一种云芝多糖的提取工艺的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种云芝多糖的提取工艺，其从云芝中提取出水溶性多糖，经脱色后，加入纤维素酶和中性蛋白酶，其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4-6%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，调节pH6.5，温度45-55℃，时间60-90min，减压浓缩至原体积的70%，抽滤取其清液；而后用无水乙醇洗涤、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量为32%-45%。本发明经过双酶酶解发酵提取云芝提取物，其工艺简单，成本较低，提取率高。特别是通过纤维素酶进行破壁处理，蛋白酶进行去蛋白处理，避免了大分子蛋白带来的溶解度低等缺点，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人体吸收和利用。
【专利说明】
一种云芝多糖的提取工艺
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种云芝有效成分的提取方法，具体地说是一种云芝多糖的提取工艺。
【背景技术】
[0002]云芝多糖是从担子菌杂色云芝菌种提取的多糖，也可以从人工培养的菌丝体中分离得到。具有多种生物活性。研究表明云芝多糖具有免疫调节功能，是良好的免疫增强剂，具有增强免疫细胞功能和识别能力，提高IgM的量等作用；云芝多糖同时具有保肝护肝作用，可显著降低血清转氨酶，对肝组织病变和肝坏死有明显的修复作用。相关的多糖制剂已经被广泛应用于临床。传统的云芝多糖的提取方法有热水提取法，其将云芝浸泡在热水中，从云芝中提取出水溶性多糖。但此方法耗时长，多糖的提取率较低，成本高。特别是云芝提取物中大分子蛋白质含量高，因云芝多糖是含蛋白质的葡聚糖，而大分子的蛋白质会影响其溶解性和吸收率，影响其生物活性。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种工艺简单，提取率高，成本低的云芝多糖的提取工艺。
[0004]本发明解决上述技术问题采用的技术方案是:一种云芝多糖的提取工艺，其特征在于:其具体步骤如下:
1)称取一定质量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒温水浴下回流，浸提两次；
2)将步骤I)所得溶液离心过滤，取其上清液，然后经过树脂吸附脱去颜色，静置24h；
3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解，其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4-6%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，调节pH6.5，温度45-55°C，时间60_90min，减压浓缩至原体积的70%，抽滤取其清液；
4)将步骤3)得到的清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量为32%-45%。
[0005]进一步，本发明所述步骤3)中上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解，其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的5.5%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，调节pH6.5，温度50°C，时间90min。
[0006]本发明经过双酶酶解发酵提取云芝提取物，其中云芝多糖含量为32%_45%。对照现有技术，本发明工艺简单，成本较低，提取率高。特别是通过纤维素酶进行破壁处理，蛋白酶进行去蛋白处理，避免了大分子蛋白带来的溶解度低等缺点，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人体吸收和利用。
【具体实施方式】
[0007]下面结合实施例对本发明做进一步说明。
[0008]本发明一种云芝多糖的提取工艺，其步骤是:云芝样品烘干一〉粉碎(过80目筛)一> 水解一> 保湿浸提一> 尚心一> 上清液一> 大孔树脂吸附一> 酶解一> 减压浓缩一>醇沉一〉烘干。具体步骤为:
I)称取一定质量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒温水浴下回流，浸提两次。
[0009]2)将步骤I)所得溶液离心过滤，取其上清液，然后经过树脂吸附脱去颜色，静置24h。
[0010]3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解，其中两种酶浓度均为1.5%，酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4-6%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%。调节pH6.5，温度45-55°C，时间60_90min，减压浓缩至原体积的70%，抽滤取其清液。利用酶反应具有高度专一性等特性，根据植物药材细胞壁的构成，纤维素酶能将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁结构，使有效成分充分暴露出来，溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取细胞内有效成分的目的。中性蛋白酶能进行去蛋白处理，使蛋白质沉淀，减少水溶性多糖中大分子蛋白的残留。
[0011]4)将步骤3)得到的清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量为32%-45%。
