本发明涉及一种用于红富士苹果授粉花粉悬浮液的制备方法，属于果树授粉
技术领域：
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背景技术：
：苹果大多自花不育，需异花授粉，果实由子房和花托发育而成。植物自交不亲和性是被子植物中普遍存在的限制自花受精的机制，它阻止基因型相同的花粉管在雌蕊中正常生长，完成受精。该反应涉及到70多个科，250多个属。自交不亲和的发生防止了近亲繁殖、促进异花授粉受精，有利于物种多样性。根据其控制因子的不同，自交不亲和的类型可分为孢子体型和配子体型。配子体自交不亲和性是指在花粉和雌蕊的相互作用过程中，花粉的行为决定于花粉粒内壁蛋白的性质，也就是由花粉粒本身的单倍体基因型决定的，薇科多种果树如梨、苹果、甜樱桃、杏、果梅、李和扁桃等表现出配子体型自交不亲和性。自交不亲和现象在一定程度上推动了物种的进化，但是在经济作物的生产中比如苹果生产中也造成了一定的障碍。由于这些果树自花授粉不能结实，在生产上必须配置授粉品种，或进行人工辅助授粉才能保证座果，从而增加了生产成本。目前，克服自交不亲和的方法一般可归为生物学方法、物理学方法和化学处理法三大类。其中化学处理法一般是在苹果花期喷施3～10%的nacl溶液，nacl的浓度与自交不亲和的程度有关，但是这会导致花粉会出现不同程度的皱缩而无法萌发，影响花粉的活性，使得苹果的结果率会非常低，严重影响果园的产量和效益。因此，迫切寻找一种不影响花粉的活性，提高花粉的座果率的授粉花粉悬浮液。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题：针对传统的苹果授粉方法影响花粉的活性，导致花粉出现不同程度的皱缩而无法萌发，降低了苹果的座果率，严重影响果园的产量和效益的问题，提供了一种用于红富士苹果授粉花粉悬浮液的制备方法。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于红富士苹果授粉花粉悬浮液的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）在珊夏苹果树处于花期时，选取花朵和花蕾并采摘，在避光环境中收集珊夏苹果花粉，将珊夏苹果花粉置于白炽灯下干燥，将干燥后花粉过筛除杂，收集除杂后的花粉，并装入无菌离心管中，置于4℃的环境下避光保存；（2）按重量份数计，分别称取50～60份蔗糖、5～7份乳糖、10～20份葡萄糖、0.01～0.03份维生素c、0.1～0.3份硼酸、0.02～0.04份硫酸镁、0.01～0.03份硝酸钾、0.01～0.03份硝酸钙加入到900～1000份去离子水中，搅拌混合后灭菌，灭菌后得液体培养基；（3）将除杂后避光保存的花粉加入液体培养基中，搅拌后置于培养箱中，在黑暗环境下培养，得到花粉培养液，放入低温冰箱中储存，储存后取出解冻，得解冻液；（4）按重量份数计，分别选取100～120份解冻液、10～15份蔗糖、0.02～0.04份硼酸、0.001～0.003份硫酸锌，搅拌后得珊夏苹果花粉萌发液；（5）将阿拉伯胶溶液和珊夏苹果花粉萌发液混合，即可得用于红富士苹果的授粉花粉悬浮液。步骤（1）中所述的白炽灯的功率为25～30w。步骤（1）中所述除杂后保存的花粉和液体培养基的质量比为1:1000。步骤（3）中所述的培养箱温度为20～25℃，培养时间为5～7h。步骤（3）中所述的低温冰箱温度为-15～-10℃。步骤（3）中所述的解冻温度为5～8℃。步骤（5）中所述的阿拉伯胶溶液和珊夏苹果花粉萌发液是按质量比1:10混合。