他达拉菲药物新杂质及其制备方法和用途与流程

本发明涉及药物化学领域，具体的，本发明涉及化合物、制备方法、分析检测方法以及用途，更具体的，本发明涉及他达拉非药物的新杂质，该杂质的合成方法和其在分析他达拉非药物中的用途。
背景技术：
：他达拉非，化学名称为：(6r-12ar)-6-(1,3-苯并二恶茂-5-基)-2-甲基-2,3,6,7,12,12a-六氢化吡嗪并[1',2'-1,6]-吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-二酮，结构式如下(化合物i)：他达拉非片是环磷酸鸟苷(cgmp)特异性磷酸二酯酶5(pde5)的选择性抑制剂，当性刺激导致局部释放一氧化氮，pde5受到他达拉非抑制，使阴茎海绵体内cgmp水平提高，这导致平滑肌松弛，血液流入阴茎组织，产生勃起。然而目前的他达拉非药物的质量评价方法还有待改进。技术实现要素：本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种式2所示化合物及其制备方法和用途，该化合物能够有效地用于他达拉非药物的质量控制，即式2所示化合物可作为标准品或对照品用于他达拉非原料药及制剂产品的质量控制。在本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物。根据本发明的实施例，该化合物具有式2所示结构式：在进行他达拉非原料药及制剂的质量检测过程中，发明人发现他达拉非原料和制剂中均含有1个杂质，经仔细研究对其结构进行确定，该杂质具有式2所示结构。在本发明的第二方面，本发明提出了一种制备式2所示化合物的方法，其合成路线如下：根据本发明的实施例，参照上述合成路线，该方法包括：(1)使式sm01所示溴代乙酸与钠接触，以便获得式1所示化合物；以及(2)使所述式1所示化合物与式sm02所示化合物接触，以便获得式2所示化合物。发明人发现，通过采用该方法可以有效地制备式2所示化合物。由此，将该化合物作为标准品或对照品，能够有效地用于对他达拉非药物的杂质检测，进而有效地对他达拉非药物进行质量控制。根据本发明的实施例，上述制备式2所示化合物的方法还可以具有下列附加技术特征至少之一：根据本发明的一个实施例，步骤(1)所得式1所示化合物的粗品可直接作为步骤(2)的原料参与合成。由此，可以简化操作过程，进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。根据本发明的实施例，在步骤(1)中，sm01所示溴代乙酸与钠接触的方式并不受特别限制，既可以是在溶液中进行的，也可以是在非溶液状态下进行的。优选地，在第一溶剂中，使所述式sm01所示溴代乙酸与钠接触，所述第一溶剂为选自乙醇、甲醇、异丙醇中的至少一种。根据本发明的具体实施例，第一溶剂优选为乙醇。由此，可以提升sm01与钠接触的效率，加快反应速度，进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。根据本发明的一个实施例，在步骤(1)中，优选地可以按照下列步骤进行，(1-1)将金属钠加入到乙醇中，待金属钠完全溶解后，再油浴加热至70-80℃，得到第一体系；(1-2)再将式sm01所示化合物溶解于乙醇中，得到第二体系；(1-3)将第二体系慢慢加入到第一体系中，继续搅拌40min，停止加热，体系自然降至室温，常温搅拌过夜，得第三体系；(1-4)向第三体系加入水，用nh4cl调至ph＝1～2，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，再用饱和食盐水洗涤一次有机相，干燥，过滤，浓缩，得油状物粗品，直接投入步骤(2)。所述干燥过程可以用无水硫酸钠为干燥剂。由此，可以进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。根据本发明的实施例，在步骤(2)中，式1所示化合物与式sm02所示化合物接触的方式并不受特别限制，既可以是在溶液中进行的，也可以是在非溶液状态下进行的，优选地，在第二溶剂中，使所述式1所示化合物与式sm02所示化合物接触，所述第二溶剂含有二氯甲烷和三乙胺。由此，可以提升式1所示化合物与式sm02所示化合物接触的效率，加快反应速度，进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。根据本发明的实施例，在步骤(2)中，优选的，操作过程进一步包括(2-1)将式1所示中间体加入二氯甲烷，再加入三乙胺，冰浴冷却；(2-2)使(2-1)所得体系与式sm02所示化合物、o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯(tbtu)接触后，自然升温至室温，搅拌过夜，得第四体系；(2-3)向第四体系加入二氯甲烷，加入饱和氯化铵洗涤，分离有机相，浓缩，flash纯化，得式2所示化合物。采用如上所示的操作步骤和加药反应顺序，可以提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。根据本发明的实施例，发明人惊奇地发现，反应物用量对制备式2所示化合物的效率有重要影响。