一种禽白血病病毒PCR检测引物组及包括该检测引物组的试剂盒的制作方法

文档序号:12698093阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种禽白血病病毒PCR检测引物组,其特征在于包括:引物P1、P2、P3和P4;其中P1为上游通用检测引物;P2为检测ALV-A亚型病毒的下游引物;P3为检测ALV-B亚型病毒的下游引物;P4为检测ALV-J亚型病毒的下游引物。

2.如权利要求1所述的禽白血病病毒PCR检测引物组,其特征在于,引物P1、P2、P3和P4的核苷酸序列为:

P1:GGATGAGGTGACTAAGAAAG;

P2:GCATTACCACAGCGGTACTG;

P3:GTAAACGCCCGCCGGACT;

P4:CGAACCAAAGGTAACACACG。

3.如权利要求1所述的禽白血病病毒PCR检测引物组,其特征在于,应用PCR检测引物组进行扩增的条件为:

采用20μL的反应体系,包括:PCR-Mix 10μL;ddH2O 7μL;浓度10pmol/μL的上、下游引物各1μL;cDNA 1μL;

设置如下条件进行反应:预变性95℃,4min;再经95℃变性45s,53℃退火35s,72℃延伸1min,30个循环;最后72℃延伸10min。

4.一种诊断试剂盒,其特征在于,包括:如权利要求1-3任一所述的禽白血病病毒PCR检测引物组、ALV-A亚型病毒阳性对照质粒、ALV-B亚型病毒阳性对照质粒、ALV-J亚型病毒阳性对照质粒和阴性对照。

5.如权利要求4所述的诊断试剂盒,其特征在于,ALV-A亚型病毒阳性对照质粒通过以下制备方法获得:以ALV-A亚型病毒cDN A为模板,以P1和P2为引物进行PCR扩增,得到838bp的扩增产物,将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18-T载体,即得。

6.如权利要求4所述的诊断试剂盒,其特征在于,ALV-B亚型病毒阳性对照质粒通过以下制备方法获得:以ALV-B亚型病毒cDN A为模板,以P1和P3为引物进行PCR扩增,得到638bp的扩增产物,将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18-T载体,即得。

7.如权利要求4所述的诊断试剂盒,其特征在于,ALV-J亚型病毒阳性对照质粒通过以下制备方法获得:以ALV-J亚型病毒cDN A为模板,以P1和P4为引物进行PCR扩增,得到545bp的扩增产物,将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18-T载体,即得。

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