由人多能干细胞特化功能性颅基板衍生物的制作方法与工艺

文档序号:13108223阅读:来源:国知局
技术特征:
1.一种培养细胞的方法,其包括:a)在细胞培养基中提供表达可检测水平的SIX1和PAX6的多种细胞;b)使所述多种细胞与用量为能有效地在所述多种细胞中诱导可检测水平的SIX1和PAX3表达的包括脑源性神经营养因子的组合物接触。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述方法还包括在足以诱导细胞分化成三叉神经神经元的条件下培养表达SIX1和PAX3的细胞。3.根据权利要求1所述的方法,其中表达SIX1和PAX6的细胞还表达可检测水平的TFAP2A。4.根据权利要求1所述的方法,其中表达SIX1和PAX3的细胞是三叉神经基板细胞。5.一种培养细胞的方法,其包括:a)在细胞培养基中提供表达可检测水平的SIX1和PAX6的多种细胞;和b)使所述多种细胞与用量为能有效地在所述多种细胞中诱导可检测水平的SIX1和PITX1表达的包括音猬因子、purmorphamine和γ-分泌酶抑制剂的组合物接触。6.根据权利要求5所述的方法,其中所述方法还包括在足以诱导细胞分化成选自促性腺激素细胞、促肾上腺皮质激素细胞和促生长激素细胞的垂体细胞的条件下孵育表达SIX1和PITX1的细胞。7.根据权利要求5所述的方法,其中表达SIX1和PAX6的细胞还表达可检测水平的TFAP2A。8.根据权利要求5所述的方法,其中表达SIX1和PITX1的细胞是垂体基板细胞。9.一种培养细胞的方法,其包括:a)在细胞培养基中提供表达可检测水平的SIX1和PAX6的多种细胞;b)使所述多种细胞与用量为能有效地在所述多种细胞中诱导可检测水平的SIX1和PITX3表达的包括音猬因子、purmorphamine、γ-分泌酶抑制剂和FGF-抑制剂的组合物接触。10.根据权利要求9所述的方法,其中所述方法还包括在足以诱导细胞分化成晶状体纤维的条件下培养表达SIX1和PAX3的细胞。11.根据权利要求9所述的方法,其中表达SIX1和PAX6的细胞还表达可检测水平的TFAP2A。12.根据权利要求5所述的方法,其中表达SIX1和PITX3的细胞是晶状体基板细胞。13.一种治疗对其有需求的受试者的方法,其包括将表达可检测水平的SIX1和PAX3的细胞移植到表现疼痛综合征的至少一种症状的受试者中,其中移植细胞使疼痛综合征的至少一种症状减轻。14.根据权利要求13所述的方法,其中疼痛综合征选自三叉神经麻痹、三叉神经痛和偏头痛。15.根据权利要求13所述的方法,其中将细胞移植到受试者的脑桥组织中。16.根据权利要求13所述的方法,其中细胞迁移至三叉神经核。17.一种治疗对其有需求的受试者的方法,其包括将表达可检测水平的SIX1和PITX1的细胞移植到表现神经内分泌紊乱的至少一种症状的受试者中,其中移植细胞使神经内分泌紊乱的至少一种症状减轻。18.根据权利要求17所述的方法,其中细胞表达生长激素。19.根据权利要求17所述的方法,其中细胞表达促肾上腺皮质激素。20.根据权利要求17所述的方法,其中将细胞移植至受试者的腿部肌肉。21.根据权利要求17所述的方法,其中将细胞移植至受试者的下丘脑-垂体轴的组织。22.根据权利要求17所述的方法,其中将细胞移植至受试者的下丘脑。23.根据权利要求17所述的方法,其中将细胞移植至受试者的蝶鞍。24.根据权利要求17所述的方法,其中神经内分泌紊乱选自糖尿病、垂体机能减退症、垂体瘤和放射疗法副作用。25.一种治疗对其有需求的受试者的方法,其包括将表达可检测水平的SIX1和PITX3的细胞移植到表现眼睛疾病的至少一种症状的受试者中,其中移植细胞使眼睛疾病的至少一种症状减轻。26.根据权利要求25所述的方法,其中眼睛疾病的至少一种症状选自失明、黄斑变性、白内障、散光、近视和远视。27.根据权利要求25所述的方法,其中细胞表达多种晶状体纤维蛋白质。28.根据权利要求27所述的方法,其中多种晶状体纤维蛋白质包括αβ-晶体晶状体纤维蛋白质。29.根据权利要求27所述的方法,其中多种晶状体纤维蛋白质是分层的。30.一种细胞,其根据权利要求1-12中任一项所述的方法制备。31.一种诱导细胞分化的方法,其包括:a)提供多种细胞;b)使所述多种细胞与SMAD(SmallMothersAgainstDecapentaplegic)蛋白质信号传导的抑制剂接触;和c)使所述多种细胞与骨形成蛋白(BMP)活性剂接触;其中使所述多种细胞与用量为能有效地在所述多种细胞中诱导可检测的SIX1和PAX6表达的SMAD抑制剂和BMP活性剂接触。32.一种表达可检测水平的SIX1和PAX6的细胞,其根据权利要求31所述的方法制备。33.一种表达可检测水平的SIX1和PAX6的细胞,其通过包括以下的方法制备:a)提供多种细胞;b)使所述多种细胞与SMAD(SmallMothersAgainstDecapentaplegic)蛋白质信号传导的抑制剂接触;和c)使所述多种细胞与第二SMAD抑制剂接触;其中使所述多种细胞与用量为能有效地在所述多种细胞中诱导可检测的SIX1和PAX6表达的第一SMAD抑制剂和第二SMAD抑制剂接触。34.一种表达可检测水平的SIX1和PAX3的细胞,其用途在于治疗对其有需求的受试者。35.根据权利要求34所述的用途的表达可检测水平的SIX1和PAX3的细胞,其中受试者表现疼痛综合征的至少一种症状。36.一种表达可检测水平的SIX1和PITX1的细胞,其用途在于治疗对其有需求的受试者。37.根据权利要求36所述的用途的表达可检测水平的SIX1和PITX1的细胞,其中受试者表现神经内分泌紊乱的至少一种症状。38.一种表达可检测水平的SIX1和PITX3的细胞,其用途在于治疗对其有需求的受试者。39.根据权利要求38所述的用途的表达可检测水平的SIX1和PITX3的细胞,其中受试者表现眼睛疾病的至少一种症状。40.一种试剂盒,其包括权利要求30和32-39中任一项所述的细胞。41.一种试剂盒,其用于实施权利要求1-29和31中任一项所述的方法。
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