用于分离青霉菌的培养基的制作方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及选择性培养基技术领域，特别涉及一种用于分离青霉菌的培养基。
【背景技术】：
[0002] 青霉属（Penicillium)真菌（以下简称青霉菌）是自然界中常见的一种真菌，其 分布范围非常广泛，常分布于土壤、大气、食物、腐生物、木材、粪便等基质上，与人类的生产 和生活密切相关，就其本身而言还具有很重要的经济价值。对于青霉菌的研宄国外较早、较 全面，国内的研宄则相对较少，而对宁夏区内青霉菌的研宄目前还没有人系统的涉及。因此 对宁夏地区青霉菌的调查、分类和鉴定能够为丰富完善青霉属的分类学提供基础的理论依 据，对青霉菌的研宄不管是在理论上还是实际应用中都有非常重要的意义。
[0003] 而培养基的选择在青霉菌的分离、分类过程中起着至关重要的作用，能够用于青 霉菌分离的选择性培养基有很多，如马铃薯葡萄糖琼脂（PDA)培养基、查氏琼脂（CA)培养 基、查氏酵母膏琼脂（CYA)培养基、孟加拉红培养基、25%的甘油硝酸盐琼脂（G25N)培养 基、马丁氏培养基等。但是这些培养基都有不同程度上的不足，例如孟加拉红培养基上的青 霉菌菌落较小不易辨认，要知道培养基上培养出的青霉菌菌落形态也是检验一种培养基合 适与否的重要指标，如果培养出来的菌落形态不容易辨认，就要在显微镜下一一观察，这会 极大增加工作量；CA、CYA两种培养基培养的周期较长，PDA培养基易生长其他杂菌，会抑制 并且污染青霉菌的生长等等。因此能配制出对青霉菌种类分离效果较好的培养基有十分重 要的意义。
【发明内容】
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[0004] 鉴于此，有必要配制出一种用于分离青霉菌的培养基，使其在分离的种类上、菌落 形态结构上都优于现有的选择性培养基。
[0005] -种用于分离青霉菌的培养基，包括：葡萄糖、酵母膏、孟加拉红、硝酸钠、硫酸镁、 磷酸二氢钾、琼脂、链霉素、蒸馏水。且将本发明命名为酵母膏葡萄糖琼脂培养基，简称YDA。
[0006] 优选的，用于分离青霉菌的培养基各组份的含量为：葡萄糖14~16g、酵母膏 4. 5~5. 5g、孟加拉红0? 030~0? 036g、硝酸钠2. 7~3. 3g、硫酸镁0? 4~0? 6g、磷酸二氢 钾1. 3~1. 6g、琼脂10~14g、蒸馏水1000ml、链霉素27~33mg。
[0007] 本发明组份均为常见化学药剂，成本低、易获取，采用本发明培养基培养出的青霉 菌周期短、菌落形态容易辨认，为青霉菌分类的初期进行菌种筛选工作节省了时间，并且， 本发明培养基跟其他选择性培养基相比，筛选出的青霉菌种类较多，众所周知分离效果好 的培养基对于青霉菌种类的筛选有着决定性作用，很多时候并非某地域没有某菌种的分 布，而是培养基的选择有误，没有筛选出此类菌种，因此本发明培养基能够为筛选出更多地 青霉菌做出贡献。综上，本发明是一种分离青霉菌综合效果优异的选择性培养基。
【附图说明】：
[0008] 附图1是CA培养基培养青霉菌7天时照片。
[0009] 附图2是CA培养基培养青霉菌12天时照片。
[0010] 附图3是CYA培养基培养青霉菌7天时照片。
[0011] 附图4是CYA培养基培养青霉菌12天时照片。
[0012] 附图5是YDA培养基培养青霉菌7天时照片。
[0013] 附图6是YSA培养基培养青霉菌7天时照片。
[0014] 附图7是PDA培养基培养青霉菌4天时照片。
[0015] 附图8是孟加拉红培养基培养青霉菌7天时照片。
【具体实施方式】：
[0016] 一种用于分离青霉菌的培养基，其各组份的含量为：葡萄糖15g、酵母膏5g、孟加 拉红0. 033g、硝酸钠3g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾1. 5g、琼脂12g、蒸馏水1000ml、链霉素 30mg〇
[0017] 其制备方法为：将上述含量孟加拉红、硝酸钠、硫酸镁和磷酸二氢钾称量后加入盛 有10ml蒸馏水的烧杯中搅匀，向加热容器中加入1000ml蒸馏水，可适当多加一点防止蒸发 损耗掉的水，待蒸馏水沸腾后加入葡萄糖15g，在加入酵母膏5g和烧杯中溶液搅拌，最后加 入琼脂粉12g，边加入边搅拌，最后高压蒸汽灭菌15min，待倒平板的时候加入链霉素30mg。
[0018] 本发明和其它培养基的筛选对比试验如下：
[0019] 1、试验材料
[0020] 于宁夏区内采集的8份土样
[0021] 9种选择性培养基：PDA培养基、CA培养基、CYA培养基、孟加拉红培养基、G25N培 养基、琼脂培养基、YDA培养基（本发明）、YSA培养基和马丁氏培养基。
