本发明属于医药技术领域，具体涉及一种黄酮苷类化合物及其制备方法和应用。
背景技术：
心脑血管疾病是心脏血管和脑血管疾病的统称，泛指由于高脂血症、血液粘稠、动脉粥样硬化、高血压等导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。心脑血管疾病患病率高、致残率高、死亡率高，已经成为全世界范围内严重威胁人类健康的头号杀手。随着经济发展，人们生活水平逐步提高，生活节奏不断加快，使心脑血管疾病的发病率不断攀升，而预防和治疗心脑血管疾病的药物需求也随之增加，在国际药品市场上占有举足轻重的地位，因此研究和开发心脑血管疾病用药成为当今最热门的研究领域之一。
银杏叶为银杏科银杏属植物银杏ginkgobilobal.的干燥叶，主产于江苏、广西、山东等地，为我国特有珍贵树种。银杏叶性甘、苦、涩、平，归心、肺经。具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂等功效。现代药理研究表明，银杏叶具有降低胆固醇、扩张冠状血管、松弛支气管平滑肌等作用，常用于预防和治疗脑血管供血不足、心肌缺血等心脑血管疾病，实验发现其主要活性成分为黄酮类和萜内酯类化合物。
目前从银杏叶中分离得到的化学成分主要有黄酮类、萜内酯类、多糖类、聚戊烯醇类化合物，以及有机酸、烷基酚酸类和挥发油等。其中黄酮类化合物含量较高，主要有黄酮醇苷、双黄酮和儿茶素等物质，具有明显的抗氧化、抗炎、清除自由基、调节内分泌、抗肿瘤以及调节免疫系统等多种生理活性。本专利公开的新化合物及其抗心脑血管疾病相关的药理活性作用研究还未见诸报道。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种黄酮苷类化合物及其制备方法和应用，本发明提供的具有式i结构的黄酮类化合物具有抗心脑血管疾病相关的药理活性作用，并且具有一定的抗肿瘤活性。
本发明提供了一种黄酮类化合物，具有式i结构，
本发明提供了一种上述黄酮类化合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：对银杏叶进行提取，得到清膏；
步骤2：将得到的清膏依次通过大孔吸附树脂柱色谱、反相c18柱色谱、凝胶柱色谱和制备型液相色谱分离得到式i所示化合物。
优选的，所述大孔吸附树脂柱色谱中的大孔吸附树脂选自d101型大孔吸附树脂、hp-20型大孔吸附树脂、hpd-450型大孔吸附树脂、hpd-950型大孔吸附树脂和ab-8型大孔吸附树脂中的一种或几种；所述大孔吸附树脂柱色谱中色谱分离所用洗脱液为乙醇-水溶液。
优选的，所述通过反相柱c18色谱为动态轴向压缩色谱、高效液相色谱或中低压制备色谱；所用洗脱液为甲醇-水溶液或者乙腈-水溶液。
优选的，所述通过凝胶柱色谱中的凝胶为sephadexlh-20、sephadexg15或sephadexg50；所用洗脱液为甲醇。
优选的，所述通过制备型液相色谱分离中所用流动相为甲醇-水溶液或者乙腈-水溶液。
优选的，所述步骤1具体为：
将银杏叶与乙醇-水溶液混合，回流提取，过滤，将滤液浓缩得到清膏。
本发明还提供了一种式i所示的化合物在制备抗心脑血管疾病药物或抗肿瘤药物中的应用，
本发明还提供了一种中药制剂，由权利要求1所述的具有式ⅰ结构的化合物或如权利要求2至7任一项所述的制备方法制得的具有式ⅰ结构的化合物与药学上可接受的载体制成，
与现有技术相比，本发明提供了一种具有式ⅰ所示结构的化合物，该化合物能显著降低脑组织内ldh和mda含量，并提高sod含量，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用。同时该化合物能抑制肿瘤细胞生长，具有一定的抗肿瘤活性。
附图说明
图1为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的esi-ms谱图；
图2为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的1h-nmr谱图；
图3为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的13c-nmr谱图；
图4为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的hsqc谱图；
