一种提高人参抗病性的基因g38及其编码蛋白的制作方法

本发明属于生物技术和药用植物基因工程领域，主要涉及利用生物信息学和分子生物学手段，分析人参转录组数据，克隆在林下参中高表达的抗病基因及其编码产物与应用。
背景技术：
：本发明的目的是提供一个与人参抗病相关的蛋白G38及其基因g38，以用于提高植物的病性能。人参(PanaxginsengC.A.Meyer)是五加科(Araliaceae)人参属的一个种，是名贵的中药材，被誉为“百草之王”，其应用历史悠久。研究表明,人参皂苷在调节免疫力、抗压、抗疲劳、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血糖、保肝护肝、增强记忆力等方面有着很好的功效,因此具有广阔的应用前景和可观的经济价值。但人参的生长缓慢，随着人们对野生资源的开发，野生人参日益稀少。按人参栽培方式不同可以分为林下参和园参，林下参是人工将人参种子播种在适合人参生长的森林中，其生长、发育完全在自然条件下完成；园参是在完全在人工条件下完成播种、生长、发育。园参在人工栽培条件下，肥水充足，生长快，一般5年即可长至15-20cm，重100-200g；而林下参生长5年，主根长只有3-4cm，重约5-15g。虽然园参生长速度快，但是它的药效成分比林下参少，因此价值也低。由于园参种植密度大，病虫害多，一般5年时必须采收，否则病害的积累会导致植株死亡，给参农带来毁灭性的损失。而林下参抗病性强，可以生长数十年，且随着生长年限的增长，营养成分的含量和经济价值增加。随着后基因组时代的到来,转录组学、蛋白质组学、代谢组学等各种组学技术相继出现,其中转录组学是率先发展起来以及应用最广泛的技术。遗传学中心法则表明,遗传信息在精密的调控下通过信使RNA(mRNA)从DNA传递到蛋白质。因此,mRNA被认为是DNA与蛋白质之间生物信息传递的一个“桥梁”,而所有表达基因的身份以及其转录水平,综合起来被称作转录组(Transcriptome)[2]。转录组是特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的总和,主要包括mRNA和非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA)。转录组研究是基因功能及结构研究的基础和出发点,了解转录组是解读基因组功能元件和揭示细胞及组织中分子组成所必需的,并且对理解机体发育和疾病具有重要作用。随着新一代测序(Next-generationsequencing,NGS)平台的市场化,RNA-Seq(RNAsequencing)技术的应用已经彻底改变了转录组学的思维方式。RNA-Seq,即RNA测序又称转录组测序,是最近发 展起来的利用深度测序技术进行转录组分析的技术,该技术能够在单核苷酸水平对任意物种的整体转录活动进行检测,在分析转录本的结构和表达水平的同时,还能发现未知转录本和稀有转录本。本发明通过对5个产地6份样品的转录组分析，发现在林下参中高表达的抗病相关基因。技术实现要素：本发明的目的是提供一个与病性相关的蛋白G38及其基因g38，以用于提高植物的抗病性能。本发明通过比较具有抗病性的野生型长白林下参(CBA)和抗病性较差的栽培品种长白栽培参(CBB)、集安栽培参(JAB)、抚松栽培参(FSB)中基因转录本的差异，分离获得一个在野生型的长白林下参中高表达、与抗病相关的蛋白G38及其基因高g38，该基因可用于提高植物的抗病性能。发明所提供的与抗病性相关的g38基因，来源于五加科人参属中国人参(PanaxginsengC.A.Mey)，编码具有下述氨基酸序列的蛋白质：序列表中的SEQIDNO：1由243个氨基酸残基组成，为蛋白G38。本发明中人参与抗病性相关的G38的编码基因既可为所述基因的cDNA序列，也可为所述基因的基因组DNA序列，或者是与所述基因具有90％以上同源性且编码相同功能蛋白的DNA序列。具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的编码基因可以具有序列表中SEQIDNO：2的核苷酸序列。含有本发明基因的表达载体、转基因细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。扩增g38任一片段的引物对也在本发明的保护范围之内。本发明提供了一个与抗病性相关的基因g38。其氨基酸序列与植物抗病基因数据库PRGDB00155469基因的氨基酸序列同源性达73.03％，Evalue为2e-24。本发明的另一个目的是提供一种提高植物抗病性的方法。本发明所提供的提高植物抗病性的方法，是将编码本发明与抗病性相关的基因导入植物组织、细胞或器官，植物抗病性获得提高。在上述提高植物抗病性的方法中，本发明中烟草与抗病性相关的g38基因既可为所述基因的cDNA序列，也可为所述基因的基因组基因序列；与所述基因具有90％以上同源性且编码相同功能蛋白的DNA序列，是将所述基因的cDNA或基因组基因序列用已知的方法进行分离和/或修饰和/或设计得到的。