氧化稳定的α‑淀粉酶变体的制作方法

文档序号:11109428阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,其中所述变体在提供所述变体的氧化稳定性的一个或多个位置处包含取代,其中当与所述亲本α-淀粉酶相比,所述变体的改进系数>1.0,该系数作为洗涤性能的量度,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。

2.根据权利要求1所述的变体,其中所述氧化稳定性是通过自动机械应力测定法(AMSA)确定的,其中所述变体在55℃下试验20分钟,并且其中在所述AMSA中使用的洗涤剂包括如实例3中所述的漂白系统。

3.根据以上权利要求中任一项所述的变体,其中所述漂白体系以如下浓度添加:至少5重量%,例如至少8重量%、例如至少10重量%、或例如至少15重量%。

4.根据以上权利要求中任一项所述的变体,其中所述亲本α-淀粉酶具有SEQ ID NO:3中阐述的氨基酸序列,或具有如下氨基酸序列,该氨基酸序列与SEQ ID NO:3中阐述的氨基酸序列具有至少80%,例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%、例如至少98%一致性。

5.根据以上权利要求中任一项所述的变体,其中所述亲本α-淀粉酶包括SEQ ID NO:3中所阐述的氨基酸序列或由其组成。

6.如以上权利要求中任一项所述的变体,其中所述亲本α-淀粉酶是SEQ ID NO:3的多肽的片段,其中该片段具有α-淀粉酶活性。

7.如以上权利要求中任一项所述的变体,其中所述变体与SEQ ID NO:3中阐述的氨基酸序列具有至少80%,例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%、例如至少98%、但少于100%序列一致性。

8.如以上权利要求中任一项所述的变体,其中所述变体在位置202处包含取代,其中所述位置对应于SEQ ID NO:3中阐述的氨基酸序列的氨基酸位置。

9.根据权利要求8所述的变体,其中所述的在位置202中的取代选自以下各项中任一项:M202A、M202R、M202N、M202D、M202C、M202E、M202Q、M202G、M202H、M202I、M202L、M202K、M202F、M202P、M202S、M202T、M202W、M202Y和M202V,优选地M202L、M202I、M202T、M202F和M202S,其中所述位置对应于阐述于SEQ ID NO:3中的氨基酸序列中的位置。

10.根据前述权利要求中任一项所述的变体,其中所述变体包含在如下两个或更多个位置的缺失,这些位置对应于阐述于SEQ ID NO:3中的氨基酸序列的位置R181、G182、D183、和G184。

11.根据权利要求10所述的变体,其中所述变体在对应于R181+G182;R181+D183;R181+G184;G182+D183;G182+G184;或D183+G184的位置中包含缺失,其中这些位置对应于SEQ ID NO:3中阐述的氨基酸序列中的那些位置。

12.根据前述权利要求中任一项所述的变体,其中取代的数目是1至20个,例如1至10个和1至5个,如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代。

13.一种组合物,其包含根据前述权利要求中任一项所述的变体。

14.根据权利要求13所述的组合物,其中所述组合物是洗涤剂组合物,例如液体衣物或液体餐具洗涤组合物,例如自动餐具洗涤(ADW)液体洗涤剂组合物,或粉末状衣物洗涤,例如皂条,或粉末状餐具洗涤组合物,例如ADW洗涤剂组合物。

15.根据权利要求13和14中任一项所述的组合物,其中所述组合物进一步包括一种或多种表面活性剂、一种或多种磺化的聚合物、一种或多种螯合剂、一种或多种漂白系统、和/或一种或多种助洗剂。

16.根据权利要求13至15中任一项所述的组合物,其中所述组合物进一步包括一种或多种选自下组的另外的酶,该组由以下各项组成:

(i)与SEQ ID NO:5中的α-淀粉酶相比,在以下位置处包括修饰的α-淀粉酶:202;

(ii)与SEQ ID NO:6中的α-淀粉酶相比,在以下位置处包括一个或多个修饰的α-淀粉酶:9、118、149、182、186、195、202、257、295、299、320、323、339、345和458;

(iii)与SEQ ID NO:9中的α-淀粉酶相比,在以下位置处包括一个或多个修饰的α-淀粉酶:405、421、422和428;

(iv)α-淀粉酶,其包含SEQ ID NO:7、10、11、和12中阐述的任何一个氨基酸序列;和/或

(v)与SEQ ID NO:8中的蛋白酶相比,在以下位置处包括一个或多个修饰的蛋白酶:32、33、48-54、58-62、94-107、116、123-133、150、152-156、158-161、164、169、175-186、197、198、203-216。

17.一种多核苷酸,其编码根据前述权利要求中任一项所述的变体。

18.一种核酸构建体,其包括根据权利要求17所述的多核苷酸。

19.一种表达载体,其包括根据权利要求17所述的多核苷酸。

20.一种宿主细胞,包括根据权利要求17所述的多核苷酸、根据权利要求18所述的核酸构建体、或根据权利要求19所述的所述表达载体。

21.一种生产α-淀粉酶变体的方法,该方法包括:

a.在适合于表达所述变体的条件下培养根据权利要求20所述的宿主细胞;并且

b.回收所述变体。

22.一种获得α-淀粉酶变体的方法,该方法包括将在位置202处的取代引入亲本α-淀粉酶中,其中所述位置对应于SEQ ID NO:3中阐述的氨基酸序列的位置;b)任选地,在对应于SEQ ID NO:3中阐述的氨基酸序列的位置R181、G182、D183、和G184的两个或更多个位置处引入缺失;和c)回收所述变体。

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