凝胶。将制备的还原响应性纳米凝胶均分为两组，一组置于谷胱甘肽浓度为0，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米凝胶粒径为147nm，多分散系数为0. 096 ；另一组置于谷胱甘肽浓度为10mM，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米粒子粒径为 202nm，多分散系数为0. 232。实施例6
(1)取洲(W/V)的海藻酸钠水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 0. 75向其中加入高碘酸盐，在25°C下避光搅拌反应他后加入乙二醇终止反应。然后，加入乙醇使其析出沉淀，并减压抽滤获得白色产物。产物经去离子水重新溶解，并用乙醇重新析出后，干燥得到氧化度为56. 88%的双醛海藻酸钠。(2)取重量百分比为0. 1%的上述双醛海藻酸钠水溶液，按双醛海藻酸钠的醛基与 4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 :2，加入4-巯基苯胺的乙醇溶液，混合搅拌反应他后加入 NaBH4,用0. IMHCl调节pH值为7. 0，控温在4°C以下继续搅拌反应lh，在氮气保护下透析后， 冷冻干燥得到巯基含量为356. 5 μ mol/g的巯基化海藻酸钠。(3)取ang/mL巯基化海藻酸钠的去离子水溶液，静置24h后超声3min，获得平均粒径为143nm的还原响应性纳米水凝胶。将制备的还原响应性纳米凝胶均分为两组，一组置于谷胱甘肽浓度为0，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米凝胶粒径为140nm，多分散系数为0. 080 ；另一组置于谷胱甘肽浓度为10mM，pH7. 4的缓冲溶液中，测得纳米粒子粒径为 211nm，多分散系数为0. 215。比较上述实施例1、2、3、4、5、6中制备的还原响应性纳米凝胶分别置于谷胱甘肽浓度为0，pH7. 4的缓冲溶液和谷胱甘肽浓度为10mM，pH7. 4的缓冲溶液中的粒径大小及多分散系数，可以得到制备的还原响应性纳米凝胶在IOmM的谷胱甘肽溶液中粒径变大，多分散系数变大，说明本发明制备的还原响应性纳米凝胶具有还原响应性。将上述实施例1、2、3、4中制备的还原响应性纳米凝胶平分为7组，分别调节pH值为2. 2,3. 0,4. 0,5. 0,6. 0,7. 0和8. 0，测定还原响应性纳米凝胶的粒径大小。结果显示，本发明制备的还原响应性纳米凝胶具有良好的pH敏感性(图2)。在图2中，曲线a是实施例 1中还原响应性纳米凝胶的粒径变化曲线；曲线b是实施例2中还原响应性纳米凝胶的粒径变化曲线；曲线c是实施例3中还原响应性纳米凝胶的粒径变化曲线；曲线d是实施例4 中还原响应性纳米凝胶的粒径变化曲线。本发明提供的pH敏感的还原响应性纳米凝胶的制备方法，还可以采用以下的原料
按W/ν计，所述的海藻酸钠水溶液的浓度为0. 59Γ5%。所述的双醛海藻酸钠水溶液重量浓度为< 5%，其中优选重量浓度为0. 019Tl%。所述的4-巯基苯胺的乙醇溶液的重量浓度为< 50%，其中优选重量浓度为 0. 019Tl0%。
本发明提供的pH敏感的还原响应性纳米凝胶，或者由本发明提供的方法制备的 PH敏感的还原响应性纳米凝胶，其用于制备还原响应性的靶向纳米凝胶。本发明提供的上述方法中，通过步骤(1)、(2)和(3)制备的还原响应性纳米凝胶表面羧基耦合靶分子或靶分子衍生物，其用于制备还原响应性的主动靶向纳米凝胶。
权利要求
1.一种pH敏感的还原响应性纳米凝胶，其特征是该纳米凝胶的有效组成为二硫键交联的海藻酸钠衍生物，该纳米凝胶由以下方法制成取海藻酸钠的水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 :(0.01 10)向其中加入高碘酸盐，避光反应得到双醛海藻酸钠；然后取双醛海藻酸钠的水溶液与4-巯基苯胺的乙醇溶液，按照双醛海藻酸钠的醛基与4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1 :(0.0广10)，于(T25°C避光搅拌混合均勻后加入硼氢化物反应，获得巯基化海藻酸钠；巯基化海藻酸钠在水溶液中自组装并经溶液中的氧气氧化形成二硫键交联的纳米粒，即得所述PH敏感的还原响应性纳米凝胶。
