一种基因工程菌及其制备方法和用途与流程

文档序号:20030752发布日期:2020-02-28 10:21阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌是米尔贝霉素a3/a4或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的生产菌中过表达milr2基因的工程菌;较佳地,所述米尔贝霉素a3/a4或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的生产菌为吸水链霉菌(streptomyceshygroscopicus);更佳地,所述米尔贝霉素a3/a4的生产菌为吸水链霉菌nrrl5739,所述5-酮-米尔贝霉素a3/a4的生产菌为对吸水链霉菌nrrl5739的milf基因进行敲除后的菌株。

2.如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,所述基因工程菌携带含有milr2基因的重组表达载体;较佳地,所述重组表达载体的骨架为含有强启动子的质粒;更佳地,所述重组表达载体的骨架为含有红霉素启动子、kasop*或tipap的质粒;进一步更佳地,所述重组表达载体的骨架为含有红霉素启动子ermep*的质粒,优选质粒pib139。

3.如权利要求1或2所述的基因工程菌,其特征在于,所述milr2基因编码的氨基酸序列的ncbi登录号为wp_014173392.1;较佳地,所述milr2基因的核苷酸序列的genbank号为cp002047.1。

4.一种制备如权利要求1~3任一项所述的基因工程菌的方法,其特征在于,所述方法包括下列步骤:

1)构建milr2基因过表达的重组表达载体;

2)将构建的重组表达载体转化到中间宿主菌;

3)将带有重组表达载体的中间宿主菌与米尔贝霉素a3/a4或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的生产菌进行接合培养;

较佳地,所述的中间宿主菌为大肠杆菌s17-1;和/或,所述的接合培养为在m-isp4培养基培养,培养温度为28℃。

5.一种制备米尔贝霉素a3/a4或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的方法,其特征在于,包括将如权利要求1~3任一项所述的基因工程菌在发酵培养基中进行发酵培养。

6.如权利要求5所述的制备米尔贝霉素a3/a4或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的方法,其特征在于,所述发酵培养基包括以下组分:12%蔗糖、1%脱脂奶粉、1%棉籽饼粉、0.1%k2hpo4、0.01%feso4·7h2o、0.3%caco3;所述百分比为各组分占培养基的质量体积百分比(克/毫升);

较佳地,所述发酵培养基的ph值为7.2;

和/或,所述发酵的温度为25~30℃,优选28℃;和/或,所述发酵的培养时间为10~16天,优选14天;和/或,所述发酵的培养转速为180~250rpm,优选240rpm。

7.如权利要求5或6所述的制备米尔贝霉素a3/a4或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的方法,其特征在于,其还包括先将所述基因工程菌接种于种子培养基中进行种子培养,然后将所得培养物转接至发酵培养基;较佳地,

所述种子培养基的培养温度为25~30℃,优选28℃;种子培养时间为1~2天,优选1天;种子培养转速为180~250rpm,优选240rpm;

和/或,所述转接的接种量为1~8%,优选4%。

8.如权利要求1~3任一项所述的基因工程菌在制备米尔贝霉素a3/a4或5-酮-米尔贝霉素a3/a4中的用途。

9.milr2基因在调控米尔贝霉素a3/a4和/或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的产量中的应用;较佳地,所述调控米尔贝霉素a3/a4和/或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的产量为提高米尔贝霉素a3/a4和/或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的产量。

10.一种用于制备米尔贝霉素a3/a4或5-酮-米尔贝霉素a3/a4的发酵培养基,其特征在于,所述发酵培养基包括以下组分:12%蔗糖、1%脱脂奶粉、1%棉籽饼粉、0.1%k2hpo4、0.01%feso4·7h2o、0.3%caco3;所述百分比为各组分占培养基的质量体积百分比(克/毫升);

较佳地,所述发酵培养基的ph值为7.2;

和/或,所述发酵的温度为25~30℃,优选28℃;和/或,所述发酵的培养时间为10~16天,优选14天;和/或,所述发酵的培养转速为180~250rpm,优选240rpm。

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