本发明属于植物种子萃取
技术领域：
，具体涉及一种超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法。
背景技术：
：女贞子为木犀科植物女贞ligustrumlucidumait.的干燥成熟果实，始载于东汉《神农本草经》列为上品，滋补肝肾，明目乌发，用于肝肾阴虚，眩晕耳呜，腰膝酸软，须发早白，目暗不明，内热消渴，骨蒸潮热。主要含有萜类、黄酮类、苯乙醇苷类、挥发油、磷脂、多糖、脂肪酸、氨基酸、微量元素等化学成分，具有保肝、免疫调节、抗动脉粥样硬化、降血糖、降血脂、抗炎、抗衰老，抗肿瘤等药理作用。齐墩果酸是女贞子中主要的活性成分，毒性很低，具有多种生物活性，如抗病毒，消炎，镇静，增强免疫，控制血小板凝集，降血脂，降糖，保肝等多种药理作用，在非处方药齐墩果酸片和齐墩果酸胶囊等应用广泛，且效果显著。女贞子产量大，成本低，含有较高含量的齐墩果酸，是极具开发前景的药食同源药材。目前，女贞子萃取工艺主要为溶剂萃取法，存在着溶剂用量大、溶剂残留、污染环境、萃取时间长等缺点。虽然，关于超临界萃取女贞子中齐墩果酸的方法也有报道，如，雷雪发表的硕士论文《超临界co2萃取女贞子工艺研究》中分别考察了夹带剂种类、萃取压力、温度、萃取时间、二氧化碳流量、物料粒度、夹带剂用量、乙醇浓度、预处理等单因素对萃取结果的影响，得到齐墩果酸的最佳萃取率为0.55％，可见在添加夹带剂的情况下所得收率不甚理想，且后续处理较为繁琐，如何在不添加夹带剂的情况下，提高齐墩果酸的萃取率仍是一大难题。技术实现要素：为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法。本发明提供的超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法无需使用有机溶剂，不存在后续处理，提取效率高，颜色状态较好，工艺稳定，重复性好。本发明提供了一种超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法，包括以下步骤：(1)将女贞子粉碎后过筛50目，得女贞子粉末；(2)取步骤(1)所得女贞子粉末180-220g，加入至超临界二氧化碳萃取装置的萃取釜中，控制萃取釜的温度为35-55℃，分离釜i的温度均为35-55℃，分离釜ii的温度均为45℃和分离釜iii的温度均为45℃；(3)启动二氧化碳泵，设置二氧化碳流量为18-24kg/h，萃取釜压力为15-40mpa，萃取时间为30-240min，萃取结束后，打开分离釜i、分离釜ii和分离釜iii进行分离，收集，即得。进一步地，所述步骤(2)中女贞子粉末的加入量为200g。进一步地，所述步骤(2)中萃取釜的温度为50℃，分离釜i的温度为55℃，分离釜ii的温度为45℃，分离釜iii的温度为45℃。进一步地，所述步骤(3)中分离釜i压力为8-15mpa，分离釜ii压力为6-10mpa，分离釜iii压力为6mpa。进一步地，所述步骤(3)中萃取釜压力为15mpa。进一步地，所述分离釜i压力为10mpa，分离釜ii压力为6mpa。进一步地，所述步骤(3)中二氧化碳流量为21kg/h，萃取时间为120min。发明人经过研究发现压力和温度对超临界萃取的影响最大，并考察了萃取压力、萃取温度、分离釜i压力、分离釜i温度对超临界萃取的影响，得出四个因素对女贞子齐墩果酸的影响大小为：分离釜i温度＞萃取温度＞分离釜i压力＞萃取压力；最佳工艺条件为萃取温度为50℃，萃取压力为15mpa，分离釜i温度为55℃，分离釜i压力为10mpa，分离釜ii压力和温度温度分别为6mpa和45℃，分离釜iii压力和温度分别为6mpa和45℃，萃取时间为120min，萃取得到的齐墩果酸百分率为2.0117％。与现有技术相比，本发明提供的超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法，无需使用有机溶剂，不存在后续处理，提取效率高，工艺稳定，重现性好。具体实施方式为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述
发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。本发明所用超临界二氧化碳萃取装置，由中山大学中药集成制造与过程控制技术研究中心和南通睿智超临界科技发展公司联合制造，型号231-50-06。实施例1超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法所述超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法，包括以下步骤：(1)将女贞子粉碎后过筛50目，得女贞子粉末；(2)取步骤(1)所得女贞子粉末180g，加入至超临界二氧化碳萃取装置的萃取釜中，控制萃取釜的温度为35℃，分离釜i的温度为35℃、分离釜ii的温度为45℃和分离釜iii的温度为45℃；(3)启动二氧化碳泵，设置二氧化碳流量为18kg/h，萃取釜压力为27mpa，萃取时间为30min，萃取结束后，打开分离釜i(压力为8mpa)、分离釜ii(压力为8mpa)和分离釜iii(压力为6mpa)进行分离，收集，即得。