本发明涉及鱼类产品深加工技术领域，特别涉及一种鱿鱼墨活性多糖。
背景技术：
鱿鱼，虽然习惯上称它们为鱼，其实它并不是鱼，而是生活在海洋中的软体动物。鱿鱼属于软体动物门，头足纲，枪乌贼科，通称枪乌贼。体色苍白，体圆锥形，头大，有淡褐色斑，前方生有10条触足，常成群游弋于深约20米的海洋中。常活动于浅海中上层，垂直移动范围达百余米。肉质细嫩，风味类似于鲍鱼，但价格很低，被成为“穷人的鲍鱼”。西方人因为鱿鱼表皮暗且易变，而称鱿鱼为“魔鬼鱼”；西班牙人吃鱿鱼比较多，他们把鱿鱼加工成不同风味的罐头，鱿鱼酱油，鱿鱼圈等；美国人近几年来也开始提倡吃鱿鱼，他们把鱿鱼加工成类似鲍鱼的形态出售；鱿鱼在日本很受欢迎，已成为日本日常生活中必不可少的水产品，日本人把鱿鱼一般加工成冷冻制品、干制品、珍味制品、盐渍制品、加热杀菌制品。鱿鱼加工中产生的副产物，如皮、内脏、眼及墨囊等，都作为废弃物丢掉，不仅造成了环境污染，也不能提高鱿鱼加工的附加值。鱿鱼全身都是宝，鱿鱼皮中含有大量的胶原蛋白，可用来提取胶原蛋白；内脏中含有促进草虾摄饵的氨基酸，粗脂肪（不饱和脂肪酸的含量很高），蛋白质（可用来生产鱿鱼酱油）；墨囊中的墨汁已被证实具有抗菌功能，还有抗肿瘤和增强免疫的功能。鱿鱼的墨汁约占鱿鱼体重的1.28%，是由肉眼看不见的黑色颗粒构成的黏稠的混悬液，其主要化学成分为黑色素和蛋白多糖复合体，但我国对鱿鱼中所含的墨囊或汁的利用未加重视。研究表明，鱿鱼墨多糖能显著提高免疫低下小鼠的脾脏体重比值、提高血清溶血素含量、增强迟发型变态反应能力、提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和碳廓清能力，进而能提高免疫低下小鼠的体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能。
现有技术如授权公告号为cn100467061c的中国发明专利，公开了一种鱿鱼墨汁多糖的制备方法，步骤如下：按下述重量比：活体冷冻经人工分拣的鱿鱼墨汁1至99.985份、2000u/g食品级脂肪酶0.1至0.005份、100万u/g食品级木瓜蛋白酶0.1至0.001份，对墨汁采用脂肪酶和木瓜蛋白酶在温和条件下进行复合酶水解，滤液中加入95%食用乙醇或化学纯丙酮，使墨汁多糖沉淀，沉淀用去离子水溶解后，回收乙醇或丙酮，干燥后的沉淀用不锈钢粉碎机粉碎即成品鱿鱼墨汁多糖。该制备方法克服了多糖物质具有热不稳性和较小的酸碱稳定性，高温或ph>7或ph<5都会引起多糖的氧化和降解的难题。该方法的分离和提取都是非常简便的，利用鱿鱼墨囊为原料，分离并提取得到符合医药原料要求的鱿鱼墨汁多糖，但是该制备方法得到的多糖中杂蛋白和色素含量较高。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种杂蛋白和色素除去率高，多糖纯度高，多糖活性高的鱿鱼墨活性多糖。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：
一种鱿鱼墨活性多糖，该多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、l-岩藻糖和乳糖六种单糖组成，该鱿鱼墨活性多糖具有提高机体免疫力的作用，通过该作用，多糖可以起到抑制或杀死肿瘤细胞的作用。
一种鱿鱼墨活性多糖，该活性多糖的制备方法为：
步骤1：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:1.5-2.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在35-45℃下热水浸提3-5h，然后在0-5℃下继续浸提10-15h，在8000-10000rpm下离心22-28min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用，水提取粗多糖具有条件温和、简单等特点，超滤可以除去小分子无机盐、低聚糖等杂质，不需要采用其他方法，节约生产成本和能耗；
步骤2：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在ph为6.5-7.5、55-65℃下酶解8-15min，酶解结束后在90-100℃下灭酶10-20min，然后在转速为8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，将上清液中加入0.2-0.3倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌20-40min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，再浓缩至原体积的18-25%，再加入3-5倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，脂肪和蛋白质的存在不仅会影响鱿鱼墨多糖的纯度，还会影响鱿鱼墨多糖的理化性质、结构及活性，因此除去蛋白质是多糖提取过程中一个必不可少的环节，该步骤结合酶法和正丁醇、氯仿、三乙醇胺方法，能使鱿鱼墨粗多糖中的脂肪被水解成甘油和脂肪酸、蛋白质被水解成氨基酸和低分子肽，进而可初步除去脂肪和蛋白质，同时能够有效的脱除多糖液中游离及酶解的蛋白质，并保证多糖的存在，有效的降低了多糖的损失率；
步骤3：按料液比为1:4-6（g/ml）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在70-90℃下加热溶解20-30min，然后在转速为4000-6000r/min的离心机中离心3-8min，沉淀物重复上述操作2-3次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，用超纯水洗柱2-4个柱体积，浓缩收集液，备用，鱿鱼墨粗多糖中含有较多色素杂质，如果直接上色谱柱容易堵塞填料，很难继续上样，增加了分离纯化的难度，该步骤可除去鱿鱼墨粗多糖中的色素，利于后续试验的顺利进行，且该方法使得多糖的损失率较低；
步骤4：将浓缩收集液上deae-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-2mol/l的nacl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1-2ml/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经6000-10000da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖，该鱿鱼墨多糖具有提高机体免疫力的作用，通过该作用，多糖可以起到抑制或杀死肿瘤细胞的作用。