图5为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的1h-1hcosy谱图；
图6为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的hmbc谱图；
图7为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的主要hmbc相关。
具体实施方式
本发明提供了一种本发明提供了一种化合物，具有式i结构，
本发明提供了一种式i所示化合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：对银杏叶进行提取，得到清膏；
步骤2：将得到的清膏进行分离，得到式i所示化合物。
按照本发明，本发明对银杏叶进行提取，得到清膏；本发明对提取的方法没有特殊限制，本领域公知的用于溶剂提取中草药成分的方法均可，本发明优选采用乙醇提取；
具体的，本发明将银杏叶与乙醇-水溶液混合，回流提取，过滤，将滤液浓缩得到清膏；其中，银杏叶与乙醇的重量比为1：(6～10)，所述提取的次数为1～3次，优选为2次；所述提取的时间优选为0.5～3小时，更优选为1.5～2.5小时；所述乙醇-水溶液中乙醇的体积百分含量优选50～95％，更优选为60％。
接着，本发明将得到的清膏进行分离，得到式i所示化合物；所述分离步骤优选为：将得到的清膏依次通过大孔吸附树脂柱色谱、反相c18柱色谱、凝胶柱色谱和制备型液相色谱分离得到式i所示化合物；即：
将得到的清膏通过大孔吸附树脂柱色谱，所述洗脱液为不同浓度的乙醇-水溶液，得到大孔吸附树脂柱分离后的粗品；
将大孔吸附树脂柱分离后的粗品通过反相柱色谱分离，所述洗脱液为乙腈-水或甲醇-水溶液，得到反相柱色谱分离后的粗品；
将反相柱色谱分离后得到的粗品通过凝胶柱色谱纯化，所述洗脱液为甲醇，得到凝胶柱色谱纯化后的粗品；
将凝胶柱色谱纯化后的粗品通过制备型液相色谱，得到式i所示化合物。
具体的，本发明中，将得到的清膏通过大孔吸附树脂柱色谱分离，得到大孔树脂分离后的粗品；其中，所述大孔吸附树脂优选为d101型大孔吸附树脂、hp-20型大孔吸附树脂、hpd-450型大孔吸附树脂、hpd-950型大孔吸附树脂和ab-8型大孔吸附树脂中的一种或几种；所述洗脱液优选为乙醇-水溶液；且为了充分的分离杂质与所需化合物，本发明选用梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱液优选为乙醇与水的体积比为(x)：(100-x)的溶液，其中，0≤x≤95，更优选为依次采用水、体积浓度为(25～35)％乙醇-水溶液进行洗脱，收集体积浓度为(25～35)％乙醇-水溶液洗脱部位，得到大孔树脂分离后的粗品。
本发明中，将大孔树脂分离后的粗品通过反相c18柱色谱分离，得到反相c18柱色谱分离后的粗品；其中，所用仪器优选为动态轴向压缩色谱；所述洗脱液优选为乙腈-水溶液，且为了能够更好分离杂质和所需化合物，本发明选用梯度洗脱，所述梯度洗脱流程序为0～10min，用体积浓度为10％～25％的乙腈-水溶液洗脱；10～70min，用体积浓度为25％～75％的乙腈-水溶液洗脱；70～80min，用体积浓度为75％～100％乙腈-水溶液洗脱，收集35～45min洗脱部位，得反相c18柱色谱分离后的粗品。
本发明中，将反相c18柱色谱分离后的粗品通过凝胶柱色谱分离，得到凝胶分离后的粗品；所述凝胶柱色谱分离用凝胶优选为sephadexlh-20；所述洗脱液优选为甲醇。
本发明中，将凝胶分离后的粗品通过制备型液相色谱分离，得到式i所示化合物；其中，所用流动相为体积浓度为(25～45)％乙腈-水溶液，优选为体积浓度为(30～40)％乙腈-水溶液；所述流速为3～100ml/min，优选为5～35ml/min；检测波长为340nm，得到式i所示化合物。
本发明所述的具有式i结构的黄酮类化合物为黄色无定形粉末，盐酸-镁粉反应呈阳性，molish反应呈阳性。高分辨质谱hr-esi-ms给出m/z755.1897[m-h]-(计算值为755.1902)，m/z779.1835[m+na]+(计算值为779.1875)，化合物分子量为756，结合元素分析及13c-nmr谱和dept谱推断该化合物分子式为c36h36o18。
