专利名称：芪白平肺胶囊定性定量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药胶囊的定性定量检测方法，具体是针对中国专利(一种治疗慢阻肺疾病痰瘀阻肺证的中药胶囊及其制备方法，CN102038841B)进行定性定量检测。
背景技术：
芪白平胶囊(一种治疗慢阻肺疾病痰瘀阻肺证的中药胶囊及其制备方法， CN102038841B)，用于治疗慢阻肺疾病痰瘀阻肺证的中药胶囊，该发明专利公开了其中药原料按以下重量配比组成生晒参3、黄芪10、川芎6、薤白6、五味子6、葶苈子6、地龙6。芪白平胶囊的制备方法为①将生晒参打粉，过100目筛，生晒参粗粉、细粉分放。 ②将川芎、薤白、五味子、葶苈子四味中药加水蒸馏，提取挥发油，并用环糊精包合，挥发油提取后的滤液暂放。③将四味中药药渣和生晒参粗粉、黄芪、地龙药材加水煎煮2 3 次，每次2 3小时，合并煎液和挥发油提取后的滤液，醇沉，滤过，回收乙醇，浓缩成浸膏并干燥。④干燥浸膏加入生晒参细粉、药用辅料(淀粉和/或糊精)，喷雾干燥制粒，颗粒与挥发油包合物混合均勻，装入胶囊。为了更好地控制芪白平肺胶囊的质量，本专利对黄芪、生晒参、川芎、五味子、薤白进行了薄层色谱(TLC)定性鉴别方法的研究，同时，采用UPLC对组方中君药黄芪的含量的测定方法进行了研究。黄芪为本处方中的君药，黄芪的化学成分有皂苷类、多糖等，在测定黄芪含量时候，常常以皂苷成分黄芪甲苷作为黄芪的定量指标。测定黄芪甲苷的常用方法有HPLC-UV、 HPLC-ELSD、薄层扫描法、薄层比色法等。HPLC-UV法由于末端吸收溶剂，干扰较大。薄层扫描法及薄层比色法，影响因素较多、重复性差。蒸发光散射检测器能很好地消除溶剂的背景干扰，而且基线较平稳，对于测定紫外末端有吸收的物质尤其适宜。HPLC-ELSD法分离度、重复性、回收率都较理想，但出峰时间较长，一般需20min左右，分析效率低，浪费氮气等。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种定性鉴别专属性好、简单、易于识别的芪白平肺胶囊定性定量检测方法。本发明采用的技术方案如下芪白平肺胶囊定性定量检测方法，其特征在于，包括采用TLC建立黄芪、生晒参、 川芎、五味子、薤白定性鉴别方法，以及采用UPLC建立黄芪甲苷的定量测定方法。生晒参的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，用水湿润后，加水饱和正丁醇10mL，超声处理30min，吸取上清液加3倍量氨试液，摇勻，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解；对照品溶液取人参对照药材lg，按供试品溶液制备方法制成；阴性对照品溶液取除生晒参以外的处方量药材，按制备工艺制成不含生晒参的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水=15 40 22 10并在10°C以下放置的下层溶液为展开剂， 展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加热至斑点清晰，置365nm紫外光灯下检视。黄芪的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加甲醇IOOmL,加热回流提取液接近无色，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和的正丁醇萃取3次，每次 20mL,合并正丁醇液，用氨水调pH至8 9的水提取2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液浓缩至干，加甲醇ImL使溶解；对照品溶液取黄芪对照药材2g，按供试品溶液制备方法制成；阴性对照品溶液取除黄芪以外的处方量药材，按制备工艺制成不含黄芪的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇水=13 6 2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加热至斑点清晰，置365nm紫外光灯下检视。川芎的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加水20mL，使溶解，加1 % 的Na2CO3溶液50mL，超声处理30min，用稀盐酸调节pH至2_3，用乙醚萃取3次，每次20mL， 合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯ImL使溶解；对照品溶液取阿魏酸对照品，加乙酸乙酯制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；阴性对照品溶液取除川芎以外的处方量药材，按制备工艺制成不含川芎的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯=3 1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。五味子的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加三氯甲烷IOOmL,加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷ImL使溶解；对照品溶液取五味子对照药材lg，加80%的乙醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加80 %的乙醇ImL使溶解；阴性对照品溶液取除五味子以外的处方量药材，按制备工艺制成不含五味子的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各15 μ L、对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 7 1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。薤白的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉10g，加正己烷20mL，超声处理 20min,滤过，滤液挥干，残渣加正己烷ImL使溶解；
