用于癌症治疗的方法和组合物与流程

背景技术：
：尽管可以检测针对抗肿瘤抗原的免疫反应(disis等人(1997)j.clin.oncol.15:3363-3367)，但导致疾病的恶性细胞通常不能引发引起排斥的免疫反应。研究证实，可以通过向肿瘤细胞引入免疫调节分子(例如细胞因子)和共刺激分子来增强肿瘤细胞的免疫原性；然而，根除残留的癌细胞可能需要靶向广泛分散的微转移性肿瘤沉积物，所述沉积物无法通过直接基因转移接近。此外，引入的免疫调节分子的表达和稳定性通常不尽人意。由免疫系统细胞产生的免疫调节因子(例如细胞因子)能够直接或间接地活化具有适应性免疫反应的细胞且能够在引起保护性抗肿瘤免疫中发挥重要作用。先天免疫系统可以由引起释放促炎性细胞因子(例如白介素)的细菌产物或“危险”信号触发。多个研究已显示，免疫调节因子可能适用于对动物模型和癌症患者发挥抗肿瘤作用。然而，与应用免疫调节因子相关的短半衰期和全身性毒性极大地限制了其使用。在cn200880117225.8中，描述了一种嵌合构建体，其包括一个附着于靶向肿瘤相关抗原的抗体的c端的干扰素。然而，这种嵌合构建体所表达的融合蛋白在体内通常非常不稳定，其表达量通常不够高，不足以用于工业化生产。除了免疫治疗外，外科手术、化疗、激素治疗和放疗也被用于治疗癌症(参见例如：stockdale，1998年《癌症患者管理原则》(principlesofcancerpatientmanagement)，《科学美国人：医学》(scientificamerican:medicine)，第3卷，rubenstein和federman编，第12章第iv节)。然而，归因于患者健康状况或疾病晚期的情况，外科手术可能是不可行或不可接受的，而且手术后癌细胞往往不能完全从患者体内移除。只有当肿瘤组织对辐射的敏感性高于正常组织时，放疗才有效，高剂量的放疗通常会引起严重的副作用。激素治疗很少作为单一药剂使用，虽然其可能有效，但通常在其它治疗已移除了大多数癌细胞之后用于预防或延迟癌症复发。此外，患者可能很快对化疗药剂产生耐药性。因此，新颖有效的癌症治疗方法仍然很有必要。技术实现要素：本申请提供用于治疗癌症的组合物和方法，其包括免疫缀合物与细胞毒剂或细胞毒疗法结合的使用，本申请的发明物在癌症治疗方面展示出显著的协同效应。一方面，本申请提供一种包括免疫缀合物和细胞毒剂的组合物，其中：所述免疫缀合物包括1)一个或多个白介素，和2)由第一fc亚基和第二fc亚基组成的fc域，所述第一fc亚基与所述第二fc亚基缔合以形成二聚体；所述一个或多个白介素与所述fc域融合；其中所述细胞毒剂能够诱导免疫原性细胞死亡。在某些实施方式中，所述一个或多个白介素中的至少一个与所述fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，所述免疫缀合物包括两个或多个白介素。在某些实施方式中，所述两个或多个白介素中的至少两个与所述fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，所述两个或多个白介素中的至少两个通过肽连接子彼此融合以形成白介素二聚体。在某些实施方式中，所述白介素二聚体中的至少一个与所述fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，所述两个或多个白介素是同一白介素的两个或多个拷贝。在某些实施方式中，所述两个或多个白介素是il10的两个或多个拷贝。在某些实施方式中，所述免疫缀合物进一步包括与所述fc域融合的靶向部分，其中所述靶向部分对于肿瘤抗原展现结合特异性。在某些实施方式中，所述靶向部分与所述fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，所述肿瘤抗原选自下组：egfr、her2/neu和fap。在某些实施方式中，所述fc域是iggfc域。在某些实施方式中，所述igg是人类igg1。在某些实施方式中，所述免疫缀合物是包括第一成员和与所述第一成员不同的第二成员的免疫缀合物，其中所述第一成员包括所述第一fc亚基，所述第二成员包括与所述第二fc亚基融合的所述一个或多个白介素，所述第一fc亚基与所述第二fc亚基缔合以形成所述异源二聚体。在某些实施方式中，所述一个或多个白介素中的至少一个与所述第二fc亚基的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，在所述第二成员中，所述一个或多个白介素中的至少两个彼此融合以形成白介素二聚体，所述白介素二聚体进一步与所述第二fc亚基的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，其中所述第一成员进一步包括与所述第一fc亚基融合的所述靶向部分。在某些实施方式中，其中所述免疫缀合物并不包括任何靶向部分。在某些实施方式中，所述第一fc亚基不同于所述第二fc亚基，所述fc域包括促进所述第一fc亚基与所述第二fc亚基之间的异源二聚化的修饰。在某些实施方式中，其中所述第一fc亚基包括第一修饰，所述第二fc亚基包括第二修饰，且所述第一修饰和第二修饰包括在选自以下任意一组位置处的氨基酸取代：1)第一修饰：y349和t366；第二修饰：d356、t366、l368、y407和f405；2)第一修饰：y349、t366和f405；第二修饰：d356、t366、l368和y407；3)第一修饰：y349、t366和k409；第二修饰：d356、t366、l368、y407和f405；4)第一修饰：y349、t366、f405、k360和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407和q347；5)第一修饰：y349、t366、f405和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、k360和q347；6)第一修饰：y349、t366、k409、k360和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