本发明对具有式i结构的化合物进行了结构鉴定，最终确定本发明化合物的结构为keampferol-3-o-α-(6″′-p-caffeoylglucosyl-β-1,2-rhamnoside)，中文名为山柰酚-3-o-α-(6″′-p-咖啡酰基葡萄糖-β-1,2-鼠李糖苷)，结构如式i所示，为一个新的黄酮苷类化合物。所有的碳氢信号归属见表1，表1为式i所示化合物的各个碳和氢的归属。
表1化合物的核磁数据(dmso-d6,1h-nmr400mhz,13c-nmr100mhz)
本发明还提供一种式i所示的化合物在制备抗心脑血管疾病药物或抗肿瘤药物中的应用，
本发明还提供了一种中药制剂，由所述的具有式ⅰ结构的化合物或如所述的制备方法制得的具有式ⅰ结构的化合物与药学上可接受的载体制成，
在本发明中，所述药学上可接受的载体可根据药剂学领域的常用辅料，根据剂型和实际情况进行恰当选择，例如常用的辅料有淀粉、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁、淀粉浆、蔗糖、糊精、羧甲基淀粉钠、滑石粉、聚山梨酯、聚乙二醇、注射用大豆磷脂和注射用甘油等；利用本发明得到的提取物制备所需药物的各种剂型时，可以按照药剂学领域的常规生产方法制备。如将该提取物与一种或多种载体混合，然后制成相应的剂型。作为优选，所述中药制剂的剂型包括注射剂、片剂、栓剂、软膏剂、凝胶剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂和合剂。
与现有技术相比，本发明提供了一种式ⅰ所示结构的化合物，该化合物能显著降低脑组织内ldh和mda含量，并提高sod含量，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用。同时该化合物能抑制肿瘤细胞生长，具有一定的抗肿瘤活性。
本发明通过对银杏叶进行提取，得到清膏；然后将得到的清膏进行分离，选择特定出峰时间的化合物，即得到式i所示化合物，且通过动物实验发现，本发明化合物能显著降低脑组织内ldh和mda含量，并提高sod含量，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用。同时该化合物能抑制肿瘤细胞生长，具有一定的抗肿瘤活性。
下面将结合本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：式ⅰ所示结构的化合物的制备
1)干燥的银杏叶10kg，粉碎过筛后加入10倍量的体积浓度为60％乙醇水溶液，提取3次，每次1.5h，过滤，将滤液浓缩、回收乙醇得到清膏；
2)取步骤1)的清膏加入纯化水使溶解，室温静置，取上清液经hp-20大孔吸附树脂柱分离，依次以纯化水、体积浓度为35％乙醇-水溶液进行洗脱，每种洗脱液洗脱4个柱体积，收集35％乙醇-水溶液洗脱部位；
3)取步骤2)的35％乙醇-水溶液洗脱部位，经反相c18动态轴向压缩柱色谱分离，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：0～10min，用体积浓度为10％～25％乙腈-水溶液进行洗脱；10～70min，用体积浓度为25％～75％乙腈-水溶液进行洗脱；70～80min，用体积浓度为75％～100％乙腈-水溶液进行洗脱，流速100ml/min，收集35～45min洗脱液；
4)取步骤3)的洗脱液，经sephadexlh-20柱色谱分离，甲醇洗脱，进行纯化。
5)取步骤4)纯化后的样品，经制备型hplc分离，以体积浓度为25％乙腈-水溶液为流动相，检测波长为340nm，流速15ml/min，分离所得溶液干燥，得到本发明所述的式ⅰ结构的化合物10mg，纯度为98.5％。
实施例1得到的化合物为黄色无定型粉末。
对上述化合物进行理化和结构分析，盐酸-镁粉反应呈阳性，molish反应呈阳性，提示其可能为黄酮苷类化合物。高分辨质谱hr-esi-ms给出m/z755.1897[m-h]-(计算值为755.1902)，m/z779.1835[m+na]+(计算值为779.1875)，提示化合物分子量为756，结合元素分析及13c-nmr谱和dept谱推断该化合物分子式为c36h36o18。
