本发明属于生物工程技术领域，特别涉及一种从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法。
背景技术：
橄榄油在国际上有“液体黄金”，“美女之油”，“地中海甘露”等美誉。在西方国家，无论是营养学家，医学家，食品科学研究人员，还是消费者都公认橄榄油是健康之油。许多疾病的发展都涉及到大量的脂肪饮食，一些实验室研究已经指出橄榄油中的酚类和其他同族物质水解产生具有强抗癌活性的小酚类组分。酚类物质有非常多的生物学作用，特别是羟基酪醇对低密度脂蛋白(ldl)具有有效的抗氧化保护作用、抑制血小板凝集。羟基酪醇是一种天然多酚类化合物，具有多种生物和药理活性，应用于美容产品保健品，能有效增强皮肤弹性和润泽，具除皱抗衰老之功效；有助于人体对矿物质的吸收，无需补钙，自然吸收，保持骨密度，减少骨骼疏松，同时提高内分泌系统功能，促进新陈代谢，促进伤口愈合，消除体内自由基，恢复人体脏腑器官的健康状态，防止脑衰，延缓衰老，保持青春活力；可以防治肺癌、乳腺癌、子宫癌、前列腺癌等，促进癌症后期恢复和提高化疗效果；防治因吸烟导致的多种病变；对动脉硬化、高血压、心脏病、脑溢血等的预防与治疗有奇效，优于同类药品；此外，羟基酪醇可作为天然的抗菌、抗病毒和杀真菌产品用于农业和虫害控制用途。因此具有巨大的医疗作用前景。
羟基酪醇可以来源于橄榄油和加工橄榄油产生的废水中。而如何从加工橄榄油产生的废水提取高纯度的羟基酪醇是目前研究的重点。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，该方法制备得到的羟基酪醇具有较高的纯度，实现变废为宝。
为实现上述目的，本发明所要解决的技术方案为：
本发明提供从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留20000～40000分子量的超滤膜进行超滤，再进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；
3)将洗脱液过截留分子量为16～28万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)干燥，得到羟基酪醇。
本发明所述步骤1)中，微滤使用的膜孔径为0.02～0.06μm。通过微滤能够除去很多沉淀物以及有害物质，有利于羟基酪醇的醇化。
本发明所述步骤2)中，乙醇溶液和乙酸乙酯的体积比为6～10:1。这样的溶剂配比，有利于提高羟基酪醇的提取率和纯度，可最大限度提取加工橄榄油废水中的羟基酪醇。
本发明所述步骤2)中，乙醇溶液的体积浓度为40％～60％。体积浓度适合，提高羟基酪醇的溶解度。
本发明所述步骤2)中，混合溶液的用量为树脂柱床体积的6～8倍。洗脱剂的用量适宜，在保证羟基酪醇纯度的同时，有效防止资源滥用。
本发明所述步骤3)中，洗脱液过截留分子量为20万的中空纤维膜，可以最大程度地去除杂质和色素，以保证成品纯度和色泽，最大限度提高羟基酪醇的纯度。
本发明所述步骤4)中，真空冷冻干燥。采用冷冻干燥有利于提高羟基酪醇的生物活性。
与现有技术相比，本发明方法制备工艺简单，能够大大缩短制备周期，在大孔吸附树脂进行分离和纯化前进行超滤和微滤处理，之后再中空纤维膜，能够显著提高纯度，且提取温和，能够有效保持中羟基酪醇的生物活性。通过这样方法制备得到的羟基酪醇在消化系统内不易降解，其分子仍保持活性状态，依然能发挥原有的活性，能够显著延长其对疾病的作用效果，显著提高其抗氧化、抗癌、防癌、延缓衰老等保健功效。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.02μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为10:1体积浓度为40％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的6倍；
3)将洗脱液过截留分子量为16万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为96.5％。经计算，提取率为93.2％。
实施例2
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留40000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.03μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为9:1体积浓度为45％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的7倍；
3)将洗脱液过截留分子量为19万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为96.6％。经计算，提取率为90.2％。
实施例3
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.04μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为8:1体积浓度为50％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的8倍；
3)将洗脱液过截留分子量为28万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为96.5％。经计算，提取率为90.2％。
实施例4
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留20000～40000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.05μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为7:1体积浓度为55％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的7倍；
3)将洗脱液过截留分子量为25万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为96.5％。经计算，提取率为91.3％。
实施例5
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留20000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.06μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为6:1体积浓度为60％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的6倍；
3)将洗脱液过截留分子量为20万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为96.5％。经计算，提取率为94.6％。
实施例6
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.04μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为8:1体积浓度为50％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的8倍；
3)将洗脱液过截留分子量为26万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为96.4％。
实施例7
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.04μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为8:1体积浓度为50％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的8倍；
3)将洗脱液过截留分子量为24万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为96.7％。
实施例8
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.04μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为8:1体积浓度为50％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的8倍；
3)将洗脱液过截留分子量为22万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为97.3％。
实施例9
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.04μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为8:1体积浓度为50％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的8倍；
3)将洗脱液过截留分子量为20万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为99.5％。
实施例10
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.04μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为8:1体积浓度为50％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的8倍；
3)将洗脱液过截留分子量为18万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为97.8％。
实施例11
从加工橄榄油废水中提取羟基酪醇的方法，包括以下制备步骤：
1)取加工橄榄油产生的废水，用截留30000分子量的超滤膜进行超滤，再使用的膜孔径为0.04μm进行微滤，得到滤液；
2)滤液进大孔吸附树脂柱层析，用体积比为8:1体积浓度为50％的乙醇溶液和乙酸乙酯的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，所述混合溶液的用量为树脂柱床体积的8倍；
3)将洗脱液过截留分子量为16万的中空纤维膜，得到浓缩液；
4)真空冷冻干燥，得到羟基酪醇。
经hplc检测，得到羟基酪醇的纯度为96.5％。