本发明涉及制药
技术领域：
，具体涉及一种高酰化度蛋白琥珀酸铁的制备方法。
背景技术：
蛋白琥珀酸铁中的铁与乳剂琥珀酸蛋白结合，形成铁-蛋白络合物，用以治疗各种缺铁性贫血。其结构如下：蛋白琥珀酸铁在ph值小于4时呈沉淀物形式，而在酸碱度ph较高时(ph7.5～8)又重新变为可溶性物质。此外，蛋白琥珀酸铁不能被胃蛋白酶消化，却在中性ph值时可被胰蛋白酶水解。由于蛋白琥珀酸铁的这些性质，其所含的铁受蛋白膜的保护而不同胃液中的盐酸和胃蛋白酶发生反应，因而不会造成胃黏膜损伤。蛋白琥珀酸铁中的铁在十二指肠内开始释放，因为正常ph值的升高使得这种化合物重新变得可溶，并且使蛋白膜被胰蛋白酶所消化，释放出的铁非常有利于机体的生理吸收，却又不会形成太高的吸收峰；事实上，它呈现一种恒定的吸收趋势，在机体的各个部位逐渐达到吸收与贮存的最佳平稳状态。1987年，意大利泛马克大药厂研制出一种名为蛋白琥珀酸铁(iron-proteinsuccinylate，简称isp)的纳米多肽类蛋白补铁药物，在意大利成功上市并在全球20多个国家包括西班牙、葡萄牙、希腊、阿根廷、韩国、中国等陆续上市销售。蛋白琥珀酸铁口服溶液由西班牙italfarmacos.a.公司在国内申请进口已经批准，商品名(中文)菲普利，商品名(英文)ferplex。现有蛋白琥珀酸铁制备路线主要是以酪蛋白为原料，与琥珀酸酐发生酰化反应生成琥珀酰蛋白，三价铁离子再与琥珀酰蛋白发生载铁反应，生成蛋白琥珀酸铁。反应式如下：us4493829公开了一种蛋白琥珀酸铁的制备方法。以奶粉为原料，碱性条件下(ph7.5～8)与琥珀酸酐进行酰化反应，反应完毕后，反应液离心或过滤，滤液中加入盐酸酸化(ph2.5～3)使沉淀，离心或过滤取沉淀得琥珀酰蛋白。琥珀酰蛋白分散于水中，在碱性条件(ph7.5)下溶解，加入三氯化铁溶液进行载铁反应，反应完毕后过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品。蛋白琥珀酸铁粗品分散于水中，在碱性条件(ph7.5)下溶解，过滤，得溶液。可经以下方法制备得蛋白琥珀酸铁：1)经酸化(ph2.5)、过滤、真空干燥。2)溶液经透析去除氯化钠后，冷冻干燥或喷雾干燥。此方法制备所得产物酰化度为95％。cn102838667公开了一种蛋白琥珀酸铁的制备方法。以酪蛋白为原料，碱性条件下(ph9.0～10.0)与琥珀酸酐进行酰化反应，反应完毕后，离心过滤，滤液中加入盐酸酸化(ph1～4)使沉淀，离心取沉淀得琥珀酰蛋白。琥珀酰蛋白分散于水中，在碱性条件(ph9.0～10.0)下溶解，离心，得琥珀酰蛋白溶液。加入三氯化铁溶液，同时加入氢氧化钠保持反应液ph9.0～10.0进行载铁反应，反应完毕后离心，得溶液。加入盐酸酸化(ph1～4)使沉淀，离心得滤饼。再分散于水中，在碱性条件(ph9.0～10.0)下溶解，酸化(ph1～4)，离心得滤饼。再分散于水中，在碱性条件(ph9.0～10.0)下溶解，离心，所得溶液经1.2μm陶瓷膜精滤后，酸化(ph1～4)，离心得滤饼，冷冻干燥后得蛋白琥珀酸铁。此方法制备所得产物酰化度为95.0％～96.8％。上述蛋白琥珀酸铁口服溶液配制过程中，一般存在蛋白琥珀酸铁溶解性差、溶解速度慢，且配制所得口服溶液黏度大、沉降物较多等问题。蛋白琥珀酸铁溶液黏度大，会导致在口服溶液配制过程中通过微孔过滤去除微生物的操作过程难以进行。酪蛋白在酰化反应中被酰化的氨基与酪蛋白初始游离氨基的百分比被称作酰化度。酰化度越高的琥珀酰蛋白，其水溶性越好、水溶液黏度越低、载铁能力越强，相应最终制备所得蛋白琥珀酸铁水溶性好、水溶液黏度低。在目前蛋白琥珀酸铁制备方法的基础上，可通过提高蛋白琥珀酸铁的酰化度、增加其亲水性基团、增大其水溶解性以及降低其水溶液黏度，来解决蛋白琥珀酸铁口服溶液配制过程中溶解速度慢、口服溶液黏度大以及沉降物多的问题。技术实现要素：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供了一种高酰化度(酰化度>99％)、水溶解性好、水溶液黏度低、滤膜通过性好、杂质含量低且质量稳定的蛋白琥珀酸铁的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)、于反应容器中加入酪蛋白和10～15倍酪蛋白重量的水，搅拌下加入1mol/l～4mol/l的氢氧化钠溶液调节反应液的ph至7.0～10.0使酪蛋白溶解。再缓慢分多批加入总重量与酪蛋白重量比例为1:0.2～1:0.4的琥珀酸酐，加琥珀酸酐的同时加入1mol/l～4mol/l浓度的氢氧化钠溶液保持反应液ph＝7.0～10.0，琥珀酸酐加入完毕后，继续搅拌反应30～45min，再向反应液中加入1mol/l～5mol/l的盐酸调节ph＝2～3，继续搅拌30～45min，过滤、将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得琥珀酰蛋白湿固体。(2)、步骤(1)所得琥珀酰蛋白湿固体用酪蛋白投料量5～7倍重量的水分散，搅拌下加入1mol/l～4mol/l的氢氧化钠溶液调节反应液ph＝4.1～4.8使琥珀酰蛋白溶解。离心或过滤(滤材孔径为120～3μm)后，得琥珀酰蛋白溶液。(3)、将1wt％～10wt％的三氯化铁水溶液缓慢加入至步骤(2)所得琥珀酰蛋白溶液中，琥珀酰蛋白与铁元素的重量比为1:0.45～1:0.55，加入完毕后，继续搅拌30～45min，过滤、将所得滤饼水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。(4)、步骤(3)所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体用酪蛋白投料量10～15倍重量的水分散，搅拌下加入1mol/l～4mol/l的氢氧化钠溶液调节反应液ph＝7.0～10.0使蛋白琥珀酸铁粗品溶解。经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得溶液中加入1mol/l～5mol/l的盐酸调节ph＝2～3，过滤，所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品。(5)、将步骤(4)所得蛋白琥珀酸铁湿品用摇摆制粒机10～50目制粒，再置沸腾干燥机干燥得蛋白琥珀酸铁。