[0022] 2、试验设计
[0023] 以上9种选择性培养基，以琼脂培养基为对照，分别用稀释平板法分离8份土样， 每份土样重复3皿，在培养箱培养7~12天后取出用显微镜做镜检观察青霉菌的种类。 [0024]各培养基的成分：
[0025]PDA培养基：葡萄糖20g，马铃薯20g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。
[0026] CA培养基：鹿糖 30g，NaN03 3g，K2HP04lg，KC10.5g，FeS04 0?Olg，琼脂 15g，蒸馏 水 1000ml〇
[0027]CYA培养基：鹿糖30g，酵母膏5g，查氏浓储液10ml，K2HP04lg，琼脂15g，蒸馏水 1000m〇
[0028] 孟加拉红培养基：固体孟加拉红培养基31. 6g，蒸馏水1000ml。
[0029] 马丁氏培养基：KH2P04lg，MgS04 0? 5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，孟加拉红0? 33g，琼 脂20g，链霉素30mg，蒸馏水1000ml。
[0030] G25N培养基：酵母膏3. 7g，查氏浓储液7. 5ml，甘油250g，K2HP04 0. 75g，琼脂12g， 蒸馈水l〇〇〇ml。
[0031] 琼脂培养基：琼脂l〇g。
[0032] 3、试验结果
[0033] 表：统计分离得到到青霉菌的种类数（表中孟加为孟加拉红，马丁为马丁氏）
[0035]通过SAS软件运行出来的结果如下：
[0037]
[0038]
[0039] 由以上统计数据2可以看出，实验设计的F= 6. 09,P〈0. 0001，说明整个实验设计、 数据具有统计学意义。分组变量a组的F= 8. 33,P〈0. 0001，说明各土样之间的差异具有 统计学意义。分组变量b组的F= 4. 14,P= 0. 0006,说明各处理培养基之间的差异也具 有统计学意义。
[0040] 由以上统计数据3的LSD检验得出的结果可以看出，按均数的大小排列顺序为依 次为YDA、孟加拉红、D25N、CA、YSA、CYA、马丁氏、PDA、琼脂。而从LSD组别的字母排列顺序 可以看出YDA培养基与其他培养基之间均具有差异。
[0041] 因此可以此试验得出结论，以上9种培养基，从土壤中分离得到青霉菌种类多的 培养基是YDA培养基，孟加拉红培养基次之，除过琼脂培养基作为对照外，其他6种培养基 差异均不显著。
[0042] 4、对比照片
[0043] 参看附图1~4可知，CA培养基和CYA培养基在培养青霉菌7天时菌落成长并不 成熟，需要12以上的培养时间才行。
[0044] 结合附图5、6来看，好像YDA培养基和YSA培养基7天时对青霉菌的选择性培养效 果差不多，但要注意的是从前统计结果来看，YDA培养基分离的青霉菌种类要明显多于YSA 培养基。
[0045] 附图7可以看出PDA培养基在培养青霉菌4天时杂菌就已经很多（小点是青霉菌， 其余为杂菌）。
[0046] 附图8中，孟加拉红培养基在培养青霉菌7天时，青霉菌菌落还很小，不易辨认。
【主权项】
1. 一种用于分离青霉菌的培养基，其特征在于：包括：葡萄糖、酵母膏、孟加拉红、硝酸 钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂、链霉素、蒸馏水。2. 如权利要求1所述的用于分离青霉菌的培养基，其特征在于：用于分离青霉菌的培 养基各组份的含量为：葡萄糖14~16g、酵母膏4. 5~5. 5g、孟加拉红0. 030~0. 036g、 硝酸钠2. 7~3. 3g、硫酸镁0. 4~0. 6g、磷酸二氢钾1. 3~I. 6g、琼脂10~14g、蒸馏水 1000ml、链霉素 27 ~33mg。
【专利摘要】一种用于分离青霉菌的培养基，包括：葡萄糖、酵母膏、孟加拉红、硝酸钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、琼脂、链霉素、蒸馏水。且将本发明命名为酵母膏葡萄糖琼脂培养基，简称YDA。本发明组份均为常见化学药剂，成本低、易获取，采用本发明培养基培养出的青霉菌周期短、菌落形态容易辨认，为青霉菌分类的初期进行菌种筛选工作节省了时间，另外，本发明培养基跟其他选择性培养基相比，筛选出的青霉菌种类较多，是一种分离青霉菌综合效果优异的选择性培养基。
【IPC分类】C12N1/14, C12R1/80
【公开号】CN104962480
【申请号】CN201510331342
【发明人】沈瑞清, 安婧婧
【申请人】宁夏农林科学院
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年6月16日