[0012]本发明从云芝中提取出水溶性多糖，经脱色后，加入纤维素酶和中性蛋白酶。利用酶反应具有高度专一性等特性，根据植物药材细胞壁的构成，纤维素酶能将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁结构，使有效成分充分暴露出来，溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取细胞内有效成分的目的。中性蛋白酶能进行去蛋白处理，使蛋白质沉淀，减少水溶性多糖中大分子蛋白的残留。
[0013]本发明经过双酶酶解发酵提取云芝提取物，其中云芝多糖含量为32%_45%。其工艺简单，成本较低，提取率高。特别是通过纤维素酶进行破壁处理，蛋白酶进行去蛋白处理，避免了大分子蛋白带来的溶解度低等缺点，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人体吸收和利用。
[0014]实施例1:一种云芝多糖提取工艺，其具体步骤为:
I)称取处理的云芝粉末200g，加入4000ml的水，浸泡90min，于50°C恒温水浴下回流，浸提两次。
[0015]2)将步骤I)所得溶液离心过滤取其上清液，然后经过大孔树脂吸附脱去颜色，静置 24h。
[0016]3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和蛋白酶，其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的5.5%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，调节pH6.5，温度50°C，时间90min，减压浓缩至原体积的70%，抽滤取其清液。
[0017]4)将步骤3)清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物24g。经测定，其中云芝多糖含量为45%。
[0018]云芝多糖含量测定方法是:称取干燥恒重的葡萄糖50g，置250ml容量瓶中加水溶解后稀释成母液。分别吸取母液5.0、10.0、15.0,20.0,25.0ml加水稀释成50ml。取各浓度的标准液Iml于试管中加入5%苯酹溶液0.3ml,再加浓硫酸3ml,摇勻,放置20min,以蒸懼水为空白，在490nm处测吸光度。并绘制标准曲线。然后称取上述制备的云芝多糖提取物250mg加蒸馏水适量使溶解，置1ml量瓶中加蒸馏水定容至刻度线。然后再取Iml用蒸馏水定容至50ml，摇匀，测其吸光值。测定其中云芝多糖含量为45%。
[0019]实施例2:—种云芝多糖提取工艺，其具体步骤为:
I)称取处理的云芝粉末100g，加入2000ml的水，浸泡60min，于55°C恒温水浴下回流，浸提两次。
[0020]2)将步骤I)所得溶液离心过滤取其上清液，然后经过大孔树脂吸附脱去颜色，静置 24h。
[0021]3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和蛋白酶，其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的4%，调节pH6.5，温度45°C，时间60min，减压浓缩至原体积的70%，抽滤取其清液。
[0022]4)将步骤3)清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物10.5g，经测定，其中云芝多糖含量为32%。
[0023]实施例3:—种云芝多糖提取工艺，其具体步骤为:
I)称取处理的云芝粉末200g，加入5000ml的水，浸泡80min，于60°C恒温水浴下回流，浸提两次。
[0024]2)将步骤I)所得溶液离心过滤取其上清液，然后经过大孔树脂吸附脱去颜色，静置 24h。
[0025]3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和蛋白酶，其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的6%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2%，调节pH6.5，温度55°C，时间80min，减压浓缩至原体积的70%，抽滤取其清液。
[0026]4)将步骤3)清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物25g，经测定，其中云芝多糖含量为38%。
[0027]通过对实施例1-3进行云芝多糖含量测定，结合含量和云芝提取物得率，确定实施例I为优化工艺。
【权利要求】
1.一种云芝多糖的提取工艺，其特征在于:其具体步骤如下: 1)称取一定质量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒温水浴下回流，浸提两次； 2)将步骤1)所得溶液离心过滤，取其上清液，然后经过树脂吸附脱去颜色，静置24h； 3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解，其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4-6%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，调节pH6.5，温度45-55°C，时间60_90min，减压浓缩至原体积的70%，抽滤取其清液； 4)将步骤3)得到的清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量为32%-45%。
2.根据权利要求1所述的云芝多糖的提取工艺，其特征在于:所述步骤3)中上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解，其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的.5.5%，酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，调节pH6.5，温度50°C，时间90min。
【文档编号】C08B37/00GK104387496SQ201410785842
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年12月18日 优先权日:2014年12月18日
【发明者】王丽娜, 蔡传文, 张伟 申请人:威海百合生物技术股份有限公司