一种促进白腐真菌挂膜的培养基的制作方法

本发明公开了一种促进白腐真菌挂膜的培养基，属于废水生物处理领域。

背景技术：

在微生物的培养中人们常常采用固定化的培养方式，这是因为固定化培养能够促进微生物的生长和代谢。

白腐真菌的固定化培养有利于其活性的维持。saucedo等人（1988）在对gibberellafujikuroi菌丝的固定化研究中发现：固定化培养可以提高真菌生长的稳定性，延长其活性维持的时间；bottcher等（1988）和komel等（1985）的固定化真菌研究得出类似的结果。固定的白腐真菌还可以促进其对代谢酶等的合成，rogalski等（2006）将nematolomafrowardii固定于聚氨酯泡沫载体（polyurethanefoam）上获得2304nkat/l的mnp，比自由悬浮培养的mnp高出1.4倍。nakamura等（1999）的研究结果表明：采用聚氨酯泡沫载体的固定化培养获得高产的木质素降解酶（lip:300u/ml,mnp:250u/ml,andlac:50u/ml）远远高于非固定化培养的酶活（lip:22u/ml,mnp:8u/ml,andlac:1.8u/ml）。

但是，固定化的微生物常常遇到一些问题，如：生物膜脱落的问题，即随着生物膜的加厚，生物膜内部获得的营养物质和氧气逐步减少，造成生物膜的脱落。为了解决此问题，实验室前期发明了一种新型载体——脉管载体和生物转盘装置（专利号：zl201420249212.9）以期解决生物膜脱落的问题。但是脉管载体的挂膜难以实现，常规的挂膜常常出现菌丝在载体上造成不均匀挂膜。

技术实现要素：

本发明的目的在于解决脉管载体的挂膜问题，提供一种促进白腐真菌挂膜的培养基，所述培养基的成分及含量为：葡萄糖8~12g/l，红薯淀粉8-15g/l，维生素0.008-0.010g/l，吐温800.5~1.2ml/l，微量元素65~75ml/l，去离子水。

优选的，使用时先将红薯淀粉溶解在80~100℃的水中，避免淀粉糊化。

本发明所述的培养基用于脉管载体的挂膜。

本发明的有益效果为：与pda培养基相比，白腐真菌的pda培养基使菌丝在载体上成片状式生长，菌丝生长不够均匀，而本发明的生物膜是向外延伸，实现了脉管载体的均匀挂膜。

附图说明

图1为两种培养基的培养结果示意图。

图2为单一碳源培养基的培养结果示意图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容。

本发明实施例1~3中挂膜均在大试管（外直径：3cm；长：20cm）中完成，在实际操作过程中，试管是根据载体选择，也可以选择其他规格的试管进行实验。

实施例1

（1）培养基的配制

固定化培养白腐真菌的培养基，由葡萄糖10g/l，红薯淀粉15g/l，维生素0.008g/l，1ml/l吐温80，70ml/l微量元素和去离子水组成。

首先将15g红薯淀粉放到1l的锥形瓶中，加入500ml的去离子水，放到电炉上先进行热溶，在此过程中进行搅拌，使得淀粉尽量避免糊化；等待其冷却到室温，加入葡萄糖10g，维生素0.008g，1ml的吐温80，70ml的微量元素，加入去离子水定容至1l。

（2）脉管载体的挂膜

挂膜是在大试管（外直径：3cm；长：20cm）中完成，当培养基中的淀粉为红薯淀粉时，在大试管中加入上述液体培养基70ml，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（p.chrysosporium），每毫升接种10⁴个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120rpm的条件下，培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝向外延伸，载体自上而下菌丝长势均匀，如图1（b）所示。使用pda培养基培养4天的结果如图1（a）所示由图可以看出菌丝在载体上成片状式生长，菌丝生长不够均匀；使用单一碳源（淀粉或葡萄糖）培养基的培养结果如图2所示，图2（a）为淀粉培养基培养4天结果，图2（b）为葡萄糖培养基培养4天结果,由图可以看出使用单一碳源（淀粉或葡萄糖）培养基，菌丝生长不够均匀，且较为稀少。

脉管载体的挂膜（对比例）

挂膜是在大试管（外直径：3cm；长：20cm）中完成，当培养基中的淀粉换为玉米淀粉时，在大试管中加入此液体培养基70ml，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（p.chrysosporium），每毫升接种10⁴个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120rpm的条件下。培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝长势不均匀，且菌丝稀少。

脉管载体的挂膜（对比例）

挂膜是在大试管（外直径：3cm；长：20cm）中完成，当培养基中的淀粉换为小麦淀粉时，在大试管中加入pda液体培养基70ml，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（p.chrysosporium），每毫升接种10⁴个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120rpm的条件下。培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝长势不均匀，且菌丝稀少。

脉管载体的挂膜（对比例）

挂膜是在大试管（外直径：3cm；长：20cm）中完成，当培养基中无淀粉时，在大试管中加入pda液体培养基70ml，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（p.chrysosporium），每毫升接种10⁴个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120rpm的条件下，培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝成片状生长，长势不均匀。

实施例2

（1）培养基的配制

固定化培养白腐真菌的培养基，由葡萄糖8g/l，红薯淀粉10g/l，维生素0.009g/l，0.5ml/l吐温80，65ml/l微量元素和去离子水组成。

首先将10g红薯淀粉放到1l的锥形瓶中，加入500ml的去离子水，放到电炉上先进行热溶，在此过程中进行搅拌，使得淀粉尽量避免糊化；等待其冷却到室温，加入葡萄糖8g，维生素0.009g，0.5ml的吐温80，65ml的微量元素，加入去离子水定容至1l。

（2）脉管载体的挂膜

挂膜是在大试管（外直径：3cm；长：20cm）中完成，当培养基中的淀粉为红薯淀粉时，在大试管中加入上述液体培养基70ml，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（p.chrysosporium），每毫升接种10⁴个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120rpm的条件下，培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝向外延伸，载体自上而下菌丝长势均匀。

实施例3

（1）培养基的配制

固定化培养白腐真菌的培养基，由葡萄糖12g/l，红薯淀粉8g/l，维生素0.01g/l，1.2ml/l吐温80，75ml/l微量元素和去离子水组成。

首先将12g红薯淀粉放到1l的锥形瓶中，加入500ml的去离子水，放到电炉上先进行热溶，在此过程中进行搅拌，使得淀粉尽量避免糊化；等待其冷却到室温，加入葡萄糖12g，维生素0.01g，1.2ml的吐温80，75ml的微量元素，加入去离子水定容至1l。

（2）脉管载体的挂膜

挂膜是在大试管（外直径：3cm；长：20cm）中完成，当培养基中的淀粉为红薯淀粉时，在大试管中加入上述液体培养基70ml，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（p.chrysosporium），每毫升接种10⁴个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120rpm的条件下，培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝向外延伸，载体自上而下菌丝长势均匀。