对照品溶液取薤白对照药材4g，按供试品溶液制备方法制成；阴性对照品溶液取除薤白以外的处方量药材，按制备工艺制成不含薤白的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯=10 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加热至斑点清晰，在365nm紫外灯下检视。黄芪甲苷的定量测定方法为①、色谱条件色谱柱WatersAcquity UPLC BEH C18 色谱柱(2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m)；检测器AcquityELSD ；流动相乙睛水=；35 65 ；流速0. 3mL/min ；柱温30°C；漂流管温度60°C;②、对照品溶液精密称量黄芪甲苷对照品，加入甲醇溶解制成0. 53mg/mL对照品溶液；③、供试品溶液精密称定芪白平肺胶囊内容物1. 92g，加甲醇SOmL超声处理30min，滤液蒸干，残渣用水转入分液漏斗中，乙醚脱脂后正丁醇萃取4次，分别使用40mL、30mL、30mL、20mL正丁醇，萃取液分别用20mL氨试液洗涤2次，正丁醇液蒸干，用甲醇溶解，并转移至5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻；④、线性范围考察分别精密吸取对照品溶液lmL、anL、;3mL、％iL、5mL、7mL、9mL至IOmL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成 0. 053mg/mL、0. 106mg/mL、0. 159mg/mL、0. 212mg/mL、0. 265mg/mL, 0. 371mg/mL、0. 477mg/mL 的对照品溶液；精密吸取各溶液2mL，分别注入超高效液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积， 以峰面积值的自然对数值为纵坐标(Y)，以进样量的自然对数值为横坐标(X)，绘制标准曲线并计算回归方程，线性范围考察；⑤、精密度试验精密吸取②对照品溶液2 μ L注入超高液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积， 重复6次；⑥、稳定性试验精密吸取③供试品溶液2 μ L分别于0h，2h，4h，8h，12h进样，按照①色谱条件测定峰面积，计算峰面积的RSD值；⑦、重现性试验精密称取供试品6份，按照③方法制得供试品溶液，按照①色谱条件测定峰面积， 计算黄芪甲苷含量；⑧、加样回收率试验精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的对照品，再按照③方法制得6份待测液，精密吸取6份待测液，注入超高效液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积；⑨、三批样品含量测定精密称取三批样品，按③方法处理制得待测液，按①色谱条件测定，计算黄芪甲苷平均含量。本发明芪白平肺胶囊定性定量检测方法，采用UPLC-ELSD法对黄芪甲苷的含量进行测定，以达到控制本品质量的目的，经过方法学验证，方法稳定、可行。同时出峰时间在 3min左右，节省时间，分析效率高，而且灵敏度高，进样量少，减少溶剂损耗及废液处置费用。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明作进一步的说明。一、仪器与试药A、仪器ACQUITY UPLC(美国Waters公司，包括四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、ELSD检测器、Empower2色谱工作站)；BP211D电子天平(德国Sartorius公司)；Kudos超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；薄层硅胶G板(青岛海洋化工有限公司制造)。B、试药黄芪甲苷(批号:110781-200613)、黄芪对照药材(批号120974-200407 )、生晒参对照药材(批号120917-200613)、川芎对照药材(批号120918-200406)、薤白对照药材(批号121130-200402)，均由中国药品生物制品检定所提供；芪白平肺胶囊由安徽中医学院第一附属医院制剂中心提供，批号20111002、 20111005,20111008 ；乙腈(批号AS1122_011，美国Fisher)，甲醇为色谱纯，水为屈臣氏蒸馏水、其余试剂为分析纯。