本发明属于超滤膜技术领域，具体地，涉及一种用超滤膜技术分离浓缩杏鲍菇多糖的工艺。
背景技术：
杏鲍菇还具有多种药用功效，是一种集食用和食疗于一体的大型食用真菌。现有研究结果表明杏鲍菇多糖是其主要活性成分之一，在抗血栓、调血脂、调节免疫、抗肿瘤和抗辐射方面都具有显著的效果。
多糖广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中，是一类天然高分子化合物，它是由醛糖或酮糖通过苷键连接在一起的多聚物，是构成生命的四大基本物质之一；多糖的生物活性与多种因素有关，包括多糖的结构、相对分子质量、溶解度等，因此，提取纯化技术的不同，会对多糖组分的生物活性产生影响。目前，对杏鲍菇多糖的提取多采用传统水提醇沉工艺，该工序繁杂、能耗高且多糖得率低，不太利于工业化应用。
技术实现要素：
针对上述背景技术中现有技术的不足，本发明提供了一种用超滤膜技术分离浓缩杏鲍菇多糖的工艺，通过采用超滤膜技术，使得该工艺分离多糖简单，能源消耗少，成本低，多糖得率高。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种用超滤膜技术分离浓缩杏鲍菇多糖的工艺，包括如下步骤：
(1)粗多糖提取液的制备：取杏鲍菇下脚料碎块于蒸馏水中浸泡35-45min，沸水提取1.5-2h，提取液过滤，滤液以10000r/min的离心速度离心12-16min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得杏鲍菇下脚料水溶性粗多糖提取液；
(2)木瓜蛋白酶脱蛋白纯化：取木瓜蛋白酶于烧杯中，加入缓冲液，配制成木瓜蛋白酶溶液；将木瓜蛋白酶溶液加入粗多糖提取液中，混合均匀，控制温度为45-55℃脱蛋白处理1-1.3h；
(3)活性碳脱色：将活性碳颗粒加入步骤(2)中脱蛋白处理过的多糖提取液，加热混合液至55-65℃，进行活性碳脱色处理25-30min，过滤，取滤液继续活性脱碳脱色处理两次；
(4)超滤膜工艺：串联使用孔径分别为0.005um、0.001um和1nm的3个超滤膜组件，将杏鲍菇粗多糖提取液在25-35℃、压力0.2-0.3mpa条件下依次同时进行连续超滤处理，超滤时间3-4h；得到三部分截留液，经浓缩、冷冻干燥得杏鲍菇多糖干品。
所述步骤(1)中杏鲍菇下脚料与蒸馏水的料液质量体积比为1g∶12-15ml。
所述步骤(2)中木瓜蛋白酶溶液采用ph值为5.0的nah2po4-na2hpo4缓冲液配制；配制木瓜蛋白酶溶液的过程中，取木瓜蛋白酶的质量为12-15g，缓冲液的体积为1000-1500ml。
所述步骤(3)中活性碳颗粒的粒径为50-80um，每次加入的量为提取液质量的10％-15％。
所述步骤(4)得到相对分子质量段分别为>100000、10000-100000、1000-10000三部分截留液。
本发明的有益效果：
本发明工艺简单、能源消耗少，成本低，多糖得率高；本发明通过采用串联使用不同孔径的超滤膜对提取液进行过滤，能够有效分离出不同组成的多糖；同时，本发明采用的超滤膜为纳米氧化锌改性的聚醚砜超滤膜，能有效降低膜污染，且有一定的抑菌效果，能够提升超滤膜的性能，增加超滤膜的使用寿命；本发明还融合了生物质蛋白酶脱蛋白，酶法脱蛋白无污染，具有较高的蛋白质去除率和多糖保留率。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
一种用超滤膜技术分离浓缩杏鲍菇多糖的工艺，包括如下步骤：
(1)粗多糖提取液的制备：取杏鲍菇下脚料碎块于蒸馏水(料液质量体积比为1g∶12-15ml)中浸泡35-45min，沸水提取1.5-2h，提取液过滤，滤液以10000r/min离心12-16min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得杏鲍菇下脚料水溶性粗多糖提取液；
(2)木瓜蛋白酶脱蛋白纯化：取木瓜蛋白酶于烧杯中，用ph值为5.0的nah2po4-na2hpo4缓冲液配制，配制成木瓜蛋白酶溶液；将木瓜蛋白酶溶液加入粗多糖提取液中，混合均匀，控制温度为45-55℃脱蛋白处理1-1.3h；其中，配制木瓜蛋白酶溶液的过程中，取木瓜蛋白酶的质量为12-15g，缓冲液的体积为1000-1500ml；
(3)活性碳脱色：将活性碳颗粒加入步骤(2)中脱蛋白处理过的多糖提取液，加热混合液至55-65℃，进行活性碳脱色处理25-30min，过滤，取滤液继续脱碳处理两次；其中，活性碳颗粒的粒径为50-80um，每次加入的量为提取液的10％-15％；
(4)超滤膜工艺：串联使用孔径分别为0.005um、0.001um和0.0001um的3个超滤膜组件，将杏鲍菇粗多糖提取液在25-35℃、压力0.2-0.3mpa条件下依次同时进行连续超滤处理，超滤时间3-4h；得到相对分子质量段分别为>100000、10000-100000、1000-10000三部分截留液，经浓缩、冷冻干燥得杏鲍菇多糖干品；
通过采用串联使用不同孔径的超滤膜对提取液进行过滤，能够有效分离出不同组成的多糖，多糖包括葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖和岩藻糖等不同单糖；
