一种保护和稳定游离RNA的采血管的制作方法

本发明涉及一种保护和稳定游离RNA的采血管。

背景技术：

游离RNA是指存在于血清、血浆、肺泡灌洗液、尿液、胸腹水等体液中的细胞外游离RNA。

随着诊断技术的不停发展，游离RNA的作用越来越大。

有研究发现，在肺癌、乳腺癌、黑色素瘤等患者的肿瘤相关基因的表达与体液中游离肿瘤相关性基因RNA的表达密切相关，游离RNA可以作为肿瘤标志物，对鉴别良恶性病变均有较好的特异性和敏感性。

在无创性产前诊断中，游离RNA也具有无可替代的作用。游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘，且稳定存在于母体血循环中，易于检测。虽获得胎儿遗传信息是可以通过获取胎儿细胞来进行，但若用如羊膜腔穿刺术和绒毛取样等传统产前诊断获得胎儿细胞的有创性操作方式，有约1%的流产风险，这大大的狭窄了诊断范围。而利用母血中游离胎儿细胞进行产前诊断，虽能够达到无创性特点，但其操作繁琐，涉及成本较高的细胞富集过程，无法普及于临床。但，利用母体的游离RNA进行检测，既能达到无创性的效果，也无需过于复杂的过程 ，易于临床普及，有很大的前景。

但是，人的血液中含有大量的RNA酶，游离RNA非常容易被RNA酶降解，而且血液中的游离RNA浓度非常低。在临床上，大多数是利用采血管采集人的血液。

而目前，市面上存在着各种各样的采血管，这些采血管大多数都只是起到防止血液凝固的作用，而没有起到保护游离RNA的作用。而且在临床过程中，由于条件或时间的限制，常常无法在得到血液后第一时间就进行游离RNA的提取。细胞破裂，大量的RNA酶，在短短的几个小时内就将大部分的游离RNA降解了，对后续实验造成极大的障碍，实验结果容易产生假阴性，从而无法为临床提供有价值的信息。

因此，一种可以保护和稳定游离RNA的采血管是很有必要的。

技术实现要素：

本发明的目的在于制备一种保护和稳定游离RNA的采血管，该采血管不仅能防止血液凝固，而且能够保护和稳定、收集其中游离的RNA。该采血管是由试管、密封胶塞和保护剂组成的。将血液采集到管中后，上下颠倒10次充分混合均匀。在室温下，血液中的游离RNA可保存3天，-20℃至-80℃可长期保存。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种保护和稳定游离RNA的采血管，其特征在于，所述的试管是由疏水性质的聚对苯二甲酸醇酯材质制造而成，所述的密封胶塞是由丁基橡胶材质制造而成。

一种保护和稳定游离RNA的采血管，其特征在于，所述保护剂是由EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷复合物、异硫氰酸胍、磁珠按照一定的比例溶解于DEPC水配制而成，其中各组分在所述溶液中的浓度分别为：EDTA-3K（20g-80g/L）、IDU（250-700g/L）、bestain（0.06-0.38g/L）、glycine（15-68g/L）、AEBSF（0.01-0.34g/L）、核糖核苷复合物（0.2ml-1ml/L）、异硫氰酸胍（30-100g/L）、磁珠（0.5-4mg/ml）。

作为优选，本发明所述的血液游离RNA保护剂的EDTA-3K、IDU、bestain、glycine、AEBSF、核糖核苷复合物、异硫氰酸胍、磁珠的浓度分别为40g/L、500g/L、0.2g/L、35g/L、0.162g/L、0.7ml/L、60g/L、1mg/ml。

附图说明

图1是全血样本于本发明所述的一种保护和稳定游离RNA的采血管中分别保存0、1、2、3天后进行核酸提取，提取得到的核酸进行β--catenin mRNA实时荧光PCR的检测结果。

图2是全血于常规EDTA-Na₂采血管中分别保存0、1、2、3天后进行核酸提取，提取得到的核酸进行β--catenin mRNA实时荧光PCR的检测结果。

具体实施方法

以下实施案例仅用于解释本发明，而不用于限制本发明。

实例：

用本发明采血管和常规EDTA-Na₂采血管同时随机抽取血样，每个血样分别抽取4管，常温放置0天、1天、2天、3天后进行核酸提取（Qiagen公司的RNeasy Mini Kit (50) -货号74104试剂盒），以提取的核酸为样本进行人β--catenin mRNA基因的实时荧光PCR检测。

检测结果：

置于常规EDTA-Na₂采血管和本发明所述的保护游离RNA的采血管中的全血样本，在常温放置不同时间后，分别进行核酸提取，提取的核酸进行人β--catenin mRNA基因的实时荧光PCR检测，其检测结果的Ct值如表1。

表1

由表1可知，本发明所述的保护游离RNA的采血管能够在3天内有效地保护游离RNA，只有极其轻微的降解；而常规EDTA-Na₂采血管对RNA的稳定性维持时间不到1天且降解情况比较严重。

图1~图2为表1对应的人β--catenin mRNA基因的实时荧光PCR检测结果图，其中图1为全血置于本文所述的保护游离核酸RNA的采血管中保存不同时间后进行核酸提取，提取得到的核酸进行β--catenin mRNA基因实时荧光PCR的检测结果图，由图可知，在0~3天的检测时间内，所有检测样本都被正确检出，且稳定性良好，游离RNA得到了有效的保护；图2为全血置于常规EDTA-Na₂采血管中保存不同时间后进行核酸提取，提取得到的核酸进行β--catenin mRNA基因实时荧光PCR的检测结果图，检测结果显示，常规EDTA-Na₂采血管中的游离RNA连1天的稳定性都不能维持，降解情况十分严重。

本发明所述保护游离RNA的采血管是一种能够高效保护游离RNA的采血管。