用于稳定和维持顽强微生物的生存力的组合物和方法与流程

文档序号:12285377阅读:来源:国知局

技术特征:

1.用于保存生物样品中有活力的顽强细菌的方法,包括使所述生物样品与稳定组合物接触,其中所述稳定组合物包含螯合剂、变性剂、盐,并且具有约6至约11之间的pH。

2.权利要求1所述的方法,其中所述顽强细菌是分枝杆菌(Mycobacteria)、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、或艰难梭菌(Clostridium difficile)。

3.权利要求2所述的方法,其中所述分枝杆菌是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis),并且其中该炭疽杆菌作为孢子是稳定的。

4.权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述生物样品是黏液状体液,例如痰或唾液。

5.权利要求1-4中任一项所述的方法,其中所述螯合剂是乙二醇四乙酸(EGTA)、(2-羟乙基)乙二胺三乙酸(HEDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺三乙酸(EDTA)、环己烷二胺四乙酸(CDTA)、N,N-双(羧基甲基)甘氨酸、无水柠檬酸盐、柠檬酸钠、柠檬酸钙、柠檬酸铵、二柠檬酸铵、柠檬酸、柠檬酸二铵、柠檬酸铁铵、柠檬酸锂、或其任意组合。

6.权利要求1-5中任一项所述的方法,其中所述变性剂是阴离子洗涤剂(如,例如,十二烷基硫酸钠(SDS)、十二烷基硫酸锂、月桂酰硫酸钠(SLS))、阳离子洗涤剂(如,例如,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB))或非离子洗涤剂(如,例如,吐温(Tween)-20、曲拉通(Triton)X-100、或布里杰(Brij)-58)。

7.权利要求1-6中任一项所述的方法,其中所述组合物包括:(i)2%SDS、12.5mM CDTA、250mM LiCl、50mM甘氨酸,并且具有pH 10.5;或(ii)4%SDS、50mM CDTA、250mM LiCl、140mM LiOH,并且具有pH 6.8。

8.权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所有或部分的顽强细菌在室温、环境温度或在约4℃至约40℃范围内的温度下储存1天或更长、2天或更长、3天或更长、4天或更长、5天或更长、6天或更长、或7天或1个月或更长后保持稳定。

9.用于液化生物样品的方法,包括使所述生物样品与稳定组合物接触,其中所述稳定组合物包含螯合剂、洗涤剂、盐,并且具有6至11之间的pH。

10.权利要求9所述的方法,其中所述生物样品是黏液状体液,例如痰或唾液。

11.权利要求9或10所述的方法,其中所述螯合剂是乙二醇四乙酸(EGTA)、(2-羟乙基)乙二胺三乙酸(HEDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺三乙酸(EDTA)、环己烷二胺四乙酸(CDTA)、N,N-双(羧基甲基)甘氨酸、无水柠檬酸盐、柠檬酸钠、柠檬酸钙、柠檬酸铵、二柠檬酸铵、柠檬酸、柠檬酸二铵、柠檬酸铁铵、柠檬酸锂、或其任意组合。

12.权利要求9-11中任一项所述的方法,其中所述变性剂是阴离子洗涤剂(如,例如,十二烷基硫酸钠(SDS)、十二烷基硫酸锂、月桂酰硫酸钠(SLS))、阳离子洗涤剂(如,例如,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB))或非离子洗涤剂(例如,吐温-20、曲拉通X-100、或布里杰-58)。

13.权利要求9-12中任一项所述的方法,其中所述组合物包括:(i)2%SDS、12.5mM CDTA、250mM LiCl、50mM甘氨酸,并且具有pH 10.5;或(ii)4%SDS、50mM CDTA、250mM LiCl、140mM LiOH,并且具有pH 6.8。

14.权利要求9-13中任一项所述的方法,其中所述稳定组合物保存生物样品中处于有活力状态的顽强细菌,并且减少或消除所述样品中的其它微生物生长。

15.用于稳定生物样品中的微生物组的方法,包括使所述生物样品与稳定组合物接触,其中所述稳定组合物包含螯合剂、洗涤剂、盐,并且具有6至11之间的pH。

16.权利要求15所述的方法,其中所述生物样品是黏液状生物液体,例如痰或唾液。

17.权利要求15或16所述的方法,其中所述螯合剂是乙二醇四乙酸(EGTA)、(2-羟乙基)乙二胺三乙酸(HEDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺三乙酸(EDTA)、环己烷二胺四乙酸(CDTA)、N,N-双(羧基甲基)甘氨酸、无水柠檬酸盐、柠檬酸钠、柠檬酸钙、柠檬酸铵、二柠檬酸铵、柠檬酸、柠檬酸二铵、柠檬酸铁铵、柠檬酸锂、或其任意组合。