作为优选，正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.2-0.3:0.02-0.03，该混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的合理比例，能够使混合溶液中的各组分达到增益效果，不仅能够有效的脱除多糖液中游离及酶解的蛋白质，使蛋白质的去除率达到最高，且能大大降低处理形成的凝胶物中夹带有多糖物质，并保证鱿鱼墨多糖的结构，避免多糖和蛋白质结合形成糖蛋白发生凝聚沉淀，大大降低了多糖的损失率。
作为优选，固相萃取柱中的填料为微波改性活性炭，其制备方法为：将活性炭置于浓度为3-6%的盐酸溶液中煮沸，并保持40-50min，滤去水分后用去离子水反复冲洗至中性，接着在100-120℃下烘干20-30h，然后将活性炭在微波功率为600-700w的条件下微波辐射4-6min，即得改性活性炭，上述盐酸溶液中含有0.021-0.025%的马兜铃酸，用含有马兜铃酸的盐酸溶液预处理活性炭，可使活性炭中的杂质在微波处理时能够不被晶化，不会造成活性炭微晶层间距变小，且可避免活性炭基本微晶发生热膨胀而造成孔隙塌的现象，保障活性炭的吸附效果，经微波改性后，活性炭孔壁变薄，以前闭塞、半闭塞的孔径也打开，孔隙更发达，表面粗糙不平，这些变化都有利于活性炭对色素的吸附，还能提高吸附速率，同时微波改性还使得活性炭表面碱性官能团增多，酸性官能团减少，有利于活性炭对糖液中各种非糖分的吸附，提高鱿鱼墨多糖的纯度。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明鱿鱼墨活性多糖具有提高机体免疫力的作用，通过该作用，多糖可以起到抑制或杀死肿瘤细胞的作用；2）该活性多糖提取方法简单可行，资源利用率高，提取速率快，提取率高，杂蛋白和色素除去率高，多糖纯度高，不影响多糖活性；3）该提取方法能使鱿鱼墨粗多糖中的脂肪被水解成甘油和脂肪酸、蛋白质被水解成氨基酸和低分子肽，进而可初步除去脂肪和蛋白质，且保证多糖的存在，有效的降低了多糖的损失率；4）本发明提取方法采用微波改性活性炭除去鱿鱼墨粗多糖中的色素，可大大提高鱿鱼墨粗多糖中色素的去除率和去除速率，同时使能够除去对糖液中各种非糖分，提高鱿鱼墨多糖的纯度，利于后续试验的顺利进行，且该方法使得多糖的损失率较低。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种鱿鱼墨活性多糖，该多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、l-岩藻糖和乳糖六种单糖组成，该鱿鱼墨活性多糖具有提高机体免疫力的作用，通过该作用，多糖可以起到抑制或杀死肿瘤细胞的作用。
一种鱿鱼墨活性多糖，该活性多糖的制备方法为：
步骤1：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:2.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在35℃下热水浸提5h，然后在0℃下继续浸提15h，在8000rpm下离心28min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用，水提取粗多糖具有条件温和、简单等特点，超滤可以除去小分子无机盐、低聚糖等杂质，不需要采用其他方法，节约生产成本和能耗；
步骤2：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在ph为6.5、65℃下酶解8min，酶解结束后在100℃下灭酶10min，然后在转速为12000r/min的离心机中离心15min，将上清液中加入0.3倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌20min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为12000r/min的离心机中离心15min，再浓缩至原体积的25%，再加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为12000r/min的离心机中离心15min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，脂肪和蛋白质的存在不仅会影响鱿鱼墨多糖的纯度，还会影响鱿鱼墨多糖的理化性质、结构及活性，因此除去蛋白质是多糖提取过程中一个必不可少的环节，该步骤结合酶法和氯仿、正丁醇方法，能使墨汁中的脂肪被水解成甘油和脂肪酸、蛋白质被水解成氨基酸和低分子肽，进而可初步除去脂肪和蛋白质，同时能够有效的脱除多糖液中游离及酶解的蛋白质，并保证多糖的存在，有效的降低了多糖的损失率；
步骤3：按料液比为1:6（g/ml）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在70℃下加热溶解30min，然后在转速为4000r/min的离心机中离心8min，沉淀物重复上述操作2次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，以除去部分色素，用超纯水洗柱4个柱体积，浓缩收集液，备用；
步骤4：将浓缩收集液上deae-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-2mol/l的nacl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1ml/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经10000da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。
上述正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.2-0.3:0.02-0.03，该混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的合理比例，能够使混合溶液中的各组分达到增益效果，不仅能够有效的脱除多糖液中游离及酶解的蛋白质，使蛋白质的去除率达到最高，且能大大降低处理形成的凝胶物中夹带有多糖物质，并保证鱿鱼墨多糖的结构，避免多糖和蛋白质结合形成糖蛋白发生凝聚沉淀，大大降低了多糖的损失率。
上述固相萃取柱中的填料为微波改性活性炭，其制备方法为：将活性炭置于浓度为3-6%的盐酸溶液中煮沸，并保持40-50min，滤去水分后用去离子水反复冲洗至中性，接着在100-120℃下烘干20-30h，然后将活性炭在微波功率为600-700w的条件下微波辐射4-6min，即得改性活性炭，上述盐酸溶液中含有0.021-0.025%的马兜铃酸，用含有马兜铃酸的盐酸溶液预处理活性炭，可使活性炭中的杂质在微波处理时能够不被晶化，不会造成活性炭微晶层间距变小，且可避免活性炭基本微晶发生热膨胀而造成孔隙塌的现象，保障活性炭的吸附效果，经微波改性后，活性炭孔壁变薄，以前闭塞、半闭塞的孔径也打开，孔隙更发达，表面粗糙不平，这些变化都有利于活性炭对色素的吸附，还能提高吸附速率，同时微波改性还使得活性炭表面碱性官能团增多，酸性官能团减少，有利于活性炭对糖液中各种非糖分的吸附，提高鱿鱼墨多糖的纯度。
