1.一种检测EGFR耐药性突变的组合物,其特征在于,包括:
多个PCR引物;
所述PCR引物为:
(1)正向引物:5’-CGTTCGGCACGGTGTATAA-3’
反向引物:5’-GCCTCCTTCTGCATGGTATT-3’
或者
(2)正向引物:5’-GGATCCCAGAAGGTGAGAAAGTT-3’
反向引物:5’-ATAGTCCAGGAGGCAGCCGAA-3’。
2.根据权利要求1所述的检测EGFR耐药性突变的组合物,其特征在于,还包括:
试剂盒;
所述试剂盒包括Taq DNA Polymerase、dNTPs、反应缓冲液。
3.根据权利要求2所述的检测EGFR耐药性突变的组合物,其特征在于,所述试剂盒中Taq DNA Polymerase的浓度为2x。
4.根据权利要求2所述的检测EGFR耐药性突变的组合物,其特征在于,所述引物的终浓度为0.2uM,试剂盒中dNTPs终浓度为0.5uM,缓冲液10xTaq PCR Buffer的终浓度为1x。
5.根据权利要求4所述的检测EGFR耐药性突变的组合物,其特征在于,所述用于配置引物的终浓度溶液的引物浓度为10uM。
6.一种采用如权利要求2-5中任意一项所述的组合物进行检测EGFR耐药性突变的方法,其特征在于,包括步骤:
A.模板制备:石蜡包埋组织切片中提取DNA,使用紫外分光光度计对其进行浓度调整,作为PCR检测的模板;
B.反应组分配制:分别配制检测混合物和阴性对照品混合物;其中,检测混合物按PCR混合液10.5uL、模板DNA溶液2uL,加ddH2O补至50ul配制一管;阴性对照品混合物按PCR混合液10.5uL,不加DNA模板,加ddH2O补至50ul配制一管;
C.扩增:分别将检测混合物、阴性对照品混合物放入PCR仪扩增,按以下程度进行扩增:
(1)94℃,2-5min,1cycle;
(2)循环重复如下步骤30-35次:
94℃ 30S
50-60℃ 30S
72℃ 1-2kb/min;
(4)72℃, 5-10min;
D.结果判定:扩增产物直接点样电泳,如果检测物中扩增出片段和理论上设计引物时参照的目的片段大小一致,且阴性对照物无条带,说明样本DNA中含有该突变;如果检测物中没有扩增出片段,且阴性对照品无条带,说明检测物中不含该突变。