进一步，步骤2)中所述的加入1mol/l～4mol/l氢氧化钠溶液调节反应液ph＝4.1。进一步，步骤2)中所述的滤饼用酪蛋白投料量5倍重量水分散。进一步，琥珀酸酐总重量与酪蛋白重量比例为3:1。进一步，步骤(1)中将琥珀酸酐分15-25次加入酪蛋白溶液中。进一步，步骤(5)中干燥的具体条件是：先在20～30℃下干燥0.5～1h，再升温至50～70℃后干燥2～3h。更进一步，步骤(5)中干燥的具体条件是：先在30℃下干燥0.5h，再升温至70℃后干燥2h。本发明提供一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，以酪蛋白为原料，经琥珀酸酐酰化后制备得琥珀酰蛋白，再与三价铁络合发生载铁反应制备得蛋白琥珀酸铁粗品，最后经精制制备得蛋白琥珀酸铁。本发明制备所得琥珀酰蛋白酰化度高于99％，水溶性好，水溶液黏度低，滤膜通过性好、杂质含量低、收率高。本发明制备所得蛋白琥珀酸铁产品的特性，极大地弥补了现有方法制备蛋白琥珀酸铁在后续蛋白琥珀酸铁口服溶液配置过程中溶解速度慢、溶液黏度高、溶液沉降物较多的不足。具体实施方式下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。以下实施例中原料为食品级酪蛋白，购买于甘肃华羚酪蛋白股份有限公司。实施例1一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。再向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min后，加入3mol/l的盐酸调节反应液的ph值至2.5，继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入500g纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至4.5，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为600ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。其中，琥珀酰蛋白重量测定方法如下:取本步琥珀酰蛋白溶液10ml，滴加0.1mol/l盐酸调节ph＝2.0～3.0，过滤，所得固体在50～55℃下，五氧化二磷减压干燥6小时。计算公式：w1＝(m/10)×v；w1：琥珀酰蛋白重量g；v：琥珀酰蛋白溶液总体积ml；m：处理后所得样品的重量g。以下实施例同。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5使其完全溶解。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5后，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温至70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁102.7g。实施例2一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入500g纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至4.2，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为600ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁101.9g。实施例3一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入500g纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至4.1，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为600ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁80.3g。实施例4一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入500g纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至4.8，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为600ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁102.8g。实施例5一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入560g纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至4.5，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为700ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁105.2g。实施例6一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入500g纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至4.9，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为600ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁104.4g。实施例7一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入900g纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至4.5，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为1000ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁104.3g。