式sm01所示化合物、o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯、式1所示化合物与式sm02所示化合物的摩尔比为(5.5～6.5)：(2.5～1.5)：(1.55～1.45)：1，优选为6：2：1.5：1。此范围反应剂量，可以进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。根据本发明的一个实施例，基于0.158mol式sm01所示化合物，步骤(1-1)中金属钠的用量为4g，乙醇的用量为100毫升；步骤(1-2)中，乙醇的用量为50毫升；步骤(1-4)中，水的用量为200毫升，乙酸乙酯的用量为300毫升，饱和食盐水的用量为100毫升；根据本发明的另一实施例，基于0.158mol式sm01所示化合物，步骤(2-1)中式1所示中间体的用量为38.8mmol，二氯甲烷的用量为200毫升，三乙胺的用量为11毫升；步骤(2-2)中，式sm02所示化合物的用量为25.8mmol，o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯的用量为51.5mmol；步骤(2-3)中，二氯甲烷的用量为300毫升，饱和氯化铵的用量为250毫升，flash纯化中，采用体积为1：1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂。在本发明的第三方面，本发明提出了一种前面所述的式2所示化合物或者利用前面所述方法制备得到的式2所示化合物在分析他达拉非药物产品中的用途。利用本发明上述实施例的式2所示的化合物作为对照品或标准品用于他达拉非原料药及制剂产品的质量控制，利用式2所示的化合物能够有效地用于他达拉非药物中的存在的该杂质进行分析，进而对他达拉非药物的质量进行控制，提高对他达拉非药物进行检测的效率。根据本发明的具体实施例，具体地，采用高效液相色谱分析对他达拉非药物进行检测的方法。根据本发明的实施例，所述高效液相色谱分析条件为：采用高效液相色谱仪配备紫外检测器，色谱柱为venusilasbtic8250×4.6mm，5μm或相当的色谱柱，检测波长：285nm，流速：1.0ml/min，柱温：40℃，进样量：20μl。流动相组成为：流动相a为乙腈；流动相b为0.1％三氟乙酸水溶液。进行洗脱梯度的条件如下表：供试品溶液的配制：取供试品适量加稀释液(稀释液为乙腈：水＝1：1(v/v))溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液。供试品溶液主峰的保留时间约为21.418min；供试品溶液色谱图中如含有所述式2所示化合物的杂质峰，则式2所示化合物的相对保留时间约为0.97。测定方法：采用面积归一化法计算各杂质含量及主峰纯度(峰面积百分率％)。由此，可以进一步提高对他达拉非药物进行检测的效率。附图说明图1是根据本发明实施例2的制备方法得到的式2所示化合物的1hnmr图。图2是根据本发明的实施例4中式2所示化合物hplc图谱。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。本发明是基于发明人的下列发现而完成的：药物杂质通常是指药物中存在的，化学结构与该药物不一致的任何成分。药物中含有杂质会降低疗效，影响药物的稳定性，有的甚至对人体健康有害或产生其他毒副作用。因此，检测有关物质，控制药物纯度非常重要。对于他达拉非药物，现有技术中对于其杂质尤其是各种原料药和剂型中均存在的杂质的研究较少，因此，目前对该药物的质量检测方法明显受到限制。发明人在对多批次的他达拉非药物原料药以及制剂进行质量检测过程中，发现各批次他达拉非药物原料以及制剂中都含有一个共同的杂质，经过分析发现，确定该杂质为具有式2所示的化合物：在此之前，并未有任何公开的文献报道过该杂质。化合物由此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物。根据本发明的实施例，该化合物具有式2所示结构式：发明人惊奇地发现，采用该化合物作为标准品或对照品，能够有效地用于他达拉非原料药及制剂的质量控制。根据本发明的实施例，式2所示化合物的化学名为：2-(羧基-甲酰氨基-1-甲基乙基)-5-羟基-1-甲基-6-酮-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸-4-氟苄胺，其分子式：c24h24n2o6，分子量：436.46。根据本发明的实施例，发明人在对他达拉非药物进行质量检测中发现，式2所示化合物作为杂质普遍存在于他达拉非原料药及其制剂中。经过结构确认及质量分析验证该化合物为他达拉非合成过程中副反应产生的杂质。由此，可以将该式2所示化合物作为标准品或对照品对他达拉非药物进行质量检测和质量控制，用于控制可能含有该杂质的他达拉非药物的质量。化合物的制备方法为了能够将式2所示的化合物用于对他达拉非药物进行质量检测，需要有高纯度的化合物用作对照品，用于控制可能含有该杂质的他达拉非药物的质量。因此，在本发明的第二方面，本发明提出了一种制备式2所示化合物的方法。下面根据本发明实施例的制备式2所示化合物的方法进行详细描述。