本发明涉及蛋白质提取
技术领域：
，具体涉及一种方格星虫中蛋白质的提取方法。
背景技术：
：方格星虫，又称为光裸星虫，俗称″沙虫″。它的形状很像一根肠子，呈长筒形，体长约10～20厘米，且浑身光裸无毛，体壁纵肌成束，每环肌交错排列，形成方块格子状花纹，方格星虫虽然没有海参、鱼翅、鲍鱼的名贵，但味道鲜美脆嫩，为海参、鱼翅所不及。生长在沿海滩涂，因为对生长环境的质量十分敏感，一旦污染则不能成活，因而有″环境标志生物″之称。目前的海产品中蛋白质的提取方法一般采用水溶液提取法和有机溶剂提取法，水提法蛋白提取率低，有机溶剂提取法容易溶剂残留，方格星虫含有丰富的蛋白质，而目前没有涉及一种方格星虫中蛋白质的提取方法。技术实现要素：本发明的一个目的提供一种简单方便、提取率高、提取蛋白纯度高的方格星虫中蛋白质的提取方法。本发明提供的技术方案为：一种方格星虫中蛋白质的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：步骤一、将方格星虫中的沙子清洗干净，采用按重量比1∶1加入水，采用高速搅拌机搅碎成虫浆；步骤二、将虫浆置于超声波中1-2小时后，再放置到电磁场中20-30分钟；步骤三、按重量比100∶1往虫浆中加入蛋白酶，置于高压反应釜中，加入醋酸将PH调节至3-5，温度为50-60℃，搅拌3-6小时后，再放置在水浴中温度为100-120℃灭酶，得到酶解虫浆，离心提取上清液，将上清液冷冻干燥即得所述蛋白质。优选的是，步骤一中在进行高速搅拌前还包括将方格星虫采用浓度为80％质量分数的氯化钠溶液浸泡1-2小时后，采用清水漂洗2-3次。优选的是，步骤三中所述蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶按体积比1∶1混合，所述蛋白酶的添加量为2000-6000U/g。优选的是，步骤三中高压反应釜的压力为1-2Mpa，搅拌速度为100rmp/min。优选的是，步骤二中超声波的工作频率为300-500赫兹，电磁场的感应强度为3000-4000Gs。优选的是，步骤三中上清液冷冻干燥前经过离子交换柱2-3次。优选的是，在步骤二前还包括往虫浆加入体积比为1∶1乙酸乙酯进行脱脂，通过减压浓缩脱脂，同时回收乙酸乙酯。本发明的有益效果如下：本发明将虫浆经过超声波和电磁场后，将虫浆的细胞破碎利于方格星虫中蛋白质的酶解，再通过高压酶解提取，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复配使用，显著提高方格星虫中蛋白质的提取率，优选的在提取前采用高浓度盐水对方格星虫进行处理，使得细胞处理脱水状态，在打虫浆的时候容易破碎，提高蛋白质的酶解率，酶解前还进行脱脂处理和离心后经过离子交换处理，能显著提高蛋白质的纯度。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。实施例1本实施例方格星虫中蛋白质的提取方法包括以下步骤：步骤一、将方格星虫中的沙子清洗干净，采用按重量比1∶1加入水，采用高速搅拌机搅碎成虫浆；步骤二、将虫浆置于超声波中1小时后，再放置到电磁场中20分钟；步骤三、按重量比100∶1往虫浆中加入蛋白酶，置于高压反应釜中，加入醋酸将PH调节至3-5，温度为50℃，搅拌3小时后，再放置在水浴中采用水浴锅进行水浴加热温度为100℃灭酶，得到酶解虫浆，离心提取上清液，将上清液冷冻干燥即得所述蛋白质。实施例2本实施例方格星虫中蛋白质的提取方法包括以下步骤：步骤一、将方格星虫中的沙子清洗干净，将方格星虫采用浓度为80％质量分数的氯化钠溶液浸泡2小时后，采用清水漂洗3次，采用按重量比1∶1加入水，采用高速搅拌机搅碎成虫浆；步骤二、将虫浆置于超声波中2小时后，再放置到电磁场中30分钟；步骤三、按重量比100∶1往虫浆中加入蛋白酶，置于高压反应釜中，高压反应釜的压力为1Mpa，搅拌速度为100rmp/min，加入醋酸将PH调节至3-5，温度为60℃，搅拌6小时后，再放置在水浴中温度为120℃灭酶，得到酶解虫浆，离心提取上清液，将上清液冷冻干燥即得所述蛋白质，所述蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶按体积比1∶1混合，所述蛋白酶的添加量为2000U/g。其中，步骤二中超声波的工作频率为300赫兹，电磁场的感应强度为3000Gs。其中，步骤三中上清液冷冻干燥前经过离子交换柱2次。其中，在步骤二前还包括往虫浆加入体积比为1∶1乙酸乙酯进行脱脂，通过减压浓缩脱脂，同时回收乙酸乙酯。实施例3本实施例方格星虫中蛋白质的提取方法包括以下步骤：步骤一、将方格星虫中的沙子清洗干净，采用按重量比1∶1加入水，采用高速搅拌机搅碎成虫浆；步骤二、将虫浆置于超声波中2小时后，再放置到电磁场中30分钟；步骤三、按重量比100∶1往虫浆中加入蛋白酶，置于高压反应釜中，加入醋酸将PH调节至3-5，温度为60℃，搅拌6小时后，再放置在水浴中温度为120℃灭酶，得到酶解虫浆，离心提取上清液，将上清液冷冻干燥即得所述蛋白质。其中，步骤一中在进行高速搅拌前还包括将方格星虫采用浓度为80％质量分数的氯化钠溶液浸泡2小时后，采用清水漂洗3次。其中，步骤三中所述蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶按体积比1∶1混合，所述蛋白酶的添加量为6000U/g。其中，步骤三中高压反应釜的压力为2Mpa，搅拌速度为100rmp/min。其中，步骤二中超声波的工作频率为500赫兹，电磁场的感应强度为4000Gs。其中，步骤三中上清液冷冻干燥前经过离子交换柱3次。其中，在步骤二前还包括往虫浆加入体积比为1∶1乙酸乙酯进行脱脂，通过减压浓缩脱脂，同时回收乙酸乙酯。对比例1与实施例1相同，缺少步骤二。对比例2与实施例2相同，缺少将方格星虫采用浓度为80％质量分数的氯化钠溶液浸泡2小时后，采用清水漂洗3次这个步骤。对比例3与实施例2相同，缺少了步骤三中上清液冷冻干燥前经过离子交换柱2次和在步骤二前往虫浆加入体积比为1∶1乙酸乙酯进行脱脂，通过减压浓缩脱脂，同时回收乙酸乙酯。采用紫外吸收法测试蛋白质含量，称量沙虫去沙后重量M，再称量实施例1-3和对比例1-3得到产品重量M1，再测试实施例1-3和对比例1-3得到产品中的蛋白含量M2，计算蛋白质提取率＝M1/M*100％和蛋白质纯度＝M2/M1*100％，结果如下表：实施例1实施例2实施例3对比例1对比例2对比例3提取率(％)8.210.29.85.856.47.2纯度(％)78.286.988.270.271.169.5由此看出本发明的蛋白质提取率和纯度显著增高。尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。当前第1页1 2 3