哺乳动物多潜能干细胞外源基因高效转染及快速筛选的制造方法与工艺

技术特征：
1.一种利用脂质体法将外源基因高效转染哺乳动物多潜能干细胞的方法，其特征在于，(1)外源基因高效转染哺乳动物多潜能干细胞的方法步骤如下：配制绵羊羊水来源多潜能干细胞培养液：培养液I：DMEM+1％L-谷氨酰胺+1％非必需氨基酸+1％丙酮酸钠+微量β-巯基乙醇+5ng或500u/mLLIF+5ng/mLbFGF；培养液II：培养液I+15％FBS；培养液III：培养液I+5％FBS，用0.22μL的滤器过滤，4℃保存；所述脂质体法转染的步骤为：转染24h前，待转染绵羊羊水来源多潜能干细胞胰酶消化重悬细胞，以5×104细胞/孔密度接种2×24孔板，使用培养液II，待细胞80％汇合度时，进行转染；转染前，AFSC用D-PBS洗三遍，换为Opti-MEM培养液于37℃5％CO2饱和湿度条件下培养30～40min；350ng/μL质粒DNA2μL+100μLOpti-MEM+0.7μLPlus，室温静置5min；转染时，在上述转染前的混合液中再添加2uLLTX，混均，室温静置30min后滴加入待转染的孔中，37℃5％CO2饱和湿度条件下培养6h后，24孔板换为培养液III；培养36h后换为培养液II；同时，0.25％胰酶消化收集细胞，以未转染的绵羊羊水来源多潜能干细胞为阴性对照，流式细胞仪测定基因转染的瞬时转染效率；(2)转基因多潜能干细胞筛选的方法步骤如下：外源基因携带有新霉素抗性基因，将外源基因转染哺乳动物多潜能干细胞36小时后，以含有500μg/mLG418的干细胞培养液培养20小时，然后再以含有6mg/mLG418的干细胞培养液培养5小时；连续传2代，获得纯化的转基因多潜能干细胞克隆。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：该方法获得的哺乳动物转基因多潜能干细胞能够表达Oct4、SSEA和MHC基因，体外悬浮培养能够形成类胚体。