一种海参多糖的检测方法
【专利摘要】本发明提供一种海参多糖的检测方法，包括如下步骤：（1）碱性蛋白酶酶解法制备海参供试液；（2）以天青Ⅰ试剂为染色剂、以海刺参粘多糖为标准物质，制备海参多糖标准曲线；（3）以天青Ⅰ试剂为染色剂测定试样，利用标准曲线方程计算出海参多糖相对应的质量数，再计算供试液中海参多糖的浓度。本发明的方法灵敏、准确，可用在日常的产品监测中。
【专利说明】一种海参多糖的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品化学分析领域，具体涉及一种海参多糖的检测方法。
【背景技术】
[0002]海参市场的开发已经初具规模，产品形式也多种多样，但是在海参指标成分(例如海参多糖)的检测上，尚没有统一、灵敏的检测方法。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种针对海参多糖的检测方法。
[0004]本发明的海参多糖的检测方法包括如下步骤:
[0005]( I)制备海参供试液
[0006]称取2g液体样品或粉碎后的固体样品置于500ml的塑料离心管中，加入IOOml去离子水，混合均匀，放入已恒温105°C的干燥箱中加热lh，取出冷却至室温后，加入0.2ml碱性蛋白酶，摇匀，室温下酶解lh，放入100°C水浴锅中，灭活酶IOmin后，12000r/min高速离心30min，将离心液全部倒入量器中量取体积，移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去离子水定容至刻度；
[0007](2)制备海参多糖标准曲线
[0008]准确称取250mg天青I溶于250ml去离子水中，溶解摇匀，得到lmg/ml的天青I储备液，将天青I储备液与去离子水按体积比1:29混合均匀，调节使其最大吸光度A=2.1?2.2，置于冰箱中冷藏保存，得到天青I试液；
[0009]准确称取0.4mg海刺参粘多糖标准物质溶于2ml去离子水中，溶解摇匀，置于冰箱中冷藏保存，得到0.2mg/ml的标准试液；
[0010]在7个IOml试管中，分别加入标准试液O、5、10、20、30、40、50 μ I，将溶液体积不足50 μ I的试管补加入水,使每支试管中的溶液体积均为50 μ I,然后加入Iml天青I试液，混匀立即测定其吸光度值，以空白50 μ I水加入Iml天青I试液的吸光度为对照，平行做三组，取其算术平均值，以标准试液中海刺参粘多糖质量μ g与其相应的吸光度做直线回归，得到标准曲线；
[0011](3)测定试样
[0012]移取海参供试液50 μ I于试管中，加入Iml天青I试液，混匀立即测定其吸光度值，以空白50 μ I水加入Iml天青I试液的吸光度为对照，利用标准曲线方程计算出海参多糖相对应的质量数，再计算供试液中海参多糖的浓度。
[0013]本发明的原理如下:海参样品经酶解、离心分离后，酶解液用天青I试剂染色，其吸光度(510nm)在一定浓度范围内与多糖质量成正比，以标准多糖溶液做对照，就可采用分光光度法测得供试品中多糖的含量。
[0014]本发明的方法灵敏、准确，可用在日常的产品监测中。【具体实施方式】
[0015]下面结合实施例说明本发明，但本发明并不局限于这些实施例。
[0016]1.试剂与标准物质
[0017]⑴天青1:生物染色剂
[0018]⑵标准物质:海刺参粘多糖
[0019]⑶天青I储备液(lmg/ml):称取天青I 250mg (准确至0.0lmg)溶于250ml去离子水中，溶解摇匀，放入冰箱中冷藏保存。
[0020]⑷天青I试液:天青I储备液与去离子水按1:29 (V/V)比例混合均匀，调节使其最大吸光度在A=2.1?2.2之间，置于冰箱中冷藏保存。
[0021](5)标准试液(0.2mg/ml):准确称取海刺参粘多糖标准物质0.4mg(准确至0.0OOlg)溶于2ml去离子水中，溶解后摇匀，置于冰箱中冷藏保存。
[0022]2.仪器
[0023]⑴紫外分光光度计(UV)