2.根据权利要求1所述的pH敏感的还原响应性纳米凝胶，其特征在于按W/V计，所述的海藻酸钠水溶液的浓度为0. 59Γ5%。
3.根据权利要求1所述的pH敏感的还原响应纳米凝胶，其特征在于所述的双醛海藻酸钠水溶液重量浓度为< 5%。
4.根据权利要求3所述的pH敏感的还原响应纳米凝胶，其特征在于所述的双醛海藻酸钠水溶液的优选重量浓度为0. 019Tl%。
5.根据权利要求1所述的PH敏感的还原响应纳米凝胶，其特征在于所述的4-巯基苯胺的乙醇溶液的重量浓度为<50%。
6.根据权利要求5所述的pH敏感的还原响应纳米凝胶，其特征在于所述的4-巯基苯胺的乙醇溶液的优选重量浓度为0. 019Γ10%。
7.—种pH敏感的还原响应性纳米水凝胶的制备方法，其特征是采用以下方法制备还原响应性纳米凝胶，其步骤包括(1)双醛海藻酸钠的制备取海藻酸钠的水溶液，按照海藻酸钠的糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1 :(0. 01 10) 向其中加入高碘酸盐，控制温度2(T40°C，避光搅拌反应他后加入乙二醇终止反应；然后加入乙醇使其析出沉淀，并减压抽滤获得白色产物，该产物经去离子水重新溶解，并用乙醇重新析出后，干燥即得不同氧化程度的双醛海藻酸钠；(2)巯基化海藻酸钠的制备取双醛海藻酸钠的水溶液，按双醛海藻酸钠的醛基与4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为 1 :(0. 0广10)，加入4-巯基苯胺的乙醇溶液，搅拌反应Mi后加入NaBH4,用0. IMHCl调节pH 值为7. 0，控温在4°C以下继续搅拌反应lh，在氮气保护下透析后，冷冻干燥即得；(3)还原响应性纳米凝胶的制备取0. 5^5mg/mL巯基化海藻酸钠的去离子水溶液，静置24h后超声3min，即得所述还原响应性纳米水凝胶。
8.—种pH敏感的还原响应性纳米水凝胶的用途，其特征在于将权利要求7所述方法制备的还原响应性纳米水凝胶用于生物医学置入物、生物纳米技术或药物传递系统领域。
9.一种pH敏感的还原响应性纳米水凝胶的用途，其特征在于将权利要求7所述方法制备的还原响应性纳米水凝胶用于制备还原响应性的靶向纳米凝胶；或者，通过步骤(1)、 (2)和(3)制备的还原响应性纳米凝胶表面羧基耦合靶分子或靶分子衍生物，获得还原响应性的主动靶向纳米凝胶。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于所述还原响应性纳米凝胶表面羧基耦合靶分子或靶分子衍生物为特异性的配体，或高度特异性抗体，或者是至少一种特异性的配体与至少一种高度特异性抗体；所述特异性的配体为叶酸及其衍生物、转铁蛋白、麦胚凝集素、半乳糖及其衍生物、甘露糖及其衍生物中的一种；所述高度特异性抗体为Fab抗体片段、肺内皮细胞抗体34A、急性髓系白血病细胞 CD33抗体、抗人表皮生长因子受体2的单克隆抗体Mabs或抗B细胞淋巴瘤的单克隆抗体 LL2。
全文摘要
本发明涉及pH敏感的还原响应性纳米凝胶，其有效组成为二硫键交联的海藻酸钠衍生物，其制备方法为取海藻酸钠的水溶液，按照其糖单元与高碘酸盐的摩尔比为1(0.01～10)向其中加入高碘酸盐，避光反应得到双醛海藻酸钠；取双醛海藻酸钠的水溶液与4-巯基苯胺的乙醇溶液，按照双醛海藻酸钠的醛基与4-巯基苯胺的胺基的摩尔比为1(0.01~10)，于0~25℃避光搅拌混匀后加入硼氢化钠，获得巯基化海藻酸钠；巯基化海藻酸钠在水溶液中自组装并经溶液中的氧气氧化，得到所述纳米凝胶。本发明制得的纳米凝胶具有稳定性、pH敏感性和还原响应性，在生物医学置入物、生物纳米技术和药物传递系统等领域有潜在的应用价值。
文档编号C08J3/075GK102250365SQ20111011712
公开日2011年11月23日 申请日期2011年5月9日 优先权日2011年5月9日
发明者孙艳娟, 常丹, 张晓花, 殷以华, 郑化, 雷静 申请人:武汉理工大学