对实施例1得到的化合物进行结构鉴定，结果见图1～7，图1为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的esi-ms谱图，图2为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的1h-nmr谱图，图3为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的13c-nmr谱图，图4为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的hsqc谱图，图5为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的1h-1hcosy谱图，图6为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的hmbc谱图，图7为本发明实施例1制得的式i结构的化合物的主要hmbc相关。
通过对图1～图7进行分析，本化合物的1h-nmr(dmso-d6,400mhz)谱(见图2)，给出1组aa′bb′耦合系统芳香质子信号δ7.75(2h,d,j＝8.6hz,h-2′,6′)，6.93(2h,d,j＝8.6hz,h-3′,5′)；1组abx耦合系统芳香质子信号δ6.96(1h,d,j＝1.7hz,h-5″″)，6.69(1h,d,j＝8.1hz,h-8″″)，6.87(1h,dd,j＝8.1,1.7hz,h-9″″)；1组反式双键信号δ6.11(1h,d,j＝15.9hz,h-2″″)，7.39(1h,d,j＝15.9hz,h-3″″)；2个单谱线信号δ6.19(1h,s,h-6)，6.37(1h,s,h-8)；结合13c-nmr谱数据推断该化合物含有1个葡萄糖和1个鼠李糖，δ4.33(1h,d,j＝7.8hz)，5.60(1h,s)分别为葡萄糖和鼠李糖端基质子信号，高场δ0.89(1h,d,j＝7.8hz)为鼠李糖甲基质子信号。
13c-nmr(dmso-d6,400mhz)谱中(见图3)，共给出36个碳信号，黄酮母核碳信号15个，其中δ178.2为黄酮母核4位的特征碳信号；高场区的δ17.9为鼠李糖甲基碳信号，δ63.4为葡萄糖6位碳信号，δ101.1和106.5为2个糖端基碳信号，δ145.6和114.1为一组烯碳信号，结合氢谱推测可能含有一个苯丙酰基片段。
结合hsqc图谱(见图4)以及hmbc图谱(见图6)对具有相关关系的碳信号与氢信号进行归属，其中鼠李糖端基质子δ5.60与黄酮母核的3位碳δ134.8远程相关，表明鼠李糖与苷元3位相连；葡萄糖端基质子δ4.33与鼠李糖2位碳δ82.0远程相关，表明葡萄糖1位与鼠李糖2位相连；烯质子7.39(1h,d,j＝15.9hz,h-3″″)与abx系统碳信号δ115.5和δ11.4以及羰基碳信号δ166.8同时相关，推测苯丙酰基为咖啡酰基；葡萄糖6位质子信号与δ166.8的咖啡酰基上羰基碳信号远程相关，同时葡萄糖6位碳信号较正常向低场位移约2.2个单位，证实葡萄糖6位与咖啡酰基片段相连。结合1d-nmr和2d-nmr给出的数据，并与已知化合物相似部分碳谱数据对比，确定了黄酮苷元、咖啡酰基、鼠李糖和葡萄糖的连接顺序。数据见表1。
综合以上数据分析，最终确定本发明化合物的结构为keampferol-3-o-α-(6″′-p-caffeoylglucosyl-β-1,2-rhamnoside)，中文名为山柰酚-3-o-α-(6″′-p-咖啡酰基葡萄糖-β-1,2-鼠李糖苷)，结构如式i所示，为一个新的黄酮苷类化合物。所有的碳氢信号归属见表1，表1为式i所示化合物的各个碳和氢的归属。
表1化合物的核磁数据(dmso-d6,1h-nmr400mhz,13c-nmr100mhz)
通过对检测结果分析可知，本发明得到的化合物的结构为式ⅰ所示的化合物。
实施例2：式ⅰ所示结构的化合物的制备
1)干燥的银杏叶10kg，粉碎过筛后加入6倍量的体积浓度为70％乙醇水溶液，提取2次，每次2h，过滤，将滤液浓缩、回收乙醇得到清膏；
2)取步骤1)的清膏加入纯化水使溶解，室温静置，取上清液经d101大孔吸附树脂柱分离，依次以纯化水、体积浓度为25％乙醇-水溶液进行洗脱，每种洗脱液洗脱4个柱体积，收集体积浓度为25％乙醇-水溶液洗脱部位；