本领域的技术人员应该理解的是，特定基因序列中核苷酸同 一性的微小改变可能会导致该基因效能的降低或者加强，而且在一些应用(例如，反义或共抑制技术)中，部分序列经常会和全长序列同样有效地发挥作用。基因序列变化或缩短的方法，以及测试这些发生变化的基因的有效性的方法均是本领域技术人员熟知的。本发明中人参与抗病性相关g38基因或其同源序列可通过植物表达载体导入植物组织、细胞或器官；用于构建所述植物表达载体的出发载体可为任意一种可用于根瘤农杆菌或发根农杆菌转化植物的双元载体或可用于植物微弹轰击的载体等，如pBin系列载体(如pBin19等)、pBI系列载体(如pBI101等)、GatewayTW系列载体(如pH2GW7等)、pCAMBIA系列载体(如pCAMBIA3301等)、per8、pX6或其它衍生植物表达载体，所述出发载体还可为可在原核生物中复制的载体，如pENTER-TOPO、pUC系列载体或pBluescript系列载体等。使用本发明中人参与抗病性相关的g38基因或其同源序列构建植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型(ABA、干旱、盐碱或化学诱导等)启动子。所述组成性表达启动子可为花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子，玉米Ubiquitin启动子或水稻actin1启动子等；所述组织特异性表达启动子可为根特异性表达启动子、叶片特异性表达启动子、维管特异性表达启动子、种子特异性表达启动子、花特异性表达启动子或花粉特异性表达启动子，如2S1启动子(GenBank号：NM_118848.2，GI:30687489)和NapinA(GenBank号：M64633.1，GI:349405)启动子等；所述诱导型启动子可为受低温、干旱、ABA、乙烯、盐碱或化学等诱导的启动子。上述启动子可单独使用或与其它的植物启动子结合使用。此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子和/或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、GFP基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(新霉素磷酸转移酶(NPTII)基因、潮霉素磷酸转移酶(Hygromycinphosphotransferase)基因、庆大霉素标记物或卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。所述含新霉素磷酸转移酶(NPTII)基因的宿主植物细胞、组织或器官可由卡那霉素或其替代衍生物如G418等进行筛选，含潮霉素磷酸转移酶(Hygromycinphosphotransferase)基因的宿主植物细胞、组织或器官可由潮 霉素进行筛选。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。经上述方法进行筛选后还可采用Southern、PCR或点杂交等分子检测手段对转基因植株进行检测，以确定其是否转化有目的基因。其中，本发明以pCAMBIA1300为出发载体，构建的含有本发明人参与耐逆性相关的g38基因的植物表达载体命名为pCactF-g38。携带有本发明人参与耐逆性相关的g38基因或其同源序列的植物表达载体可通过使用原生质体-化学介导法(Ca2+、PEG)、Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、花粉管导入、微注射、电激、基因枪、农杆菌介导等常规生物学方法中的任何一种或几种方法的组合转化植物细胞、组织或器官，并将转化的植物细胞、组织或器官培育成植株；所述组织和器官可包括宿主植物的果荚、愈伤组织、茎尖、叶片和种子等。此外，通过将转化有本发明人参与耐逆性相关的g38基因或其同源序列的转基因植株进行继代培养后，可从中进一步筛选出基因纯合的转基因植株。此外，还可对该转基因植株进行扩繁，可使转基因植物的抗病性进一步改善和提高。所述转基因植物的扩繁包括无性繁殖和/或种子繁殖。本发明的方法对双子叶植物和单子叶植物均适用，因此，所述被转化的植物细胞、组织或器官既可来源于烟草、油菜、棉花、大豆、杨树、松树、桉树、马铃薯或牧草等双子叶植物，也可来源于水稻、玉米、小麦、大麦、高梁、谷子或草坪草等单子叶植物。本发明提供了一个与抗病性相关的基因g38。实验证明，将本发明的基因转化烟草可提高烟草抗真菌病害能力，且对烟草的正常生长和经济性状没有明显的影响。本发明的蛋白及其编码基因对于植物抗病性机制的研究，以及提高植物的抗病性及相关性状的改良具有重要的理论及实际意义，将在植物的抗病基因工程改良中发挥重要作用，应用前景广阔。下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。附图说明图1是人参样品总RNA电泳图，其中1为长白林下参，2为长白栽培参，3为集安栽培参，4为抚松栽培参，5为逊克栽培参，6为宽甸石柱参。