实施例8一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入1.2kg纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至7.5，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使得琥珀酸蛋白溶液总体积为1500ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁106.4g。实施例9一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入500g纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至7.5，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为600ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁103.7g。实施例10一种蛋白琥珀酸铁的制备方法，包括以下步骤：于5l的反应瓶中，加入1.2kg纯化水，搅拌下加入酪蛋白100g。加毕，搅拌0.5小时，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，调节ph值稳定至7.5使酪蛋白溶解。向酪蛋白溶液中分20次加入共计300g琥珀酸酐，一个小时加入完毕，边加入琥珀酸酐边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液，使反应液ph值保持在7.5。琥珀酸酐加毕，继续搅拌30min，加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5。继续搅拌30min后，过滤，得琥珀酰蛋白湿固体。将琥珀酰蛋白湿固体加入到5l反应瓶中，加入1.2kg纯化水，边搅拌边加入2.5mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至4.5，使琥珀酰蛋白溶解，过滤，所得滤液加水适量，使琥珀酸蛋白溶液总体积为1500ml。取溶液适量，测定琥珀酰蛋白含量，并测定琥珀酰蛋白酰化度。将1.528kg9.5wt％的三氯化铁溶液加入到上步琥珀酰蛋白溶液中，加毕继续搅拌30分钟后，过滤，得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体。将上步所得蛋白琥珀酸铁粗品湿固体加入5l反应瓶，加入1.2kg纯化水，搅拌使之成混悬液。搅拌下加入2.5mol/l氢氧化钠水溶液调节ph值稳定在8.5。上述反应液经5μm滤膜初滤后，再经1μm滤膜精滤，所得滤液搅拌下加入3mol/l的盐酸调节ph值至2.5，继续搅拌30分钟，过滤，将所得固体水洗至洗出液的ph＝7，得蛋白琥珀酸铁湿品，蛋白琥珀酸铁湿品经50目摇摆制粒机造粒后，置沸腾干燥机中先30℃干燥0.5h，再升温70℃干燥2h，得蛋白琥珀酸铁104.1g。上述各实施例的酰化度测定方法酪蛋白在酰化反应中被酰化的氨基与酪蛋白初始游离氨基的百分比被称作酰化度。茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨，氨与茚三酮以及还原性茚三酮反应，生成紫色化合物。颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，通过测定570nm波长处的吸光度，测定氨基酸的含量。测定法：精密量取酪蛋白对照溶液和供试品溶液各5ml，置25ml容量瓶中，加茚三酮显色剂1ml，沸水浴加热15分钟，水浴冷却至室温，然后分别用体积分数为60％乙醇定容至刻度。放置20分钟，检测570nm波长处的吸光度，并做空白校正。按下式计算酰化度：asp：琥珀酰蛋白供试品溶液吸光度；ap：酪蛋白对照品溶液吸光度；cp：酪蛋白对照品溶液浓度；csp：琥珀酰蛋白供试品溶液浓度。上述实施例中间体琥珀酰蛋白酰化度测定结果见下表：表1：实施例1～10的中间体琥珀酰蛋白酰化度测定结果实施例实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5酰化度99.5％99.6％99.7％99.5％99.3％实施例实施例6实施例7实施例8实施例9实施例10酰化度98.3％96.5％95.6％96.8％96.5％上述实施例制备蛋白琥珀酸铁水溶液特性研究溶解性：将蛋白琥珀酸铁样品溶解于适量2.5mol/l氢氧化钠溶液中，并加水定容，制备成ph＝8的溶液，定容后的溶液体积ml与蛋白琥珀酸铁样品质量g的比值为10:1。然后通过6μm滤膜真空过滤，所得不溶物干燥后计量。并根据初始待溶解量计算其溶解比例。黏度：蛋白琥珀酸铁样品溶解于适量2.5mol/l氢氧化钠溶液中，再加水稀释，制备成ph＝8、蛋白琥珀酸铁质量分数分别为5％、6％的溶液，然后测定其溶液黏度。滤膜通过性：5ml质量分数为5％黏度测定下的蛋白琥珀酸铁溶液，真空抽滤通过直径3cm，孔径为0.45μm的滤膜。沉降物：称取蛋白琥珀酸铁样品8g，溶解于适量2.5mol/l氢氧化钠溶液中，制备成ph＝8的溶液，并加水定容至150ml。取上述溶液60ml，置离心管(管直径40mm，高115cm)中，4000转/分离心10分钟，计底部残留物体积。上述实施例制备的蛋白琥珀酸铁水溶液特性研究结果见下表2～3：表2：实施例1～10蛋白琥珀酸铁水溶液特性研究结果上述实施例制备蛋白琥珀酸铁相关指标测定结果见下表：表3：实施例1～10蛋白琥珀酸铁测定结果检验项目游离铁铁含量游离琥珀酸总琥珀酸氯化物实施例1未检出5.1％0.02％9.8％<0.1％实施例2未检出4.9％0.03％9.6％<0.1％实施例3未检出5.0％0.01％9.5％<0.1％实施例4未检出5.3％0.02％9.6％<0.1％实施例5未检出5.2％0.02％9.7％<0.1％实施例6未检出4.8％0.03％9.2％<0.1％实施例7未检出5.1％0.01％9.0％<0.1％实施例8未检出5.4％0.03％8.8％<0.1％实施例9未检出5.3％0.02％8.9％<0.1％实施例10未检出5.3％0.03％8.6％<0.1％当前第1页12