3)取步骤2)的25％乙醇-水溶液洗脱部位，经反相c18动态轴向压缩柱色谱分离，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：0～10min，用体积浓度为10％～25％乙腈-水溶液进行洗脱；10～70min，用体积浓度为25％～75％乙腈-水溶液进行洗脱；70～80min，用体积浓度为75％～100％乙腈-水溶液进行洗脱，流速100ml/min，收集35～45min洗脱液；
4)取步骤3)的洗脱液，经sephadexlh-20柱色谱分离，甲醇洗脱，进行纯化。
5)取步骤4)纯化后的样品，经制备型hplc分离，以体积浓度为40％乙腈-水溶液为流动相，检测波长为340nm，流速15ml/min，分离所得溶液干燥，得到本发明所述的式ⅰ结构的化合物9mg，纯度为98.6％。
按照实施例1提供的理化和结构分析方法对化合物进行分析可知，实施例2得到的化合物的结构为式ⅰ所示的化合物。
实施例3：式ⅰ所示结构的化合物的制备
1)干燥的银杏叶10kg，粉碎过筛后加入8倍量的70％乙醇水溶液，提取2次，每次2h，过滤，将滤液浓缩、回收乙醇得到清膏；
2)取步骤1)的清膏加入纯化水使溶解，室温静置，取上清液经d101大孔吸附树脂柱分离，依次以纯化水、25％乙醇-水溶液进行洗脱，每种洗脱液洗脱4个柱体积，收集25％乙醇-水溶液洗脱部位；
3)取步骤2)的25％乙醇-水溶液洗脱部位，经反相c18动态轴向压缩柱色谱分离，采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：0～10min，用体积浓度为10％～25％乙腈-水溶液进行洗脱；10～70min，用体积浓度为25％～75％乙腈-水溶液进行洗脱；70～80min，用体积浓度为75％～100％乙腈-水溶液进行洗脱，流速100ml/min，收集35～45min洗脱液；
4)取步骤3)的洗脱液，经sephadexlh-20柱色谱分离，甲醇洗脱，进行纯化。
5)取步骤4)纯化后的样品，经制备型hplc分离，以体积浓度为30％乙腈-水溶液为流动相，检测波长为340nm，流速15ml/min，分离所得溶液干燥，得到本发明所述的式ⅰ结构的化合物9mg，纯度为98.5％。
按照实施例1提供的理化和结构分析方法对化合物进行分析可知，实施例3得到的化合物的结构为式ⅰ所示的化合物。
实施例4：本发明化合物对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
1.材料
1.1药物式i所示化合物；
1.2阳性对照药尼莫地平注射液；
1.3动物sd大鼠108只，雄性，体重180～200g，spf级，北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：(京)2012-0001。
1.4仪器与试剂钙流工作站(md公司)；sigma2-16pk离心机(sigma公司)；mda检测试剂盒、ldh检测试剂盒、总sod活性检测试剂盒(碧云天生物技术研究所)；乙醚(国药集团化学试剂有限公司)；多聚甲醛，ttc(amresco)。
2.实验方法与步骤
2.1分组与给药将108只sd大鼠随机分为6组，每组18只，分别为假手术组(尾静脉注射生理盐水)、模型组(腹腔注射生理盐水)、式i化合物高、中、低3个剂量组(灌胃给药5、2.5、1.25mg·kg-1·d-1)和尼莫地平组(尾静脉注射5ml·kg-1·d-1，相当于尼莫地平1mg·kg-1·d-1)。各组每天给药1次，于手术前连续给药7d。
2.2脑缺血再灌注模型制备采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(mcao)模型：10％水合氯醛(3ml·kg-1·d-1)腹腔给药麻醉大鼠后，分离右颈总动脉并剪一小口，将长50mm、直径0.2mm、顶端烫制成光滑球状的尼龙线作为栓子插入，以颈总动脉分叉处计算进线深度为(18.5±0.5)mm，至大脑中动脉起始部以完全阻断供血。缺血2h后，拔线栓，再灌注24h。假手术组只进行麻醉和血管分离术，不结扎血管及导入尼龙线。以上过程均在室温恒定(24～25℃)情况下进行。
2.3脑组织中sod、mda、ldh检测大鼠于缺血再灌注24h后，乙醚麻醉后断头取脑，全脑称重后，用冰冷的生理盐水冲洗，放入匀浆管中，加入适量4℃生理盐水进行匀浆，研磨制成10％的组织匀浆。以3000r·min-1离心10min，取上清液，分为8份。考马斯亮蓝法测定总蛋白，按照试剂盒说明分别对脑组织匀浆中的sod、mda和ldh进行测定。