图2是realtimePCR验证基因g38在各材料中的相对表达量；RQ为基因表达相对值，CBA为长白林下参，CBB为长白栽培参、JAB为集安栽培参、FSB为抚松栽培参、XKB为逊克栽培参、KDC为宽甸石柱参。图3是ORF预测。图4功能域预测分析。图5表达载体pCactF的T-DNA区图谱。LB和RB分别为T-DNA的左边界和右边界；hyg表示潮霉素抗性；p35S表示35S基因的启动子；T35S表示35S基因的终止子；pAct表示Actin基因的启动子；3flag表示3倍的flag标签序列；OCS表示ocs基因的终止子；HindIII、KpnI、SpeI、XbaI、SalI和PstI分别表示限制性内切酶的酶切位点。具体实施方式下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所用引物和测序均由上海英骏生物技术公司合成，PCR试剂盒购自东洋纺(上海)生物科技有限公司(TOYOBO)、载体构建过程中的核酸内切酶和T4DNA连接酶购自纽英伦生物技术有限公司(NEB)，pEASY-T1连接试剂盒购自北京全式金生物技术公司，方法均参照试剂盒提供的方法进行。实验中所用的载体pHPG由本实验改造所得，基本骨架来自于CAMBIA公司的pCAMBIA1303。实施例1.样品采集2012年9月，采集5年生的林下参和栽培参，林下参的产地为长白，栽培参的产地为长白，集安，抚松，逊克。采集人参根，清洗干净后液氮速冻低温保存。其中CBA为长白林下参，CBB、JAB、FSB、XKB、KDC分别为长白、集安、抚松、逊克、宽甸栽培参。实施例2.RNA提取首先对-80℃保存的样本于液氮中充分研磨，然后用Qiagen’sRNeasyplantminikit提取总RNA，应用DNaseI(NEB)去除残留DNA完成RNA的纯化，最后用1％琼脂糖电泳检测RNA的完整性(图1)，用Nanodrop2000核酸定量仪测定A260、A280比值和浓度。实施例3.RNA-Seq和denovo拼接利用oligo(dT)的磁珠从总RNA中富集mRNA，接着将mRNA打断成短片段，以mRNA为模板，用六碱基随机引物(randomhexamers)合成第一条cDNA链，然后构建测序文库，利用第二代SolexaHiSeq2000进行RNA测序。通过去掉接头和低质量的序列后，共获得1.364×108个高质量的reads,共计2.08×107basepairs。运用Trinity软件对测序结果进行Denovo拼接，共获得82,448个基因。实施例4.基因注释和基因差异表达将获得的转录组与NCBInon-redundantproteindatabase(NR)、swissprot和TAIR10数据库比对，共有102395个转录子(约60.7％)有功能注释。依照文献(TrapnellCetal.，DifferentialgeneandtranscriptexpressionanalysisofRNA-seqexperimentswithTopHatandCufflinks.Natureprotocols2012,7(3):562-578；AndersSetal.，HTSeq-Apythonframeworktoworkwithhigh-throughputsequencingdata.bioRxivpreprint2014,doi:10.1101/002824；AndersSetal.，Differentialexpressionanalysisforsequencecountdata.Genomebiology2010,11(10):R106)中的方法，依次运用程序Tophat-HTSeq-DESeq进行基因表达分析，有822个转录子具有显著性差异表达(具有显著差异的标准：经均一化后每个转录本上覆盖的reads大于10，两个转录本的log2(Fold_change)大于2或者小于-2，P值小于0.05)。用BlastX比对植物抗病基因数据库PRGDB(http://prgdb.org)，共有5482个转录子获得抗病基因注释，其中基因g38在长白林下参(CBA)中表达显著高于其它材料，即林下参高于各地的栽培参材料，具体结果详见表1。经计算，基因g38在CBA中分别与KDC、CBB、FSB、JAB、XKB的表达值的log2(Fold_change)依次为3.0573，3.2713，2.7503，2.4000，2.8788，大于2，说明基因g38在CBA中的表达显著高于其它材料。表1各材料中g38的相对表达值品种名称CBAKDCCBBFSBJABXKBG38的相对表达值45.50775.46684.713376.763258.621946.18698实施例5.抗病基因表达验证根据生物信息分析数据，以拼接的g38转录本(其序列位于序列表中SEQIDNO：3)为模板，设计realtimePCR引物(realtimePCR引物(38realF5-TGAAATCAAAGAGGGTAAACAA，SEQIDNO:4；38realR5-TGGTCAAGTATGTGAAGGT-3，SEQIDNO:5)。