二、黄芪、生晒参、川芎、五味子、薤白TLC定性鉴别方法①、生晒参的定性鉴别方法供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，用水湿润后，加水饱和正丁醇10mL，超声处理30min，吸取上清液加3倍量氨试液，摇勻，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解；对照品溶液取人参对照药材lg，按供试品溶液制备方法制成；阴性对照品溶液取除生晒参以外的处方量(背景技术中已表述，下同)药材，按制备工艺(背景技术中已表述，下同)制成不含生晒参的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法按照2010年版《中国药典》薄层色谱法(附录VIB)试验(下同)， 吸取三种溶液各5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水 =15 40 22 10并在10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 的硫酸乙醇溶液，在105°C下加热至斑点清晰，置365nm紫外光灯下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。②、黄芪的定性鉴别方法供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加甲醇IOOmL,加热回流提取液接近无色，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和的正丁醇萃取3次，每次 20mL,合并正丁醇液，用氨水调pH至8 9的水提取2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液浓缩至干，加甲醇ImL使溶解；对照品溶液取黄芪对照药材2g，按供试品溶液制备方法制成；阴性对照品溶液取除黄芪以外的处方量药材，按制备工艺制成不含黄芪的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇水=13 6 2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加热至斑点清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，分别显相同颜色荧光斑点，且阴性无干扰。③、川芎的定性鉴别方法供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加水20mL，使溶解，加1 % 的Na2CO3溶液50mL，超声处理30min，用稀盐酸调节pH至2_3，用乙醚萃取3次，每次20mL， 合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯ImL使溶解；对照品溶液取阿魏酸对照品，加乙酸乙酯制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；阴性对照品溶液取除川芎以外的处方量药材，按制备工艺制成不含川芎的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯=3 1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。④、五味子的定性鉴别方法供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加三氯甲烷IOOmL,加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷ImL使溶解；对照品溶液取五味子对照药材lg，加80%的乙醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加80 %的乙醇ImL使溶解；阴性对照品溶液取除五味子以外的处方量药材，按制备工艺制成不含五味子的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各15 μ L、对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 7 1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。
⑤、薤白的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉10g，加正己烷20mL，超声处理 20min,滤过，滤液挥干，残渣加正己烷ImL使溶解；对照品溶液取薤白对照药材4g，按供试品溶液制备方法制成；阴性对照品溶液取除薤白以外的处方量药材，按制备工艺制成不含薤白的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯=10 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加热至斑点清晰，在365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。三、黄芪甲苷的定量测定方法①、色谱条件色谱柱WatersAcquity UPLC BEH C18 色谱柱(2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m)；检测器AcquityELSD ；流动相乙睛水=35 65 ；、流速0. 3mL/min ；柱温30°C；漂流管温度60°C ；②、对照品溶液精密称量黄芪甲苷对照品，加入甲醇溶解制成0. 53mg/mL对照品溶液；③、供试品溶液精密称定芪白平肺胶囊(批号20111002)内容物1. 92g(相当于原生药材IOg)，加甲醇SOmL超声处理O50W、50kHZ)30min，滤液蒸干，残渣用水转入分液漏斗中，乙醚脱脂后正丁醇萃取4次，分别使用40mL、30mL、30mL、20mL正丁醇，萃取液分别用20mL氨试液洗涤 2次，正丁醇液蒸干，用甲醇溶解，并转移至5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻；④、线性范围考察分别精密吸取对照品溶液lmL、2mL、3mL、4mL、5mL、7mL、9mL至IOmL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成 0. 