其中，选用的超滤膜为纳米氧化锌改性的聚醚砜超滤膜，该超滤膜的制备方法为：将聚醚砜粉末、纳米氧化锌、聚乙烯醇、n,n-二甲基乙酰胺按质量比10：2.5-4：0.5-1:60-80称取加入烧杯中，搅拌至聚醚砜粉末全部溶解，静置脱泡，在玻璃板上用刮刀刮出液膜，放入凝固浴，得超滤膜；
纳米氧化锌无毒、热稳定性和化学稳定性高，同时具备良好的抗菌性能；聚醚砜(pes)具有良好的耐酸碱性、耐压性，力学和热力学性质稳定，成膜性好，是一种优良的制膜材料，以pes为原料的超滤膜在水处理、食品加工、生物医药等领域有广泛的应用，但是使用过程中容易造成膜污染；纳米氧化锌改性的聚醚砜超滤膜能有效降低膜污染，且有一定的抑菌效果，能够提升超滤膜的性能，增加超滤膜的使用寿命。
实施例1
(1)粗多糖提取液的制备：取杏鲍菇下脚料碎块于蒸馏水(料液质量体积比为1g∶12ml)中浸泡35min，沸水提取1.5h，提取液过滤，滤液以10000r/min离心12min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得杏鲍菇下脚料水溶性粗多糖提取液；
(2)木瓜蛋白酶脱蛋白纯化：取木瓜蛋白酶于烧杯中，用ph值为5.0的nah2po4-na2hpo4缓冲液配制，配制成木瓜蛋白酶溶液；将木瓜蛋白酶溶液加入粗多糖提取液中，混合均匀，控制温度为45℃脱蛋白处理1h；其中，配制木瓜蛋白酶溶液的过程中，取木瓜蛋白酶的质量为12g，缓冲液的体积为1000ml；
(3)活性碳脱色：将活性碳颗粒加入步骤(2)中脱蛋白处理过的多糖提取液，加热混合液至55℃，进行活性碳脱色处理25min，过滤，取滤液继续脱碳处理两次；其中，活性碳颗粒的粒径为50um，每次加入的量为提取液的10％；
(4)超滤膜工艺：串联使用孔径分别为0.005um、0.001um和0.0001um的3个超滤膜组件，将杏鲍菇粗多糖提取液在25℃、压力0.2mpa条件下依次同时进行连续超滤处理，超滤时间3h；得到相对分子质量段分别为>100000、10000-100000、1000-10000三部分截留液，经浓缩、冷冻干燥得杏鲍菇多糖干品。
实施例2
(1)粗多糖提取液的制备：取杏鲍菇下脚料碎块于蒸馏水(料液质量体积比为1g∶13ml)中浸泡40min，沸水提取1.8h，提取液过滤，滤液以10000r/min离心14min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得杏鲍菇下脚料水溶性粗多糖提取液；
(2)木瓜蛋白酶脱蛋白纯化：取木瓜蛋白酶于烧杯中，用ph值为5.0的nah2po4-na2hpo4缓冲液配制，配制成木瓜蛋白酶溶液；将木瓜蛋白酶溶液加入粗多糖提取液中，混合均匀，控制温度为50℃脱蛋白处理1.2h；其中，配制木瓜蛋白酶溶液的过程中，取木瓜蛋白酶的质量为13g，缓冲液的体积为1200ml；
(3)活性碳脱色：将活性碳颗粒加入步骤(2)中脱蛋白处理过的多糖提取液，加热混合液至60℃，进行活性碳脱色处理28min，过滤，取滤液继续脱碳处理两次；其中，活性碳颗粒的粒径为65um，每次加入的量为提取液的12％；
(4)超滤膜工艺：串联使用孔径分别为0.005um、0.001um和0.0001um的3个超滤膜组件，将杏鲍菇粗多糖提取液在35℃、压力0.3mpa条件下依次同时进行连续超滤处理，超滤时间4h；得到相对分子质量段分别为>100000、10000-100000、1000-10000三部分截留液，经浓缩、冷冻干燥得杏鲍菇多糖干品。
实施例3
(1)粗多糖提取液的制备：取杏鲍菇下脚料碎块于蒸馏水(料液质量体积比为1g∶15ml)中浸泡45min，沸水提取2h，提取液过滤，滤液以10000r/min离心16min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得杏鲍菇下脚料水溶性粗多糖提取液；
(2)木瓜蛋白酶脱蛋白纯化：取木瓜蛋白酶于烧杯中，用ph值为5.0的nah2po4-na2hpo4缓冲液配制，配制成木瓜蛋白酶溶液；将木瓜蛋白酶溶液加入粗多糖提取液中，混合均匀，控制温度为55℃脱蛋白处理1.3h；其中，配制木瓜蛋白酶溶液的过程中，取木瓜蛋白酶的质量为15g，缓冲液的体积为1500ml；
(3)活性碳脱色：将活性碳颗粒加入步骤(2)中脱蛋白处理过的多糖提取液，加热混合液至65℃，进行活性碳脱色处理30min，过滤，取滤液继续脱碳处理两次；其中，活性碳颗粒的粒径为80um，每次加入的量为提取液的15％；
(4)超滤膜工艺：串联使用孔径分别为0.005um、0.001um和0.0001um的3个超滤膜组件，将杏鲍菇粗多糖提取液在35℃、压力0.3mpa条件下依次同时进行连续超滤处理，超滤时间4h；得到相对分子质量段分别为>100000、10000-100000、1000-10000三部分截留液，经浓缩、冷冻干燥得杏鲍菇多糖干品。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。