18.权利要求15-17中任一项所述的方法,其中所述变性剂是阴离子洗涤剂(如,例如,十二烷基硫酸钠(SDS)、十二烷基硫酸锂、月桂酰硫酸钠(SLS))、阳离子洗涤剂(例如,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB))或非离子洗涤剂(例如,吐温-20、曲拉通X-100、或布里杰-58)。

19.权利要求15-18中任一项所述的方法,其中所述组合物包括:(i)2%SDS、12.5mM CDTA、250mM LiCl、50mM甘氨酸,并且具有pH 10.5;或(ii)4%SDS、50mM CDTA、250mM LiCl、140mM LiOH,并且具有pH 6.8。

20.权利要求15-19中任一项所述的方法,其中所述稳定组合物保存生物样品中处于有活力状态的顽强细菌,并且减少或消除所述样品中的其它微生物生长。

21.用于表征生物样品中的细菌核酸的方法,包括:

使所述生物样品与稳定组合物接触,其中所述稳定组合物包含螯合剂、洗涤剂、盐,并且具有6至11之间的pH;以及

扩增所述样品中的核酸,其中如果扩增步骤立即发生在收集之后或稍后,则扩增的核酸的水平保持基本上不变。

22.权利要求21所述的方法,其中所述生物样品是黏液状生物液体,例如痰或唾液。

23.权利要求21或22所述的方法,其中所述螯合剂是乙二醇四乙酸(EGTA)、(2-羟乙基)乙二胺三乙酸(HEDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺三乙酸(EDTA)、环己烷二胺四乙酸(CDTA)、N,N-双(羧基甲基)甘氨酸、无水柠檬酸盐、柠檬酸钠、柠檬酸钙、柠檬酸铵、二柠檬酸铵、柠檬酸、柠檬酸二铵、柠檬酸铁铵、柠檬酸锂、或其任意组合。

24.权利要求21-23中任一项所述的方法,其中所述变性剂是阴离子洗涤剂(如,例如,十二烷基硫酸钠(SDS)、十二烷基硫酸锂、月桂酰硫酸钠(SLS))、阳离子洗涤剂(如,例如,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),尽管当与DNA一起起作用时这种洗涤剂不理想)或非离子洗涤剂(如,例如,吐温-20、曲拉通X-100、或布里杰-58)。

25.权利要求21-24中任一项所述的方法,其中所述组合物包括:(i)2%SDS、12.5mM CDTA、250mM LiCl、50mM甘氨酸,并且具有pH 10.5;或(ii)4%SDS、50mM CDTA、250mM LiCl、140mM LiOH,并且具有pH 6.8。

26.组合物,包括:

螯合剂;

洗涤剂;以及

有活力的顽强微生物。

27.权利要求26所述的组合物,其中所述螯合剂是乙二醇四乙酸(EGTA)、(2-羟乙基)乙二胺三乙酸(HEDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺三乙酸(EDTA)、环己烷二胺四乙酸(CDTA)、N,N-双(羧基甲基)甘氨酸、无水柠檬酸盐、柠檬酸钠、柠檬酸钙、柠檬酸铵、二柠檬酸铵、柠檬酸、柠檬酸二铵、柠檬酸铁铵、柠檬酸锂、或其任意组合。

28.权利要求26或27所述的组合物,其中所述变性剂是阴离子洗涤剂(如,例如,十二烷基硫酸钠(SDS)、十二烷基硫酸锂、月桂酰硫酸钠(SLS))、阳离子洗涤剂(如,例如,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB))或非离子洗涤剂(如,例如,吐温-20、曲拉通X-100、或布里杰-58)。

29.权利要求26-28中任一项所述的组合物,其中所述组合物包括:(i)2%SDS、12.5mM CDTA、250mM LiCl、50mM甘氨酸,并且具有pH 10.5;或(ii)4%SDS、50mM CDTA、250mM LiCl、140mM LiOH,并且具有pH 6.8。

30.权利要求26-29中任一项所述的组合物,其中所述顽强微生物是分枝杆菌、炭疽杆菌、或艰难梭菌。

31.权利要求30所述的组合物,其中所述分枝杆菌是结核分枝杆菌,并且其中所述炭疽杆菌处于孢子的的形式。

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