以稀释10倍的cDNA为模板，用7500FastReal-TimePCRSystem(AppliedBiosystems)定量分析，反应体系为：以GAPDH为内参(F5-CTGTGGATGTCTCTGTGGTA-3，SEQIDNO:6；R5-CTCCGACTCCTCCTTGATAG-3，SEQIDNO:7)，用相对定量2-ΔΔCtmethod方法统计基因表达量。从实验结果可以看出，基因g38在CBA中表达量高于其它材料，与生物信息学分析结果一致。图2为基因g38在各材料中的相对表达量，纵坐标为基因表达相对值，CBA为林下参，具有抗病性强的特点，将其g38基因为1，其它材料的数值是与CBA相除的相对值，横坐标表示各实验材料。实施例6.功能预测应用blastx，将基因g38的拼接转录本序列与植物抗病基因数据库PRGDB(http://prgdb.org)比对，结果列于表3。基因从154-810bp与推测的抗病基因PRGDB00155469的1519-1607bp具有同源性，value为2.00E-24，说明二者具有较高的的相似度。根据转录本序列，推测有6种开放阅读框。(图3)根据同源比对的结果，以324-590bp为阅读框，向5`端找ATG，因此推测该基因具有抗病功能的开放阅读框为序列3的69-797bp。表3基因在抗病数据库blastx结果实施例7.基因克隆根据预测的ORF序列，即序列SEQIDNO:3的69-797bp。，从基因的编码起始位点ATG开始设计5’端引物，于终止密码处设计3’端引物：引物38F：5'-ATGTCAGCTGCAGTAGCCG-3'，SEQIDNO:8引物38R：5'-CTAATTGAAGATGGACATATGGAA-3'，SEQIDNO:9提取人参根的总RNA，通过反转录得到cDNA，RT-PCR方法，用以上引物扩增得到全长基因。具体反应为：取约2μg的总RNA，加入1μl10×DNasebuffer，1μl的DNase，补DEPC处理过的水至10μl体系，混匀，37℃温育30min后，加入1μl的RQDNasestopsolution,65℃温育10min以终止反应后，加入2μlOligo(dT)18primer(0.1μg/μl)，4μl5×First-strandbuffer，1μlRibonucleaseinhibitor(40U/μl)，2μl4×dNTP(各10mM)，1μlMMLVReverseTranscriptase(200U/μl)，小心混匀，37℃保温1小时。然后90℃处理5分钟，冰上冷却，离心收集即获得相应的反转录产物cDNA。将得到的cDNA稀释10倍，取1μl作为PCR反应的模板，上、下游引物(10μM)各1μl，LATaq酶(5U/μl)0.5μl，4×dNTPs(各10mM)1μl，2×buffer(Mg2+)25μl，H2O20.5μl。PCR反应条件为预热95℃5min，变性94℃1min，退火56℃30sec，延伸72℃2min10sec，35个循环。反应结束后，对PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，经扩增获得了大小与预期结果相符的DNA片段。回收并纯化上述片段，将其连接入载体pEASY-T1(全式金公司)中，通过热激法转化大肠杆菌(E.coli)TOP10菌株，挑选阳性菌落加入到5ml含50mg/L卡那霉素的LB液体培养基中，37℃、200rpm的摇床中培养12-16小时，提取质粒，得到含有目的片段的重组质粒。经测序，基因全长度为738bp，其核苷酸序列如序列表中SEQIDNO：2所示，所编码的蛋白质的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO：1所示。实施例8.植物表达载体构建从基因的编码起始位点ATG开始设计含有SalII酶切位点的5’端引物，于终止密码处设计PstI酶切位点的3’端引物：引物3：5'-gtcgacATGGAAGTAATGCTGCTCAG-3'，SEQIDNO:10引物4：5'-ctgcagCTAAGCTAGACTAATGGTGAGGA-3'，SEQIDNO:11引物3中gtcgac序列为限制性内切酶SalI的酶切位点，下划线标识的序列为g38基因的编码序列；引物4中ctgcag序列为限制性内切酶PstI的酶切位点，下划线标识的序列为g38基因的编码序列。以测序正确含有g38的克隆载体为模板，取1μl作为PCR反应的模板，上、下游引物(10μM)各1.5μl，KOD-Plus-Neo酶(1U/μl)1μl，4×dNTPs(各2mM)5μl，10×PCRBufferforKOD-Plus-Neo5μl，25mMMgSO45μl，H2O30μl。PCR反应条件为预热94℃2min，变性94℃10sec，退火60℃30sec，延伸68℃30sec，30个循环。反应结束后，对PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，经扩增获得了大小与预期结果相符的DNA片段。回收并纯化上述片段，上述引物PCR克隆含有酶切位点的g38DNA片段，用SalI和PstI双酶切,切下目的片段，连入同样进行双酶切的pCactF植物表达载体，得到pCactF-g38，挑取菌落PCR鉴定为阳性的菌落进行测序验证。