根据本发明的实施例，该制备式2所示化合物的方法包括：s100：制备式1所示化合物使式sm01所示溴代乙酸与钠接触，以便获得式1所示化合物；具体的，根据本发明的实施例，发明人发现，使sm01所示溴代乙酸与钠在第一溶液中接触，可以使反应充分进行，并且第一溶剂优选为选自乙醇、甲醇、异丙醇中的至少一种，优选选自乙醇。从而可以进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。另外，发明人在研究过程中发现，在使sm01所示溴代乙酸与钠接触时，操作步骤和加药顺序对接触效率有显著影响。发明人经过大量的试验筛选发现在步骤s100中，采用如下步骤：(1-1)将金属钠加入到乙醇中，待金属钠完全溶解后，再油浴加热至70-80℃，得到第一体系；(1-2)将式sm01所示化合物溶解于乙醇中，得到第二体系；(1-3)将第二体系慢慢加入到第一体系中，继续搅拌40min，停止加热，体系自然降至室温，常温搅拌过夜，得第三体系；向第三体系加入水，用nh4cl调至ph＝1～2，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，再用饱和食盐水洗涤一次有机相，干燥，过滤，浓缩，得油状物粗品。所述干燥过程可以用无水硫酸钠为干燥剂。由此，可以提高利用该方法制备式1所示化合物的效率。更令人惊奇的是，采用上述操作步骤和加药顺序所得到的油状物粗品，可以作为含有式1所示化合物的反应底物被直接用于步骤2，无需纯化，从而节省了操作过程，降低了物料的损失，进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。也提高了利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。s200：由sm02所示化合物制备式2所示化合物使所述式1所示化合物与式sm02所示化合物接触，以便获得式2所示化合物。具体的，根据本发明的实施例，发明人发现，式1所示化合物与式sm02所示化合物在第二溶剂中接触，可以使反应充分进行，并且所述第二溶剂优选为含有二氯甲烷和三乙胺。从而可以进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。由此，可以提升式1所示化合物与式sm02所示化合物接触的效率，加快反应速度，进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。另外，发明人在研究过程中发现，在使式1所示化合物与式sm02所示化合物接触时，操作步骤和加药顺序对接触效率有显著影响。发明人经过大量的试验筛选发现在步骤s200中，采用如下步骤：(2-1)将式1所示中间体加入二氯甲烷，再加入三乙胺，冰浴冷却；(2-2)使(2-1)所得体系与式sm02所示化合物、o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯接触后，自然升温至室温，搅拌过夜，得第四体系；(2-3)向第四体系加入二氯甲烷，加入饱和氯化铵洗涤，分离有机相，浓缩，flash纯化，得式2所示化合物。采用如上所示的操作步骤和加药反应顺序，可以提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。根据本发明的实施例，反应物用量对制备式2所示化合物的效率有重要影响。发明人惊奇地发现，式sm01所示化合物、o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯、式1所示化合物与式sm02所示化合物的摩尔比为sm01:o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯:1:sm02＝(5.5～6.5):(2.5～1.5):(1.55～1.45):1，优选为6:2:1.5:1。此范围反应剂量，可以进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。具体的，根据本发明的一个实施例，基于0.158mol式sm01所示化合物，步骤(1-1)中金属钠的用量为4g，乙醇的用量为100毫升；步骤(1-2)中，乙醇的用量为50毫升；步骤(1-4)中，水的用量为200毫升，乙酸乙酯的用量为300毫升，饱和食盐水的用量为100毫升；基于0.158mol式sm01所示化合物，步骤(2-1)中式1所示中间体的用量为38.8mmol，二氯甲烷的用量为200毫升，三乙胺的用量为11毫升；步骤(2-2)中，式sm02所示化合物的用量为25.8mmol，o-苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲四氟硼酸酯的用量为51.5mmol；步骤(2-3)中，二氯甲烷的用量为300毫升，饱和氯化铵的用量为250毫升，flash纯化中，溶剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：1。此范围反应剂量，可以进一步提高利用该方法制备式2所示化合物的效率。另外，可以进一步提高利用所得到的式2所示化合物作为标准品或对照品检测他达拉非药物的效率。