1.用于检验样本中活菌体的荧光PCR引物探针组,其特征在于,包括具有SEQ ID NO.1-2所示核苷酸序列的引物,以及含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的探针。
2.根据权利要求1所述的荧光PCR引物探针组,其中,还包括具有SEQ ID NO.4-5所示核苷酸序列的引物,以及含有SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的探针。
3.一种样本中活菌体的荧光PCR检测方法,其特征在于,所述检测方法包括如下步骤:
(1)用PMA孵育待测样本和荧光PCR试剂,提取待测样本的总DNA;
(2)以总DNA为模板,并使用权利要求1或2所述的引物探针组和PMA孵育后的荧光PCR试剂进行荧光PCR反应;
(3)收集检测通道荧光信号,得到检测结果;
在空白对照、阳性对照和阳性内对照成立的情况下,在荧光检测通道中:
a)若样本有S型扩增,且CT值小于35,则判定样本为阳性;
b)若样本有S型扩增,且CT值小于40并大于等于35,则判定为不确定样本,需重新提取核酸后进行复检;若复检的样本仍有S型扩增,且CT值小于40,则判定样本为阳性,否则为阴性;
c)若样本无明显S型扩增曲线,但报告有CT值,则判定为非特异性扩增。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其中,每条引物的最终使用浓度各自为0.2-0.6μM,每条探针的最终使用浓度各自为0.1-0.3μM。
5.根据权利要求3或4所述的检测方法,其中,PMA孵育待测样本的条件包括:将待测样本与样本孵育用PMA溶液接触混合后光照5-10min,其中,PMA的工作浓度为10-20μg/ml。
6.根据权利要求5所述的检测方法,其中,PMA孵育荧光PCR试剂的条件包括:将荧光PCR试剂与试剂孵育用PMA溶液接触混合后光照1-3min,其中,PMA的工作浓度为0.5-10μg/ml。
7.根据权利要求3或4所述的检测方法,其中,荧光PCR反应的条件包括如下步骤:
a:95℃4-6min;
b:95℃15-30s,
c:50-60℃15-60s,b-c循环40个反应。
8.一种荧光PCR检测样本中活菌体的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物探针组。
9.根据权利要求8所述的试剂盒,其中,所述试剂盒包括反应体系缓冲液、DNA聚合酶、引物探针混合物、PMA、阳性对照和超纯水。
10.权利要求1或2所述的荧光PCR引物探针组在制备荧光PCR检测样本中活菌体的试剂盒中的用途。