植物表达载体pCactF的T-DNA区图谱如图5所示。实施例9.转基因烟草的获得用农杆菌介导法将按具体实施方式4获得的含有酶切位点的基因g38转化烟草，具体方法如下：利用热激法将上述重组载体pCactF-g38转入农杆菌AGL0菌株(公司保菌)，利用农杆菌对烟草进行共转化。将获得的烟草转基因植株的部分叶片，按常规方法提取总DNA，在正向引物5’-ACTCACCGCGACGTCTGT-3’(SEQIDNO:12)和反向引物5’-TTCCTTTGCCCTCGGACG-3’(SEQIDNO:13)的引导下，PCR扩增潮霉素磷酸转移酶基因，经扩增获得1009bpDNA片段的为阳性转基因植株，检测结果表明用上述方法获得了转化有pCactF-g38的转基因烟草。实施例10.抗病性检测收获T1代转基因烟草种子，用含有30mg/L潮霉素的MS培养基筛选获得12株阳性植株。当幼苗长至4叶时，移栽至育苗钵中。当幼苗长至6叶时，做抗病能力检测。取患有枯萎病的烟草叶片，用剪刀剪碎后放在200ml无菌水中，200rpm摇床震荡20min，用无菌纱布过滤掉叶片后，喷施植株。以非转基因烟草为对照。10天后进行病情调查，发现转基因苗中有3株1片真叶明显萎蔫，7株4片真叶轻度萎蔫，5株2片叶子黄化或萎蔫，3株1片真叶黄化，1株没有发病症状。而非转基因的烟草中有12株枯死，5株2片真叶萎蔫，2株1片真叶轻度萎蔫。说明转g38基因的烟草抗病性比野生型对照的抗病能力强。具体统计结果见表4。本实施例中病情分级标准为：0级：无症状；1级：1片子叶黄化；2级：2片子叶黄化或萎蔫；3级：1片真叶轻度萎蔫；4级：1～2片真叶明显萎蔫；5级：全株严重萎蔫或枯死。其中2以下为抗病，3以上为感病类型。表4：转g38基因烟草抗病能力检测结果统计表0级1级2级3级4级5级转基因135730野生型0002512综合上述结果，人参g38基因编码的蛋白G38，与抗病相关，可以提高人参的抗病性。SEQUENCELISTING<110>未名兴旺系统作物设计前沿实验室(北京)有限公司<120>一种提高人参抗病性的基因g38及其编码蛋白<130><160>13<170>PatentInversion3.3<210>1<211>242<212>PRT<213>中国人参（PanaxginsengC.A.Mey）<400>1MetSerAlaAlaValAlaAlaAlaAlaAlaHisIleAsnArgCysAsn151015ProThrThrIleThrThrAlaThrAsnSerGluAlaAsnTyrAsnThr202530TyrIleProAsnGlyHisHisSerProProProProProProProPhe354045SerArgTyrGluSerGlnLysArgArgAspTrpAsnThrLeuGlyGln505560TyrLeuLysAsnHisArgProProLeuThrLeuSerArgCysSerGly65707580AlaHisValLeuGluPheLeuArgTyrLeuAspGlnPheGlyLysThr859095LysValHisAlaAsnAsnCysProPhePheGlyHisProHisProPro100105110AlaProCysProCysProLeuLysGlnAlaTrpGlySerLeuAspAla115120125LeuValGlyArgLeuArgAlaAlaPheGluGluHisGlyGlySerPro130135140GluThrAsnProPheGlyAlaArgAlaValArgLeuTyrLeuArgGlu145150155160ValArgAspSerGlnAlaLysAlaArgGlyIleAlaTyrGluLysLys165170175LysArgLysLysProHisProGlnGlnGlnGlnProGlnAspHisAsp180185190LeuAspHisAspHisLysSerAsnGlyHisGluMetIleGlyGlnGln195200205GlyTyrThrGlyGlnValCysGluGlyGlyPheAspGlyLeuGlyMet210215220AlaGlySerSerAspHisSerArgCysSerMetPheHisMetSerIle225230235240PheAsn<210>2<211>729<212>DNA<213>中国人参（PanaxginsengC.A.Mey）<400>2atgtcagctgcagtagccgccgcagctgcccatattaaccggtgcaaccccaccaccatc60accaccgccactaactctgaagccaactacaacacctacattcctaacggtcatcactct120ccacctccaccaccaccaccgttcagccgttacgagtcccaaaaacgccgagactggaac180acattgggtcaatacctaaaaaaccaccgccccccactcactctctcccggtgcagcgga240gcccacgtactagagttcctccggtacctcgaccaattcggaaagacaaaagtccacgca300aacaactgtccatttttcggtcaccctcacccgccagcaccgtgtccttgcccactcaaa360caagcgtggggtagcctcgacgctctcgtgggccgcctccgtgccgcatttgaagagcac420ggtgggtcccccgagaccaacccatttggcgcacgcgccgtccggttgtatttgagggaa480gtgagggactctcaggctaaggctagagggatagcttatgaaaagaagaaaaggaagaag540ccacatccgcagcaacaacagccgcaagatcatgatcttgatcacgatcataagtcaaat600ggtcatgagatgattggtcaacaggggtatactggtcaagtatgtgaaggtggttttgat660ggtttggggatggcgggttcatcggatcattctcggtgctccatgttccatatgtccatc720ttcaattag729<210>3<211>955<212>DNA<213>中国人参（PanaxginsengC.A.Mey）<400>3aaacgcttgtaaactcatacctcattcaattcaacaaagtaaaatatagccaaaaaaaag60aagataatcatgtcagctgcagtagccgccgcagctgcccatattaaccggtgcaacccc120accaccatcaccaccgccactaactctgaagccaactacaacacctacattcctaacggt180catcactctccacctccaccaccaccaccgttcagccgttacgagtcccaaaaacgccga240gactggaacacattgggtcaatacctaaaaaaccaccgccccccactcactctctcccgg300tgcagcggagcccacgtactagagttcctccggtacctcgaccaattcggaaagacaaaa360gtccacgcaaacaactgtccatttttcggtcaccctcacccgccagcaccgtgtccttgc420ccactcaaacaagcgtggggtagcctcgacgctctcgtgggccgcctccgtgccgcattt480gaagagcacggtgggtcccccgagaccaacccatttggcgcacgcgccgtccggttgtat540ttgagggaagtgagggactctcaggctaaggctagagggatagcttatgaaaagaagaaa600aggaagaagccacatccgcagcaacaacagccgcaagatcatgatcttgatcacgatcat660aagtcaaatggtcatgagatgattggtcaacaggggtatactggtcaagtatgtgaaggt720ggttttgatggtttggggatggcgggttcatcggatcattctcggtgctccatgttccat780atgtccatcttcaattagtaattagggtttatgtttgtttaccctctttgatttcaagta840ttatttattttgggggttttgttaattaatgggtaatggaaaggttttttttagaaccct900actttggatgaattgtcaatggttttagcggcaatatattatggaaattgttaaa955<210>4<211>22<212>DNA<213>人工合成<400>4tgaaatcaaagagggtaaacaa22<210>5<211>19<212>DNA<213>人工合成<400>5tggtcaagtatgtgaaggt19<210>6<211>20<212>DNA<213>人工合成<400>6ctgtggatgtctctgtggta20<210>7<211>20<212>DNA<213>人工合成<400>7ctccgactcctccttgatag20<210>8<211>19<212>DNA<213>人工合成<400>8atgtcagctgcagtagccg19<210>9<211>24<212>DNA<213>人工合成<400>9ctaattgaagatggacatatggaa24<210>10<211>26<212>DNA<213>人工合成<400>10gtcgacatggaagtaatgctgctcag26<210>11<211>29<212>DNA<213>人工合成<400>11ctgcagctaagctagactaatggtgagga29<210>12<211>18<212>DNA<213>人工合成<400>12actcaccgcgacgtctgt18<210>13<211>18<212>DNA<213>人工合成<400>13ttcctttgccctcggacg18当前第1页1 2 3