他达拉非药物检测方法如前所述，根据本发明的实施例的制备方法可以有效地制备高纯度的式2所示化合物，并且该化合物普遍存在于他达拉非原料药和药物制剂中，因此，本发明的发明提出了可以利用该式2所示的化合物作为标准品或对照品，用于对他达拉非药物进行检测。由此，在本发明的第三方面，本发明提出了一种式2所示化合物在分析他达拉非药物杂质中的用途，式2所示化合物作为标准品或对照品用于他达拉非原料药及制剂产品的质量控制。根据本发明的具体实施例，在采用高效液相色谱对他达拉非药物进行检测分析过程中，以式2所示化合物作为标准品或对照品。由此可以对他达拉非药物中的该杂质进行分析。根据本发明的实施例，所述高效液相色谱分析条件为：采用高效液相色谱仪配备紫外检测器，色谱柱为venusilasbtic8250×4.6mm，5μm或相当的色谱柱，检测波长：285nm，流速：1.0ml/min，柱温：40℃，进样量：20μl。流动相组成为：流动相a为乙腈；流动相b为0.1％三氟乙酸水溶液。进行洗脱梯度的条件如下表：供试品溶液的配制：取供试品适量加稀释液(稀释液为乙腈：水＝1：1(v/v))溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液。供试品溶液主峰的保留时间约为21.418min；供试品溶液色谱图中如含有所述式2所示化合物的杂质峰，则式2所示化合物的相对保留时间约为0.97。测定方法：采用面积归一化法计算各杂质含量及主峰纯度(峰面积百分率％)。由此，可以进一步提高对他达拉非药物进行检测的效率。需要说明的是，上面只列出了对于本发明的检测方法而言至关重要的条件，关于高效液相色谱法所采用的其他条件，本领域技术人员可以根据常识进行选择，例如，可以参考中国药典2015年版二部附录vd，在此不再赘述。下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1式1所示化合物的制备称取金属钠(4.01g,0.174mol)慢慢加入到100毫升乙醇中，待金属钠解后，再油浴加热至70-80℃，原料sm01(22.0g,0.158mol)溶解在50毫升乙醇中，慢慢加入到体系中，继续搅拌40min，停止加热，体系自然降至室温，常温搅拌过夜。体系加入200毫升水，用4nhcl调至ph＝1～2，用300ml乙酸乙酯萃取，收集有机相，再用100毫升饱和食盐水洗涤一次有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得17.1g油状物粗品，即为式1所示化合物，其作为药物中间体直接投入下一步反应。实施例2式2所示化合物的合成式1所示化合物(4.04g,38.8mmol)加入200ml二氯甲烷中，再计入11毫升三乙胺，冰浴冷却，加入sm02(10g,25.8mmol)和tbtu(13.1g,51.5mmol)，体系再自然升至室温，搅拌过夜。体系加入300毫升二氯甲烷，加入250毫升饱和氯化铵洗涤，分离有机相，浓缩，flash纯化(pe:ea＝1：1)，得1.66g黄色固体，即为式2所示化合物，产率：15％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.85(s,1h),7.63(d,1h),7.38–7.12(m,4h),6.92(d,2h),6.66(s,2h),5.92(s,2h),5.24(s,1h),4.27(s,1h),3.69(d,1h),3.61(q,2h),3.28–2.96(m,4h),1.26(t,3h)。(1hnmr图见附图1)实施例3不同溶剂对化合物2的制备收率、质量的影响按照实施例2所述的式2所示化合物的合成方法，选用第二溶剂分别为：氯仿和三乙胺、甲苯和三乙胺、乙腈和三乙胺，完成3个实验，得到3个式2所示化合物的样品，其收率、质量数据见下表：样品溶剂产量/g收率/％样品hplc纯度/％实施例2二氯甲烷和三乙胺1.661598.61氯仿和三乙胺1.441397.52甲苯和三乙胺0.77782.23乙腈和三乙胺1.0990.3结论：由上表可以看出，采用含有二氯甲烷和三乙胺的第二溶剂，制备得到的式2所示化合物的产量、收率以及纯度均最高。其次是采用含有氯仿和三乙胺的第二溶剂。实施例4对式2所示化合物的检测所述高效液相色谱分析条件为：采用高效液相色谱仪配备紫外检测器，色谱柱为venusilasbtic8250×4.6mm，5μm或相当的色谱柱，检测波长：285nm，流速：1.0ml/min，柱温：40℃，进样量：20μl。流动相组成为：流动相a为乙腈；流动相b为0.1％三氟乙酸水溶液。进行洗脱梯度的条件如下表：供试品溶液的配制：取供试品适量加稀释液(稀释液为乙腈：水＝1：1(v/v))溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液。结果如附图2所示。供试品溶液主峰的保留时间约为21.418min；供试品溶液色谱图中含有所述式2所示化合物的峰，式2所示化合物的保留时间约为20.765min，式2所示化合物的相对保留时间为0.97。测定方法：采用面积归一化法计算各杂质含量及主峰纯度(峰面积百分率％)。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。当前第1页12