实施例2超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法所述超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法，包括以下步骤：(1)将女贞子粉碎后过筛50目，得女贞子粉末；(2)取步骤(1)所得女贞子粉末200g，加入至超临界二氧化碳萃取装置的萃取釜中，控制萃取釜的温度为50℃，分离釜i的温度为55℃、分离釜ii的温度为45℃和分离釜iii的温度为45℃；(3)启动二氧化碳泵，设置二氧化碳流量为21kg/h，萃取釜压力为15mpa，萃取时间为120min，萃取结束后，打开分离釜i(压力为10mpa)、分离釜ii(压力为6mpa)和分离釜iii(压力为6mpa)进行分离，收集，即得。实施例3超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法所述超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法，包括以下步骤：(1)将女贞子粉碎后过筛50目，得女贞子粉末；(2)取步骤(1)所得女贞子粉末220g，加入至超临界二氧化碳萃取装置的萃取釜中，控制萃取釜的温度为55℃，分离釜i的温度为45℃、分离釜ii的温度为45℃和分离釜iii的温度为45℃；(3)启动二氧化碳泵，设置二氧化碳流量为24kg/h，萃取釜压力为40mpa，萃取时间为240min，萃取结束后，打开分离釜i(压力为15mpa)、分离釜ii(压力为10mpa)和分离釜iii(压力为6mpa)进行分离，收集，即得。对比例1超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法所述超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法与实施例2不同之处为：萃取中加入400ml的95％的乙醇作为夹带剂，其他与实施例2相同。对比例2乙醇萃取方法所述乙醇萃取方法，包括以下步骤：(1)将女贞子粉碎，过筛50目，得女贞子粉末；(2)将步骤(1)所得女贞子粉末200g加入70％乙醇中回流萃取，萃取2h后，即得。试验例一、齐墩果酸的含量测定1.试验材料：实施例1-3萃取得到的齐墩果酸。2.试验方法：(1)通过高效液相色谱法对齐墩果酸进行定量分析，色谱条件：色谱柱：sharpsil-hc18色谱柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1％磷酸；洗脱梯度：0-10min，乙腈40-75％，10-23min，乙腈75-79％，23-31min，乙腈79-79.4％，31-40min，乙腈79.4-95％，40-50min，乙腈95％；柱温：25℃；检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；(2)按外标法计算齐墩果酸的含量：样品中齐墩果酸的百分含量＝齐墩果酸样品浓度mg/ml×齐墩果酸样品体积(ml)/样品取样量；齐墩果酸的百分率＝样品中齐墩果酸的百分含量×样品所属萃取物重量/女贞子投药量(g)×100％。3.试验结果：计算所得齐墩果酸的百分率结果见表1。表1齐墩果酸的百分率结果项目实施例1实施例2实施例3对比例1对比例2齐墩果酸的百分率/％0.39452.01170.70640.67210.6516通过观察可知，本发明实施例1-3萃取所得齐墩果酸为黄色粘稠状，具有清香气味；对比例1萃取所得齐墩果酸为黄色稀薄状，具有稍许刺激味；对比例2萃取所得齐墩果酸为墨绿色稀薄状，具有焦味；且对比例1-2的后续处理复杂，有机溶剂残留。由表1可知，本发明超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法中，未添加夹带剂也可以萃取得到齐墩果酸。实施例1、实施例2、实施例3相比，实施例1与实施例3中齐墩果酸的产率较低，说明本发明实施例1齐墩果酸的萃取时间短萃取不完全，实施例3萃取时间过长不利于萃取，实施例2的萃取效果较好。与对比例1-2相比，本发明实施例2制备的齐墩果酸含量较高，说明本发明实施例2超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法较好，后续以实施例2为基础，对萃取工艺条件优化。试验例二、萃取工艺条件优化影响超临界二氧化碳萃取效率的因素有很多，但发明人经过大量试验发现中压力和温度对超临界萃取的影响最大，并确定了影响萃取的主要因素为萃取压力、萃取温度、分离釜i压力、分离釜i温度(保持分离釜iii的压力和设备回路一致、温度45℃，萃取120min)，并采用l9(3)4正交试验设计，以女贞子萃取物收率和外观(颜色深浅，澄明度)为评价指标，在实施例2的基础上，进行优化萃取工艺条件的试验，正交试验参见表2。表2正交试验表从表2的极差分析可知，四个因素对女贞子齐墩果酸的影响大小为：分离釜i温度＞萃取温度＞分离釜i压力＞萃取压力；根据表1的k值分析可知，四个影响因素下的最大均值分别为：分离釜i温度0.906，萃取温度0.519，分离釜i压力0.450，萃取压力0.180，所以超临界二氧化碳萃取的最佳工艺组合理论上应该为：a3b1c3d2；即萃取温度为50℃，萃取压力为15mpa，分离釜i温度为55℃，分离釜i压力为10mpa，分离釜ii压力和温度温度分别为6mpa和45℃，分离釜iii压力和温度分别为6mpa和45℃，萃取时间为120min。本发明在最佳工艺条件下所得齐墩果酸的百分率高达2.0117％。综上所述，由表1、2可知，本发明最佳工艺为实施例2，且齐墩果酸的萃取率远高于对比例1-2。说明本发明超临界二氧化碳萃取女贞子齐墩果酸的方法无需使用有机溶剂，不存在后续处理，颜色状态较好，提取效率高。当前第1页12