本发明属于化合物提取技术领域，具体涉及一种橄榄油加工废弃物中羟基酪醇的提取方法。
背景技术：
皮肤的衰老与机体的衰老是同时进行的，皮肤老化是机体衰老的一部分。皮肤位于机体的最外层，更多地受到外源性因素的影响，因此皮肤的老化是内源性因素和外源性因素共同作用的结果。皮肤外源性的老化与紫外线（uv）的照射、风吹、与刺激物接触有关。而uv的长期照射是环境中促进皮肤老化的最主要因素，在皮肤皱纹与饮食结构关系的调查中发现，日常大量食用橄榄制品的人群皮肤皱纹相对较少。研究发现橄榄多酚的自由基清除能力对皮肤健康产生直接的影响，包括预防与皱纹形成、皮肤变薄以及缺水有关的氧化效应。通过模拟活体内的情况，如皮肤受紫外线照射后导致超氧阴离子在组织和细胞内生成，显示橄榄果提取物中多酚对活性氧如超氧阴离子具有清除能力。生物体内氧的单电子还原，生物分子的酶促氧化和自氧化都可产生各种氧自由基。这些自由基的强反应性是导致细胞氧化损伤和衰老的主要原因。通过对橄榄中多酚类物质体外抗氧化活性研究显示橄榄多酚类物质具有良好的抗氧化性能，特别是在清除羟自由基方面，表现出了明显的优势，能修复表皮渗透屏障，防止形成紫外线导致的光老化皱纹。
橄榄属木犀科、木犀榄属常绿乔木，是世界著名的木本油料树种，有4000多年的栽培历史。油橄榄主要分布在地中海国家，希腊、意大利、突尼斯、西班牙为集中地。以油橄榄果实榨取的橄榄油富含不饱和脂肪酸、酚类物质和脂溶性维生素等多种活性成分，具有多种保健功效，是理想的高级食用油。目前，在橄榄油加工过程中，油橄榄鲜果经磨浆、离心分离制取初榨橄榄油后，产生大量的果渣和废液，含有果渣油、多酚和萜类化合物等多种活性成分的橄榄油加工废弃物(oliveoilprocessingwaste，opw)均未得到有效的高值化利用，造成了极大的资源浪费和环境污染。如何在生产橄榄油的同时开发利用好opw是亟待解决的技术问题。橄榄果渣的主要成分为木质素、纤维素、果渣油、酚类物质和三萜类化合物等，其中酚类物质是油橄榄中最为重要的成分，其中主要的酚类物质有羟基酪醇、橄榄苦苷、咖啡酸、阿魏酸、没食子酸等。羟基酪醇是最具有抗氧化活性作用的成分，也一直是国内外研究的热点。在橄榄油的加工过程中，溶于橄榄油的酚类物质具有抗氧化、抗炎、抗菌等多重功效的橄榄多酚物质随着opw的废弃而流失。从opw中提取的酚类物质，可作为食品和医药工业中良好的抗氧化剂，开发橄榄多酚，尤其是羟基酪醇产品对于橄榄油加工企业及废弃物的利用来说是一个非常有潜力的发展领域。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种橄榄油加工废弃物中羟基酪醇的提取方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种橄榄油加工废弃物中羟基酪醇的提取方法，包括如下步骤：
（1）将橄榄废饼进行冷冻干燥；
（2）取干燥好的橄榄废饼，加入正己烷萃取，去除脂肪；
（3）取步骤（2）得到的脱脂产物，加入naoh进行水解，然后用hcl将水解产物酸化至ph3-4，得澄清溶液；
（4）将澄清溶液用乙酸乙酯萃取，将混合的乙酸乙酯萃取液真空蒸发，残余物即为羟基酪醇提取物。
作为优选的，步骤（2）的萃取是在索氏提取装置中进行。
作为优选的，步骤（2）中，橄榄废饼与正己烷的料液比为1-5g：100ml。
作为优选的，步骤（4）中，混合的乙酸乙酯萃取液是在旋转蒸发器中真空蒸发至37℃。
本发明的有益效果是：本发明利用橄榄废物进行羟基酪醇的制备，获得羟基酪醇具有抗氧化等功能，可以适用于皮肤抗氧化延缓衰老用途。
附图说明：
图1为羟基酪醇标准品的hplc的图谱及峰面积。
图2为提取的羟基酪醇的hplc的图谱及峰面积。
图3为提取的羟基酪醇的orac结果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围内所作的有限次的改动，仍在本发明的权利要求保护范围内。
实施例1
将橄榄废饼放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，12h后取出干燥好的橄榄饼。
称取2.5g干燥好的橄榄废饼，使用索氏提取装置进行提取，用250ml正己烷萃取橄榄废饼60分钟，以进行脂肪去除。
称量脱脂提取物，用naoh进行水解，并在轨道振荡器中以250rpm搅拌88分钟，然后用浓hcl将水解产物酸化至ph3，得澄清溶液。将澄清溶液用10ml乙酸乙酯萃取七次。将混合的乙酸乙酯萃取液在旋转蒸发器中真空蒸发至37℃。将干燥的残余物溶于10ml的水溶液中用于羟基酪醇的检测和定量。
用色谱柱c18柱（150×4.6mm，5um），柱温30℃，乙腈：水=15：85（0.2%冰醋酸）为流动相，进样量10ul，波长280nm，流速0.8ml/min，进行高效中，用l蒸馏水溶解并定容，得浓度为1mg/ml的对照品溶液，再分别吸取其0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml于10ml容量瓶中，得到浓度为10，20，30，40，50ug/ml的对照品溶液。以羟基酪醇面积为纵坐标y，以羟基酪醇浓度为横坐标x（ug/ml）进行线性回归，得回归方程为为y=41122.8x，r2=0.992。将羟基酪醇的样品进行进样，经过测定其浓度为3.35ug/ml，计算获得羟基酪醇的得率为1.34%。
将获得的羟基酪醇进行抗氧化能力测定，将羟基酪醇样品按照8mg/kg，16mg/kg的剂量口服喂给老鼠，持续喂2周后，取其血液测定其抗氧化能力指数（orac），同时用相同剂量的vc做比较，结果发现投喂羟基酪醇的血液中orac（氧自由基吸收能力）是投喂vc的13倍左右（图3）。
以上实验结果可以表明：本发明能够从橄榄废饼中制备羟基酪醇，且提取的羟基酪醇具有抗氧化功能。