053mg/mL、0. 106mg/mL、0. 159mg/mL、0. 212mg/mL、0. 265mg/mL, 0. 371mg/mL、0. 477mg/mL 的对照品溶液；精密吸取各溶液2mL，分别注入超高效液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积， 以峰面积值的自然对数值为纵坐标(Y)，以进样量的自然对数值为横坐标(X)，绘制标准曲线并计算回归方程，线性范围考察。数据表明回归方程Y= 1. 7728X+15. 797, r = 0. 9995，黄芪甲苷在0. 106 μ g 0. 954 μ g范围内有良好的线性关系。⑤、精密度试验精密吸取②对照品溶液2 μ L注入超高液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积，
重复6次。计算得平均峰面积1533018，RSD = 1.2% (n = 6)，表明仪器精密度良好。
⑥、稳定性试验精密吸取③供试品溶液2 μ L分别于0h，2h，4h，8h，12h进样，按照①色谱条件测定峰面积，计算峰面积的RSD值。结果为RSD = 1. 1%，结果表明供试品溶液在12h内稳定性良好。⑦、重现性试验精密称取供试品(批号20111002)6份，按照③方法制得供试品溶液，按照①色谱条件测定峰面积，计算黄芪甲苷含量。结果表明，黄芪甲苷含量的RSD值为1.4%，说明方法的重现性良好。⑧、加样回收率试验精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的对照品，再按照③方法制得6份待测液，精密吸取6份待测液，注入超高效液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积，结构见表1。表1黄芪甲苷回收率试验结果
序号取样量 /g样品中含量/mg对照品加入量/mg实测量 /mg回收率 /%平均回收率 /%RSD11. 99580. 42710. 340. 755198.4321.98790.42540. 330. 748597. 7931. 93240.41350. 420. 825399. 020. 80%41. 98610. 42500.410. 832998. 5798. 0751. 95430. 41820. 510. 906297. 6361. 99870. 42770. 490. 909396. 97⑨、三批样品含量测定精密称取三批样品(批号20111002、20111005、20111008)，按③方法处理制得待
测液，按①色谱条件测定，计算黄芪甲苷平均含量，测定结果见表2。表2样品含量测定结果
权利要求
1.芪白平肺胶囊定性定量检测方法，其特征在于，包括采用TLC建立黄芪、生晒参、川芎、五味子、薤白定性鉴别方法，以及采用UPLC建立黄芪甲苷的定量测定方法。
2.根据权利要求1所述的芪白平肺胶囊定性定量检测方法，其特征在于，生晒参的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，用水湿润后，加水饱和正丁醇 IOmL,超声处理30min，吸取上清液加3倍量氨试液，摇勻，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解；对照品溶液取人参对照药材lg，按供试品溶液制备方法制成； 阴性对照品溶液取除生晒参以外的处方量药材，按制备工艺制成不含生晒参的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水=15 40 22 10并在10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加热至斑点清晰，置365nm紫外光灯下检视。
3.根据权利要求1所述的芪白平肺胶囊定性定量检测方法，其特征在于，黄芪的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加甲醇lOOmL，加热回流提取液接近无色，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和的正丁醇萃取3次，每次20mL， 合并正丁醇液，用氨水调pH至8 9的水提取2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液浓缩至干，加甲醇ImL使溶解；对照品溶液取黄芪对照药材2g，按供试品溶液制备方法制成； 阴性对照品溶液取除黄芪以外的处方量药材，按制备工艺制成不含黄芪的阴性样品， 再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷甲醇水=13 6 2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在 105°C下加热至斑点清晰，置365nm紫外光灯下检视。
4.根据权利要求1所述的芪白平肺胶囊定性定量检测方法，其特征在于，川芎的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加水20mL，使溶解，加1 %的 Na2CO3溶液50mL，超声处理30min，用稀盐酸调节pH至2_3，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯ImL使溶解；对照品溶液取阿魏酸对照品，加乙酸乙酯制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；阴性对照品溶液取除川芎以外的处方量药材，按制备工艺制成不含川芎的阴性样品， 再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯=3 1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。
