蛹虫草菌丝体生产小分子抗氧化肽技术的制作方法

文档序号:15457491发布日期:2018-09-15 01:31

本发明是一种生物化学工程技术,涉及从蛹虫草菌丝体转化提取小分子抗氧化肽的分离,酶解和纯化工艺技术。



背景技术:

小分子抗氧化肽工厂化生产提取技术在我国已实用多年,传统的小分子抗氧化肽都是以大豆为主要原料,这种方法除浪费食品原料外,产品本身抗氧化,抗衰老的生物功能并不显著,这使得小分子抗氧化肽对人类健康水准的提高作用受到了一定的局限性,人们一直希望有一个蛹虫草菌丝体生产小分子抗氧化肽的技术问世,这是长期以来一直无法解决的问题。

本发明提供的蛹虫草菌丝体生产小分子抗氧化肽技术,是以蛹虫草生产过程中菌丝体为原料,以超声技术,多种蛋白酶复配的可控酶解技术,并集成超滤膜分离技术逐级分离制备了具有生物活性的小分子抗氧化肽,经紫外分光度计检测含量达14%。生物活性检测表明:其抗氧化能力(谷胱甘肽法),谷胱甘肽的羟自由基清除率138.47%,而这种小分子抗氧化肽为1453.33%,在线粒体褐质脂生成量指标检测中,随着小分子抗氧肽的浓度增加,褐质脂的生成量逐渐减少,当小分子抗氧化肽的量为>25mg时,抑制率达到原来的63.12%,具有理想的抗氧化及抗衰老的生物功能。



技术实现要素:

本发明是设计者将自己研制成功的从蛹虫草菌丝体转化提取小分子抗氧化肽,将鲜虫草菌丝体置40℃烘干,粉碎至80目,用去离子水浸透干粉并盖过固体表面,置室温水浴浸泡1h,再超声波破碎,将上述溶液在50-100w条件下超声破碎10-20s间隔10-20s反复3-5次,用去离子水定容,比例:50/1000(g/ml),制成小分子抗氧化肽原料液1,将原料液加热至45-60℃,恒温后间隔30min,依次分别按3%和5%的比例加纤维素酶和木瓜蛋白酶酶解3h,升温至100℃灭酶20min,冷却后用4层纱布过滤,用分子量10万-5万的超滤膜超滤,再用分子量1万-0.3万的超滤膜超滤,获得淡澄黄色液体1升,再建立Matrex Cellufine Sulfate亲和层析与Sepharose 4FF凝胶过滤的多柱串联层析纯化方法。过滤膜除菌后装瓶密封制成精制液2,100g原料获得的小分子抗氧化肽约6mg/ml精制液,分子量600~800。抗氧化指标在同等剂量情况下,谷胱甘肽的羟自由基清除率138.47%,而小分子抗氧化肽为1334.33%,在线粒体褐质脂生成量指标检测中,小分子抗氧化肽的量为>25mg时,抑制率达到原来的63.12%,即为分子量600~800的小分子抗氧化肽3等方法应于蛹虫草菌丝体生产小分子抗氧肽技术的生产工艺之中,本发明如能得到广泛应用,必将产生较大的经济效益及社会效益。

附图说明:

附图是蛹虫草丝体生产小分子抗氧化肽技术生产作业流程示意图,图中1为从蛹虫草菌丝体转化提取小分子抗氧化肽,将鲜虫草菌丝体置40℃烘干,粉碎至80目,用去离子水浸透干粉并盖过固体表面,置室温水溶浸泡1h,再超声波破碎,将上述溶液在50-100w条件下超声破碎10-20s间隔10-20s反复3-5次,用去离子水定容,比例:50/1000(g/ml),制成小分子抗氧化肽原料液,2为将原料液加热至45-60℃,恒温后间隔30min,依次分别按3%和5%的比例加纤维素酶和木瓜蛋白酶酶解3h,升温至100℃灭酶20min,冷却后用4层纱布过滤,用分子量10万-5万的超滤膜超滤,再用分子量1万-0.3万的超滤膜超滤,获得淡澄黄色液体1升,再建立Matrex Cellufine Sulfate亲和层析与Sepharose 4FF凝胶过滤的多柱串联层析纯化方法。过滤膜除菌后装瓶密封制成精制液,3为100g原料获得的小分子抗氧化肽约6mg/ml精制液,分子量600~800。抗氧化指标在同等剂量情况下,谷胱甘肽的羟自由基清除率138.47%,而小分子抗氧化肽为1334.33%,在线粒体褐质脂生成量指标检测中,小分子抗氧化肽的量为>25mg时,抑制率达到原来的63.12%,即为分子量600~800的小分子抗氧化肽。

具体实施方式:

本发明提供的蛹虫草菌丝体生产小分子抗氧化肽技术,生产实施如附图所示,从蛹虫草菌丝体转化提取小分子抗氧化肽,将鲜虫草菌丝体置40℃烘干,粉碎至80目,用去离子水浸透干粉并盖过固体表面,置室温水溶浸泡1h,再超声波破碎,将上述溶液在50-100w条件下超声破碎10-20s间隔10-20s反复3-5次,用去离子水定容,比例:50/1000(g/ml),制成小分子抗氧化肽原料液1,将原料液加热至45-60℃,恒温后间隔30min,依次分制按3%和5%的比例加纤维素酶和木瓜蛋白酶酶解3h,升温至100℃灭酶20min,冷却后用4层纱布过滤,用分子量10万-5万的超滤膜超滤,再用分子量1万-0.3万的超滤膜超滤,获得淡澄黄色液体1升,再建立Matrex Cellufine Sulfate亲和层析与Sepharose 4FF凝胶过滤的多柱串联层析纯化方法。过滤膜除菌后装瓶密封制成精制液2,100g原料获得的小分子抗氧化肽约6mg/ml精制液,分子量600~800。抗氧化指标在同等剂量情况下,谷胱甘肽的羟自由基清除率138.47%,而小分子抗氧化肽为1334.33%,在线粒体褐质脂生成量指标检测中,小分子抗氧化肽的量为>25mg时,抑制率达到原来的63.12%,即为分子量600~800的小分子抗氧化肽3。

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