专利名称：一种制备高纯黄芪多糖的方法
技术领域：
本发明涉及一种植物多糖的制备方法，尤其涉及一种从中药黄芪中分离制备高纯黄芪多糖的方法。
背景技术：
黄芪(Radix Astragali)别名绵黄芪，英文MilkvetchRoot，为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的根。黄芪具有补气固表，托毒排脓，利尿，敛疮生肌的功效；临床常用于气虚乏力、久泻脱肛、自汗、水肿、子官脱垂、慢性肾炎蛋白尿、糖尿病、疮口久不愈合等病症。
近几十年来，人们发现从植物中提取的多糖具有非常重要与特殊的生理活性。这些多糖参与了生命科学中细胞的各种活动，具有多种多样的生物学功能，其中黄芪多糖就是这些多糖中研究得比较深入的一种。
黄芪多糖是中药黄芪的有效成分之一，由中药黄芪分离得到，现代科学研究证实黄芪多糖具有增强免疫功能，保护心血管系统，双向调节血糖和降血压等多种药理作用。进一步的实验数据表明，黄芪多糖可刺激脾细胞增殖，提高LAK细胞和NK细胞活性，纠正环磷酰胺所致的免疫功能低下；另有实验证实它可改善机体物质代谢，纠正垂体后叶引起的大鼠急性心肌缺血，使ST段升高，T波倒置减轻等。提示黄芪多糖极具医药价值，可广泛用于纠正癌症患者化疗免疫力低下，防治糖尿病患者的心血管病变及治疗胃炎等疾病。在我国这类病人数量日趋庞大，但目前有效的防治手段不多，因此，黄芪多糖制备及其产品的开发与应用对临床极为迫切。
虽然涉及黄芪多糖提取分离方法的报道也有，但其得到的黄芪多糖产品较为粗燥，纯度不高，已无法满足目前日益提高的制剂制备要求，鉴于此，创立一种从中药黄芪中分离制备高纯黄芪多糖的方法应是黄芪多糖研究的当务之急。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种从中药黄芪中分离制备高纯黄芪多糖的方法。
本发明的制备高纯黄芪多糖的方法，由下述步骤组成(1)将黄芪粉碎至颗粒直径为200～300μm，与水以质量比计，按1∶6～10的量浸于蒸馏水中，50～75℃进行恒温微波提取，提取条件微波功率250W，时间11～15分钟，重复2～3次；(2)以3000～5000rpm离心(1)所述提取混合液12～16min，取上清液，以活性炭脱色，得黄芪多糖水提物溶液；(3)浓缩黄芪多糖水提物溶液至比重为1.15～1.25；(4)以浓缩后黄芪多糖水提物溶液体积6～8倍的量，向黄芪多糖水提物溶液中加入70％～95％乙醇，搅拌20～36min；
(5)以3000～5000rpm离心(4)所述搅拌混合液12～16min，取沉淀并用蒸馏水溶稀至比重为1.05～1.15的溶液；(6)选取内径和高度比为1∶30～50的层析柱；向柱内加入葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的65％～85％；(7)凝胶过滤层析步骤(5)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0.3～0.6ml/min，以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得黄芪多糖的提取液；(8)常规真空冷冻干燥黄芪多糖的提取液，得高纯黄芪多糖。
上述制备高纯黄芪多糖的方法中，步骤(1)所述温度优选60～65℃。
上述制备高纯黄芪多糖的方法中，步骤(2)或(5)所述离心速度优选4000rpm，离心时间优选15min。
上述制备高纯黄芪多糖的方法中，步骤(6)所述层析柱的内径和高度比优选1∶35～45。
上述制备高纯黄芪多糖的方法中，步骤(6)所述向柱内加入的具有分子筛作用的葡聚糖凝胶量优选为柱体积的70％～80％。
上述制备高纯黄芪多糖的方法中，步骤(6)所述葡聚糖凝胶选用SephadexG-150或SephadexG-200。
其中，步骤(6)所述葡聚糖凝胶最优选Sephadex6-150。
上述制备高纯黄芪多糖的方法中，步骤(7)所述流速优选0.4ml/min。
利用本发明提出的制备高纯黄芪多糖的方法，可以制备出纯度达93％以上的黄芪多糖，根本解决了黄芪多糖分离难，纯度低，质量不稳定的不足，且本发明的方法设备及环境要求低，方法简便，成本低，灵活实用，利于推广、开发和应用。
采用本发明的分离纯化方法制备出的黄芪多糖在临床应用和保健食品开发上将有很广阔的前景。
具体实施例方式
实施例1(1)将黄芪粉碎至颗粒直径为200～300μm，与水以质量比计，按1∶8的量浸于蒸馏水中，65℃进行恒温微波提取，提取条件微波功率250W，时间13分钟，重复3次；(2)以4000rpm离心(1)所述提取混合液15min，取上清液，以活性炭脱色，得黄芪多糖水提物溶液；(3)浓缩黄芪多糖水提物溶液至比重为1.15～1.20；(4)以浓缩后黄芪多糖水提物溶液体积7倍的量，向黄芪多糖水提物溶液中加入85％乙醇，搅拌26min；(5)以4000rpm离心(4)所述搅拌混合液15min，取沉淀并用蒸馏水溶稀至比重为1.05～1.10的溶液；
(6)选取内径和高度比为1∶40的层析柱；向柱内加入SephadexG-150葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的75％；(7)凝胶过滤层析步骤(5)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0.4ml/min，以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得黄芪多糖的提取液；(8)常规真空冷冻干燥黄芪多糖的提取液，得高纯黄芪多糖。