实施例2：
一种鱿鱼墨活性多糖，该多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、l-岩藻糖和乳糖六种单糖组成。
一种鱿鱼墨活性多糖，该活性多糖的制备方法为：
步骤1：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:1.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在45℃下热水浸提3h，然后在5℃下继续浸提10h，在10000rpm下离心22min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用；
步骤2：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在ph为7.5、55℃下酶解15min，酶解结束后在90℃下灭酶20min，然后在转速为8000r/min的离心机中离心25min，将上清液中加入0.2倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌40min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为8000r/min的离心机中离心25min，再浓缩至原体积的18%，再加入5倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为8000r/min的离心机中离心25min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，上述正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.2:0.03；
步骤3：按料液比为1:4（g/ml）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在90℃下加热溶解20min，然后在转速为6000r/min的离心机中离心3min，沉淀物重复上述操作3次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，以除去部分色素，用超纯水洗柱2个柱体积，浓缩收集液，备用；
步骤4：将浓缩收集液上deae-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-2mol/l的nacl溶液分段梯度洗脱，控制流速为2ml/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经6000da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。
上述步骤3中固相萃取柱中的填料为微波改性活性炭，其制备方法为：将活性炭置于浓度为3-6%的盐酸溶液中煮沸，并保持40-50min，滤去水分后用去离子水反复冲洗至中性，接着在100-120℃下烘干20-30h，然后将活性炭在微波功率为600-700w的条件下微波辐射4-6min，即得改性活性炭，上述盐酸溶液中含有0.021-0.025%的马兜铃酸。
实施例3：
一种鱿鱼墨活性多糖，该多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、l-岩藻糖和乳糖六种单糖组成。
一种鱿鱼墨活性多糖，该活性多糖的制备方法为：
步骤1：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:2.0向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在40℃下热水浸提4h，然后在4℃下继续浸提12h，在9000rpm下离心25min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用；
步骤2：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在ph为7.0、60℃下酶解10min，酶解结束后在95℃下灭酶15min，然后在转速为10000r/min的离心机中离心20min，将上清液中加入0.25倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌30min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为10000r/min的离心机中离心20min，再浓缩至原体积的20%，再加入4倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为10000r/min的离心机中离心20min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，上述正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.25:0.025；
步骤3：按料液比为1:5（g/ml）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在80℃下加热溶解25min，然后在转速为5000r/min的离心机中离心5min，沉淀物重复上述操作2次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，用超纯水洗柱3个柱体积，浓缩收集液，备用，上述固相萃取柱中的填料为微波改性活性炭，其制备方法为：将活性炭置于浓度为4%的盐酸溶液中煮沸，并保持48min，滤去水分后用去离子水反复冲洗至中性，接着在110℃下烘干24h，然后将活性炭在微波功率为650w的条件下微波辐射5min，即得改性活性炭，上述盐酸溶液中含有0.024%的马兜铃酸；
步骤4：将浓缩收集液上deae-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-2mol/l的nacl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1.5ml/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经8000da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。