本发明与其他方法相比，有益技术效果是：（1）本发明将收集得到的珊夏苹果花粉，通过培养法培养珊夏苹果花粉，在离体培养环境中，培养基承担起柱头和花柱的功能，通过培养，可以提高珊夏苹果花粉的原本的活性和萌发率；（2）本发明将培养得到的花粉培养液进行冷冻保存，保存的目的是为了将花粉萌发率降到最低值，为后续花粉的萌发率和花粉管的伸长做准备，可以提高花粉的敏感度；（3）本发明将培养得到的花粉培养液中添加硼酸、蔗糖、硫酸锌，给花粉培养提供碳源，加入硼酸是提升花粉细胞内部的代谢和吸收蔗糖的过程，能够加快珊夏苹果花粉萌发和花粉管伸长，使花粉的萌发率得到提高；（4）本发明选取最有利于红富士花粉萌发和生长的悬浮液配方和温度，制备的用于红富士苹果授粉花粉悬浮液不会影响花粉的活性，易于花粉萌发，提高了红富士苹果的座果率。具体实施方式在珊夏苹果树处于花期时，从生长正常、树势健壮的珊夏苹果树上选取开放的花朵和花蕾并采摘；将采摘后的花朵和花蕾置于避光环境中，用镊子去掉花瓣，收集3～5g珊夏苹果花粉，将珊夏苹果花粉置于白炽灯下，在25～30w条件下干燥10～12h，将干燥后花粉过25～30目筛除杂，收集除杂后的花粉，并装入无菌离心管中，置于4℃的环境下避光保存，备用；按重量份数计，分别称取50～60份蔗糖、5～7份乳糖、10～20份葡萄糖、0.01～0.03份维生素c、0.1～0.3份硼酸、0.02～0.04份硫酸镁、0.01～0.03份硝酸钾、0.01～0.03份硝酸钙加入到900～1000份去离子水中，在50～70r/min转速下搅拌混合15～20min后，在紫外灯下灭菌处理15～20min，灭菌后得液体培养基；按质量比1:1000，将备用除杂后避光保存的花粉加入液体培养基中，以60～70r/min转速搅拌混合1～2min，搅拌后置于培养箱中，并设置培养箱温度为20～25℃，在黑暗的环境下培养5～7h；培养结束后得到花粉培养液并置于烧杯中，将烧杯放入低温冰箱中，先在-15～-10℃下储存2～3天，储存后将从低温冰箱中取出的烧杯先置于5～8℃下解冻8～10h，得解冻液，按重量份数计，分别选取100～120份解冻液、10～15份蔗糖、0.02～0.04份硼酸、0.001～0.003份硫酸锌，以40～50r/min转速搅拌3～5min，搅拌后即可得珊夏苹果花粉萌发液；称取1～3g阿拉伯胶加入到1000～1200ml去离子水中，搅拌至阿拉伯胶溶解，得阿拉伯胶溶液，按质量比1:10将阿拉伯胶溶液和上述珊夏苹果花粉萌发液混合，以50～70r/min转速搅拌混合3～5min后，即可得用于红富士苹果的授粉花粉悬浮液。实例1在珊夏苹果树处于花期时，从生长正常、树势健壮的珊夏苹果树上选取开放的花朵和花蕾并采摘；将采摘后的花朵和花蕾置于避光环境中，用镊子去掉花瓣，收集5g珊夏苹果花粉，将珊夏苹果花粉置于白炽灯下，在30w条件下干燥12h，将干燥后花粉过30目筛除杂，收集除杂后的花粉，并装入无菌离心管中，置于4℃的环境下避光保存，备用；按重量份数计，分别称取60份蔗糖、7份乳糖、20份葡萄糖、0.03份维生素c、0.3份硼酸、0.04份硫酸镁、0.03份硝酸钾、0.03份硝酸钙加入到1000份去离子水中，在70r/min转速下搅拌混合20min后，在紫外灯下灭菌处理20min，灭菌后得液体培养基；按质量比1:1000，将备用除杂后避光保存的花粉加入液体培养基中，以70r/min转速搅拌混合2min，搅拌后置于培养箱中，并设置培养箱温度为25℃，在黑暗的环境下培养7h；培养结束后得到花粉培养液并置于烧杯中，将烧杯放入低温冰箱中，先在-10℃下储存3天，储存后将从低温冰箱中取出的烧杯先置于8℃下解冻10h，得解冻液，按重量份数计，分别选取120份解冻液、15份蔗糖、0.04份硼酸、0.003份硫酸锌，以50r/min转速搅拌5min，搅拌后即可得珊夏苹果花粉萌发液；称取3g阿拉伯胶加入到1200ml去离子水中，搅拌至阿拉伯胶溶解，得阿拉伯胶溶液，按质量比1:10将阿拉伯胶溶液和上述珊夏苹果花粉萌发液混合，以70r/min转速搅拌混合5min后，即可得用于红富士苹果的授粉花粉悬浮液。