实施例2(1)将黄芪粉碎至颗粒直径为200～300μm，与水以质量比计，按1∶6的量浸于蒸馏水中，75℃进行恒温微波提取，提取条件微波功率250W，时间11分钟，重复2次；(2)以3000rpm离心(1)所述提取混合液16min，取上清液，以活性炭脱色，得黄芪多糖水提物溶液；(3)浓缩黄芪多糖水提物溶液至比重为1.15～1.2；(4)以浓缩后黄芪多糖水提物溶液体积6倍的量，向黄芪多糖水提物溶液中加入70％乙醇，搅拌20min；(5)以3000rpm离心(4)所述搅拌混合液16min，取沉淀并用蒸馏水溶稀至比重为1.05～1.1的溶液；(6)选取内径和高度比为1∶30的层析柱；向柱内加入SephadexG-200葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的65％；(7)凝胶过滤层析步骤(5)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0.6ml/min，以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得黄芪多糖的提取液；(8)常规真空冷冻干燥黄芪多糖的提取液，得高纯黄芪多糖。
实施例3(1)将黄芪粉碎至颗粒直径为200～300μm，与水以质量比计，按1∶10的量浸于蒸馏水中，50℃进行恒温微波提取，提取条件微波功率250W，时间15分钟，重复3次；(2)以5000rpm离心(1)所述提取混合液12min，取上清液，以活性炭脱色，得黄芪多糖水提物溶液；(3)浓缩黄芪多糖水提物溶液至比重为1.2～1.25；(4)以浓缩后黄芪多糖水提物溶液体积6～8倍的量，向黄芪多糖水提物溶液中加入95％乙醇，搅拌36min；(5)以5000rpm离心(4)所述搅拌混合液12min，取沉淀并用蒸馏水溶稀至比重为1.1～1.15的溶液；(6)选取内径和高度比为1∶50的层析柱；向柱内加入SephadexG-150葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的85％；(7)凝胶过滤层析步骤(5)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0.3ml/min，以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得黄芪多糖的提取液；(8)常规真空冷冻干燥黄芪多糖的提取液，得高纯黄芪多糖。
本发明中涉及的微波提取设备为WTS03-1型(南京杰全微波设备有限公司)，或者MAS-I型(常压微波辅助合成/萃取反应仪，上海新仪微波化学科技有限公司)。
本发明中涉及的“SephadexG-150、SephadexG-200”为pharmacia公司产品。我国代理经销pharmacia产品的公司有“北京拜尔迪生物技术公司，北京市海淀区中关村北二街4号水清木华园1号楼910室(100080)；电话(TEL)010-82642396；传真(FAX)010-82642395；或北京邦定泰克生物技术公司，地址北京市海淀区复兴路48号，邮编100039；电话86-010-68287358；传真010-68287361。”
权利要求
1.一种制备高纯黄芪多糖的方法，由下述步骤组成(1)将黄芪粉碎至颗粒直径为200～300μm，与水以质量比计，按1∶6～10的量浸于蒸馏水中，50～75℃进行恒温微波提取，提取条件微波功率250W，时间11～15分钟，重复2～3次；(2)以3000～5000rpm离心(1)所述提取混合液12～16min，取上清液，以活性炭脱色，得黄芪多糖水提物溶液；(3)浓缩黄芪多糖水提物溶液至比重为1.15～1.25；(4)以浓缩后黄芪多糖水提物溶液体积6～8倍的量，向黄芪多糖水提物溶液中加入70％～95％乙醇，搅拌20～36min；(5)以3000～5000rpm离心(4)所述搅拌混合液12～16min，取沉淀并用蒸馏水溶稀至比重为1.05～1.15的溶液；(6)选取内径和高度比为1∶30～50的层析柱；向柱内加入葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的65％～85％；(7)凝胶过滤层析步骤(5)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0.3～0.6ml/min，以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得黄芪多糖的提取液；(8)常规真空冷冻干燥黄芪多糖的提取液，得高纯黄芪多糖。
2.如权利要求1所述制备高纯黄芪多糖的方法，其特征是，步骤(1)所述温度是60～65℃。
3.如权利要求1所述制备高纯黄芪多糖的方法，其特征是，步骤(2)或(5)所述离心速度是4000rpm，离心时间是15min。
4.如权利要求1所述制备高纯黄芪多糖的方法，其特征是，步骤(6)所述层析柱的内径和高度比为1∶35～45。
5.如权利要求1所述制备高纯黄芪多糖的方法，其特征是，步骤(6)所述向柱内加入的具有分子筛作用的葡聚糖凝胶量为柱体积的70％～80％。
6.如权利要求1所述制备高纯黄芪多糖的方法，其特征是，步骤(6)所述葡聚糖凝胶选用SephadexG-150或SephadexG-200。
7.如权利要求6所述制备高纯黄芪多糖的方法，其特征是，步骤(6)所述葡聚糖凝胶选用SephadexG-150。
8.如权利要求1所述制备高纯黄芪多糖的方法，其特征是，步骤(7)所述流速为0.4ml/min。
全文摘要
本发明公开一种制备高纯黄芪多糖的方法，由下述步骤组成将黄芪粉碎浸于蒸馏水中，50～75℃进行恒温微波提取；离心，取上清液，以活性炭脱色，得黄芪多糖水提物溶液，然后浓缩并加入乙醇搅拌；离心，沉淀用蒸馏水溶稀；凝胶过滤层析，以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，真空冷冻干燥，得高纯黄芪多糖。利用本发明制备的黄芪多糖，纯度达90％以上，且本发明的方法设备及环境要求低，方法筛便，成本低，灵活实用，利于推广、开发和应用。
文档编号C08B37/00GK101020721SQ200710013890
公开日2007年8月22日 申请日期2007年3月29日 优先权日2007年3月29日
发明者张尚立, 常宏文, 马剑峰 申请人:山东大学