一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法与流程

文档序号:11931536阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,具有如下步骤:

(1)稀释步骤

将微生物发酵法制备获得的透明质酸钠发酵液,用纯化水稀释混匀得到稀释后的发酵液;

(2)氯仿沉淀步骤

将步骤(1)中稀释后的发酵液,加入质量百分比浓度为3%-20%的氯仿,漩涡震荡混匀,震摇得到沉淀后的发酵液;

(3)离心分离步骤

将步骤(2)得到的沉淀后的发酵液,离心弃沉淀,收集上清液;

(4)氯仿去除步骤

将步骤(3)的上清液静置,待氯仿/发酵液分层明显后,弃去底部的氯仿,收集上清液;

(5)过滤步骤

预铺硅藻土滤层,将步骤(4)的上清液澄清过滤后,再将滤液用滤膜过滤,收集滤液备用;

(6)用超滤膜将步骤(5)制备的滤液体积浓缩至1/3后,再用纯化水等体积透析得到透析液;

(7)透析液加入透明质酸钠质量2-3倍的CPC,络合沉淀,收集CPC沉淀,再用氯化钠溶液解离得到解离液;

(8)将步骤(7)制备的解离液澄清过滤,用乙醇醇沉,收集沉淀,脱水干燥并抽真空干燥后得透明质酸钠原料。

2.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述透明质酸钠发酵液为微生物发酵法制备获得的透明质酸钠发酵液或采用鸡冠提取法获得的透明质酸钠发酵液。

3.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,将微生物发酵法制备获得的透明质酸钠发酵液,用3倍体积的纯化水稀释混匀。

4.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述震摇是在37℃条件震摇2h。

5.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,离心条件为采用4000转/min的速度,离心20min。

6.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述静置的时间为20min。

7.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(5)中,所述滤膜为0.45um滤膜。

8.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(6)中,所述超滤膜为100KD分子量的聚醚砜材质超滤膜。

9.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(6)中,滤液体积浓缩至1/3后,用5倍体积的纯化水等体积透析。

10.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(7)中,所述络合沉淀的时间为30min。

11.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(7)中,所述氯化钠溶液的摩尔浓度0.4mol/L,解离时间为4h以上。

12.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(8)中,解离液澄清过滤后用3倍体积95%乙醇醇沉。

13.如权利要求1所述的一种降低透明质酸钠原料中杂蛋白含量的方法,其特征在于,所述步骤(8)中,脱水干燥的次数为3次,抽真空干燥的时间为12h以上。

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