3.实验结果
实验结果表明，大鼠脑缺血2h再灌注24h后，引起脑组织ldh和mda水平的显著升高，sod含量的显著降低(p<0.01)。尼莫地平注射液组、式i化合物高、中剂量组能显著降低脑组织内ldh和mda的量，增加sod的含量，差异有统计学意义(p<0.01，p<0.05)，低剂量组无显著性差异(p＞0.05)。数据结果如表2。
表2式i化合物对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织sod、mda和ldh的影响
与假手术组比较，##p<0.01，与模型组比较，**p<0.01，*p<0.05
4.结论
本发明化合物能显著降低脑组织内ldh和mda含量，并提高sod含量，对大鼠脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用。
实施例5：本发明化合物对肿瘤细胞生长的影响
1.材料
1.1药物式i所示化合物；
1.2阳性对照药环磷酰胺；
1.3细胞
人肝癌细胞hepg2(中国科学院典型培养物保藏中心上海细胞库)。
1.4仪器与试剂
超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)，二氧化碳培养箱(thermoscientific)，倒置显微镜(olypus)，高压蒸汽灭菌锅(boxun)，离心机(北京众益中和生物技术有限公司)，酶标仪(biotek)，电子天平(瑞士梅特勒)；rpmi-1640培养基、胎牛血清(gibco)，dmso(sigma)，胰蛋白酶(amresco)，mtt(sigma)，环磷酰胺(浙江海正药业股份有限公司)。
2.实验方法与步骤
细胞培养：将人肝癌细胞hepg2于37℃，5％co2细胞培养箱中进行传代培养，将传代后的细胞以1×105个/ml的浓度接种于96孔细胞培养板，每孔100μl，于37℃，5％co2细胞培养箱中培养24小时。24h后，取出96孔板，吸弃上清液，按照试验要求随机分为空白组，阳性对照组和高、中、低不同浓度给药组，每组设5个复孔。
空白组给予rpmi1640培养液100μl；阳性药组给予浓度为20μmol/l的环磷酰胺100μl；高、中、低剂量组分别给予浓度为50、25、12.5μmol/l的式ⅰ化合物100μl；于37℃，5％co2细胞培养箱中继续培养24h。24h后吸弃上清，分别加rpmi1640培养液100μl和mtt溶液20μl，混合均匀后继续培养4h。于490nm下测定吸光度(a)值。根据公式计算抑制率。
抑制率(％)＝(a空白-a给药)/a空白×100％
3.实验结果
实验结果表明，不同浓度的给药组可一定程度上抑制人肝癌细胞hepg2的生长，具有一定的抗肿瘤活性。数据结果见表3。
表3式i化合物对人肝癌细胞hepg2的抑制作用
与空白组比较，**p<0.01，*p<0.05
4.结论
本发明化合物可一定程度上抑制人肝癌细胞hepg2的生长，并随着药物浓度的上升，抑制作用增强，具有一定的抗肿瘤活性。
实施例6：式i所示结构的化合物制备颗粒剂药物
将350g式i所示结构的化合物和1000g蔗糖及500g糊精混合，按照常规方法制成1000包式i所示结构的化合物颗粒剂。每日3次，每次1粒。
实施例7：式i所示结构的化合物制备片剂药物
将350g式i所示结构的化合物和50g淀粉、7.5g羧甲基淀粉钠、0.8g滑石粉、50g糊精、0.8g硬脂酸镁及适量10％淀粉浆适混合，按照常规方法制成式i所示结构的化合物片剂1000片。每日3次，每次1片。
实施例8：式i所示结构的化合物制备丸剂药物
将350g式i所示结构的化合物和12g聚乙二醇-6000、80.5g聚山梨酯-80、适量液状石蜡混合，按照常规方法制成式i所示结构的化合物丸剂1000粒。每日3次，每次1粒。
实施例9：式i所示结构的化合物制备注射剂药物
将200g式i所示结构的化合物和15g注射用大豆磷脂、25g注射用甘油，注射用水定容至1000ml，按照常规方法制成式i所示结构的化合物注射剂1000支。每日1次，每次1支，至少采用250ml5％葡萄糖注射液稀释后静脉滴注。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。