[0024](2)比色皿:ImmX Icm 或 IcmX Icm
[0025]⑶试管:10ml
[0026]⑷分析天平:感量0.lmg、0.0lmg
[0027](5)微量定量针:100 μ 1、50 μ 1、25 μ I
[0028](6)离心机:500ml 最大转速为 12000r/min
[0029](7)水浴锅
[0030]⑶恒温干燥箱
[0031]3.试样制备
[0032]3.1将样品粉碎(液体除外)，称取2g (精确至0.0Olg)置于500ml的塑料离心管中，加入IOOml去离子水，混合均匀，放入已恒温105°C的干燥箱中加热lh。取出冷却至室温，加入0.2ml碱性蛋白酶,摇匀，室温下酶解Ih,放入100°C水浴锅中，灭活酶IOmin后，12000r/min高速离心30min。将离心清液全部倒入量器中量取体积V。
[0033]3.2移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去离子水定容至刻度。
[0034]4.测定步骤
[0035]4.1标准曲线的制备
[0036]在7个IOml试管中，分别加入标准试液O、5、10、20、30、40、50 μ I，在溶液体积不足
50 μ I的试管中补加入水，使每支试管中的溶液体积相同。然后加入Iml天青I试液，混匀立即测定其吸光度值，以空白50μ I水加入Iml天青I试液的吸光度为对照，平行做三组，取其算术平均值，以标准试液中多糖质量(μ g)与其相应的吸光度做直线回归，相关系数不低于0.99。
[0037]4.2试样的测定
[0038]移取试样50 μ I于试管中，加入Iml天青I试液，混合均匀立即读取吸光度值，以空白50 μ I水加入Iml天青I试液的吸光度为对照。利用回归方程计算出相对应的质量数，再计算样品中海参粘多糖的含量。
【权利要求】
1.一种海参多糖的检测方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)制备海参供试液 称取2g液体样品或粉碎后的固体样品置于500ml的塑料离心管中，加入IOOml去离子水，混合均匀，放入已恒温105°C的干燥箱中加热lh，取出冷却至室温后，加入0.2ml碱性蛋白酶，摇匀，室温下酶解lh，放入100°C水浴锅中，灭活酶IOmin后，12000r/min高速离心30min，将离心液全部倒入量器中量取体积，移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去离子水定容至刻度； (2)制备海参多糖标准曲线 准确称取250mg天青I溶于250ml去离子水中，溶解摇匀，得到lmg/ml的天青I储备液，将天青I储备液与去离子水按体积比1:29混合均匀，调节使其最大吸光度A=2.1~2.2，置于冰箱中冷藏保存，得到天青I试液； 准确称取0.4mg海刺参粘多糖标准物质溶于2ml去离子水中，溶解摇匀，置于冰箱中冷藏保存，得到0.2mg/ml的标准试液； 在7个IOml试管中，分别加入标准试液0、5、10、20、30、40、5μl，将溶液体积不足50 μ I的试管补加入水,使每支试管中的溶液体积均为50 μ I,然后加入Iml天青I试液,混匀立即测定其吸光度值，以空白50 μ I水加入Iml天青I试液的吸光度为对照，平行做三组，取其算术平均值，以标准试液中海刺参粘多糖质量μ g与其相应的吸光度做直线回归，得到标准曲线； (3)测定试样 移取海参供试液50 μ I于试管中，加入Iml天青I试液，混匀立即测定其吸光度值，以空白50μ I水加入Iml天青I试液的吸光度为对照，利用标准曲线方程计算出海参多糖相对应的质量数，再计算供试液中海参多糖的浓度。
【文档编号】G01N21/78GK103454270SQ201310412043
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年9月11日 优先权日:2013年9月11日
【发明者】焦健, 邵俊杰 申请人:大连海晏堂生物有限公司