5.根据权利要求1所述的芪白平肺胶囊定性定量检测方法，其特征在于，五味子的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉5g，加三氯甲烷IOOmL,加热回流 30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷ImL使溶解；对照品溶液取五味子对照药材lg，加80 %的乙醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加80%的乙醇ImL使溶解；阴性对照品溶液取除五味子以外的处方量药材，按制备工艺制成不含五味子的阴性样品，再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各15 μ L、对照品溶液2 μ L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 \7 1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。
6.根据权利要求1所述的芪白平肺胶囊定性定量检测方法，其特征在于，薤白的定性鉴别方法为供试品溶液取芪白平肺胶囊，倒出内容物，取细粉10g，加正己烷20mL，超声处理 20min,滤过，滤液挥干，残渣加正己烷ImL使溶解；对照品溶液取薤白对照药材4g，按供试品溶液制备方法制成； 阴性对照品溶液取除薤白以外的处方量药材，按制备工艺制成不含薤白的阴性样品， 再按照供试品溶液制备方法制成；定性鉴别方法吸取三种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯=10 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加热至斑点清晰，在365nm紫外灯下检视。
7.根据权利要求1所述的芪白平肺胶囊定性定量检测方法，其特征在于，黄芪甲苷的定量测定方法为①、色谱条件色谱柱Waters Acquity UPLC BEH C18 色谱柱(2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m)；检测器Acquity_ELSD ；流动相乙睛水=35 65 ；流速:0. 3mL/min ；柱温:30°C ；漂流管温度60°C ；②、对照品溶液精密称量黄芪甲苷对照品，加入甲醇溶解制成0. 53mg/mL对照品溶液；③、供试品溶液精密称定芪白平肺胶囊内容物1.92g，加甲醇SOmL超声处理30min，滤液蒸干，残渣用水转入分液漏斗中，乙醚脱脂后正丁醇萃取4次，分别使用40mL、30mL、30mL、20mL正丁醇， 萃取液分别用20mL氨试液洗涤2次，正丁醇液蒸干，用甲醇溶解，并转移至5mL容量瓶中， 加甲醇稀释至刻度，摇勻；④、线性范围考察分别精密吸取对照品溶液lmL、2mL、3mL、4mL、5mL、7mL、9mL至IOmL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成 0. 053mg/mL、0. 106mg/mL、0. 159mg/mL、0. 212mg/mL、0. 265mg/mL、0. 371mg/ mL、0. 477mg/mL的对照品溶液；精密吸取各溶液2mL，分别注入超高效液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积，以峰面积值的自然对数值为纵坐标，以进样量的自然对数值为横坐标，绘制标准曲线并计算回归方程，线性范围考察；⑤、精密度试验精密吸取②对照品溶液2 μ L注入超高液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积，重复 6次；⑥、稳定性试验精密吸取③供试品溶液2 μ L分别于0h，2h, 4h，8h，12h进样，按照①色谱条件测定峰面积，计算峰面积的RSD值；⑦、重现性试验精密称取供试品6份，按照③方法制得供试品溶液，按照①色谱条件测定峰面积，计算黄芪甲苷含量；⑧、加样回收率试验精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的对照品，再按照③方法制得6份待测液，精密吸取6份待测液，注入超高效液相色谱仪，按照①色谱条件测定峰面积；⑨、三批样品含量测定精密称取三批样品，按③方法处理制得待测液，按①色谱条件测定，计算黄芪甲苷平均含量。
全文摘要
本发明涉及一种中药胶囊的定性定量检测方法。包括采用TLC建立黄芪、生晒参、川芎、五味子、薤白定性鉴别方法，以及采用UPLC建立黄芪甲苷的定量测定方法。本发明芪白平肺胶囊定性定量检测方法，采用UPLC-ELSD法对黄芪甲苷的含量进行测定，以达到控制本品质量的目的，经过方法学验证，方法稳定、可行。同时出峰时间在3min左右，节省时间，分析效率高，而且灵敏度高，进样量少，减少溶剂损耗及废液处置费用。
文档编号G01N30/02GK102539615SQ201210084688
公开日2012年7月4日 申请日期2012年3月20日 优先权日2012年3月20日
发明者孟楣, 张念志, 彭波, 李泽庚, 杨程, 王传博, 童佳兵, 肖伟, 高家荣 申请人:安徽中医学院第一附属医院