实例2在珊夏苹果树处于花期时，从生长正常、树势健壮的珊夏苹果树上选取开放的花朵和花蕾并采摘；将采摘后的花朵和花蕾置于避光环境中，用镊子去掉花瓣，收集3g珊夏苹果花粉，将珊夏苹果花粉置于白炽灯下，在25w条件下干燥10h，将干燥后花粉过25目筛除杂，收集除杂后的花粉，并装入无菌离心管中，置于4℃的环境下避光保存，备用；按重量份数计，分别称取50份蔗糖、5份乳糖、10份葡萄糖、0.01份维生素c、0.1份硼酸、0.02份硫酸镁、0.01份硝酸钾、0.01份硝酸钙加入到900份去离子水中，在50r/min转速下搅拌混合15min后，在紫外灯下灭菌处理15min，灭菌后得液体培养基；按质量比1:1000，将备用除杂后避光保存的花粉加入液体培养基中，以60r/min转速搅拌混合1min，搅拌后置于培养箱中，并设置培养箱温度为20℃，在黑暗的环境下培养5h；培养结束后得到花粉培养液并置于烧杯中，将烧杯放入低温冰箱中，先在-15℃下储存2天，储存后将从低温冰箱中取出的烧杯先置于5℃下解冻8h，得解冻液，按重量份数计，分别选取100份解冻液、10份蔗糖、0.02份硼酸、0.001份硫酸锌，以40r/min转速搅拌3min，搅拌后即可得珊夏苹果花粉萌发液；称取1g阿拉伯胶加入到1000ml去离子水中，搅拌至阿拉伯胶溶解，得阿拉伯胶溶液，按质量比1:10将阿拉伯胶溶液和上述珊夏苹果花粉萌发液混合，以50r/min转速搅拌混合3min后，即可得用于红富士苹果的授粉花粉悬浮液。实例3在珊夏苹果树处于花期时，从生长正常、树势健壮的珊夏苹果树上选取开放的花朵和花蕾并采摘；将采摘后的花朵和花蕾置于避光环境中，用镊子去掉花瓣，收集4g珊夏苹果花粉，将珊夏苹果花粉置于白炽灯下，在27w条件下干燥11h，将干燥后花粉过27目筛除杂，收集除杂后的花粉，并装入无菌离心管中，置于4℃的环境下避光保存，备用；按重量份数计，分别称取55份蔗糖、6份乳糖、15份葡萄糖、0.02份维生素c、0.2份硼酸、0.03份硫酸镁、0.02份硝酸钾、0.02份硝酸钙加入到950份去离子水中，在60r/min转速下搅拌混合17min后，在紫外灯下灭菌处理17min，灭菌后得液体培养基；按质量比1:1000，将备用除杂后避光保存的花粉加入液体培养基中，以65r/min转速搅拌混合2min，搅拌后置于培养箱中，并设置培养箱温度为22℃，在黑暗的环境下培养6h；培养结束后得到花粉培养液并置于烧杯中，将烧杯放入低温冰箱中，先在-12℃下储存2天，储存后将从低温冰箱中取出的烧杯先置于7℃下解冻9h，得解冻液，按重量份数计，分别选取110份解冻液、12份蔗糖、0.03份硼酸、0.002份硫酸锌，以45r/min转速搅拌4min，搅拌后即可得珊夏苹果花粉萌发液；称取2g阿拉伯胶加入到1100ml去离子水中，搅拌至阿拉伯胶溶解，得阿拉伯胶溶液，按质量比1:10将阿拉伯胶溶液和上述珊夏苹果花粉萌发液混合，以60r/min转速搅拌混合4min后，即可得用于红富士苹果的授粉花粉悬浮液。采用实例1至实例3制备的授粉花粉悬浮液进行授粉试验，采用质量分数为7%的氯化钠溶液作为对照试验，在山东烟台福山某果园进行试验，具体试验的方法为：1.在4月份红富士苹果开花前进行套袋，防止自然授粉；2.在5月份选择四棵开花的红富士苹果树，分别将实例1至3及对照例于下午16:00喷洒至红富士苹果盛开的花朵上进行授粉，每棵果树上喷洒的授粉花粉悬浮液的量为100g，在授粉前统计每棵苹果树上的开花总数；3.在授粉后30天，统计苹果树上的结果数，并计算其座果率，统计数据如下表1。表1实验组苹果结果数开花总数座果率（%）对照例17027462实例130036582实例223026786实例326029289如表1所示，本发明制备的花粉悬浮液授粉效果好，大大提高了红富士苹果的座果率，提高了果农的经济效益。当前第1页12