一种狭旋毛壳菌及其在制备可皆霉素中的应用的制作方法

文档序号:11125849阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种狭旋毛壳菌,其保藏的分类学名称为狭旋毛壳CLC001,保藏号为CCTCC NO:M 2016231,保藏于中国典型培养物保藏中心。

2.如权利要求1所述的狭旋毛壳菌在制备可皆霉素中的应用。

3.如权利要求1所述的应用,其特征在于包括以下步骤:

(1)菌种活化:将狭旋毛壳菌种接种到平板培养基上,25℃恒温培养72小时,获得活化菌种;

(2)制备种子液:将步骤(1)中得到的活化菌种接种到装有无菌培养液A的无菌三角瓶中,转速为150rpm、温度为25℃条件下震荡培养72小时,获得种子液;培养液A的配方为:胰蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,氯化钠10g/L,pH6.0±0.1;

(3)发酵培养:将步骤(2)制备的种子液与培养液B按照体积比为5:100接入到无菌三角瓶中,转速为150rpm、温度为25℃条件下震荡培养7d,获得发酵液;培养液B的配方为:葡萄糖40 g/L,蛋白胨 10 g/L,酵母粉 10 g/L,pH6.0±0.1;

(4)甲醇提取物的制备:将步骤(3)制备的发酵液用医用纱布过滤,得到狭旋毛壳菌体,将狭旋毛壳菌体用甲醇作为提取溶剂,超声提取,得到甲醇提取液,40~45℃下减压除去甲醇后得到甲醇提取物;

(5)可皆霉素的制备:将步骤(4)制备的甲醇提取物进行柱层析分离,即得可皆霉素。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述步骤(1)中平板培养基配方为:酵母膏10g/L,葡萄糖40g/L,蛋白胨10g/L,琼脂粉20g/L,pH6.0±0.1。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述步骤(4)中将狭旋毛壳菌体用甲醇提取时,用甲醇提取3次,每次提取时狭旋毛壳菌体与甲醇的固液比为1g︰60ml、每次提取时于20~25℃下超声20 min。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于步骤(5)中柱层析分离的步骤如下:将步骤(4)制备的甲醇提取物用80~100目硅胶拌样后装柱,固定相为200~300目硅胶,以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱,硅胶薄层层析检测,合并二氯甲烷-甲醇的体积比为100:(2~4)的流份,40~45℃下减压除去二氯甲烷和甲醇。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于:所述步骤(5)中将甲醇提取物与80~100目硅胶拌样时,甲醇提取物与80~100目硅胶的重量比为1︰2。

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