、f405和q347；7)第一修饰：y349、t366、k409和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、f405、k360和q347；8)第一修饰：t366、k409和k392；第二修饰：t366、l368、y407、d399和f405；9)第一修饰：t366和k409；第二修饰：t366、l368、y407和f405；10)第一修饰：t366、k409和y349；第二修饰：t366、l368、y407、f405和e357；11)第一修饰：t366、k409、y349和s354；第二修饰：t366、l368、y407、f405和e357；12)第一修饰：t366和f405；第二修饰：t366、l368、y407和k409；13)第一修饰：t366、f405和d399；第二修饰：t366、l368、y407、k409和k392；14)第一修饰：t366、f405和y349；第二修饰：t366、l368、y407、k409和e357；15)第一修饰：t366、f405、y349和s354；第二修饰：t366、l368、y407、k409和e357；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂是选自由以下组成的群组：烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、铂类化合物，和辐射剂。在某些实施方式中，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自环磷酰胺的烷化剂。在某些实施方式中，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自由以下组成的群组的抗代谢物：卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞和5-fu。在某些实施方式中，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自由以下组成的群组的蒽环类药物：博来霉素、阿霉素和丝裂霉素c。在某些实施方式中，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的植物生物碱：紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。在某些实施方式中，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括发射x射线辐射和/或γ射线辐射的辐射剂。在某些实施方式中，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的铂类化合物：卡铂、顺铂和奥沙利铂。在另一个方面，本申请提供免疫缀合物与细胞毒疗法结合用于制备治疗有需要的个体的癌症的药物的用途，其中所述免疫缀合物如本申请中所述，所述细胞毒疗法能够诱导免疫原性细胞死亡。根据以下具体实施方式，本领域的技术人员将显而易知本发明的额外方面和优势，在具体实施方式中仅示出和描述本发明的说明性实施例。将认识到，本发明能够具有其它不同实施例，其若干细节可以在各种明显的方面进行修改，但均不脱离本发明。因此，附图和说明书在本质上均被视为是说明性的而不是限制性的。以引用的方式并入在本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请在本文中以引用的方式并入，其程度如同各个单独的出版物、专利或专利申请被具体地并且分别地指出以引用的方式并入一样。附图说明本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明书如下：图1a到1f显示的是本申请的免疫缀合物的如sds-page和sec-hplc分析所示的纯化结果；图2显示的是放疗剂量与肿瘤体积之间的关系；图3a到3d显示的是rt结合本申请的免疫缀合物的协同效应；图4显示的是rt结合本申请的免疫缀合物的协同效应；图5a到5c显示的是rt结合本申请的免疫缀合物的协同效应；图6a到6f显示的是rt结合本申请的免疫缀合物的协同效应；图7a到7j显示的是各种化学疗法结合本申请的免疫缀合物的效应；图8a到8c显示的是根据本申请的免疫缀合物的实例。具体实施方式在描述本申请的实施例之前，应理解，这些实施例仅以举例的方式提供，在本文中描述的本申请实施例的各种替代方案可以用于实践本申请。本领域的技术人员将想到不脱离本申请的众多变化形式、改变和替换。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。虽然与本文中所描述的方法和材料类似或等效的方法和材料可以用于实践或测试本申请，但下文描述了合适的方法和材料。以防冲突，将以本专利说明书(包含定义)为准。另外，材料、方法和实例仅为说明性的且没有限制性的意图。本领域的技术人员将想到不脱离本申请的众多变化形式、改变和替换。除非上下文另有清晰指示，否则本文所使用的单数形式“一”和“所述”通常包括复数是指物。本文中所使用的术语“免疫缀合物”通常是指通过将一个或多个抗体或其片段缀合到一个或多个第二分子形成的蛋白质分子。第二分子可相同或不同，且可包含例如效应蛋白。本文所使用的术语“蛋白质的(proteinaceous)”通常是指具有多肽或蛋白质性质、与多肽或蛋白质有关、类似于多肽或蛋白质或为多肽或蛋白质的材料或分子。举例来说，本申请的免疫缀合物可为异源二聚体蛋白质，或包括两个或多个多肽的异源二聚体。本文中所使用的术语“异源二聚体”通常是指由两个不同成员构成的分子(例如，蛋白质分子)。异源二聚体的两个成员可能在结构、功能、活性和/或组成方面不同。举例来说，两个不同成员可包括在形成多肽的氨基酸残基的次序、数目或种类方面不同的多肽。异源二聚体的两个不同成员中的每一个可以单独包括一个、两个或多个单位、多肽链或部分。本文中所使用的术语“靶向部分(targetingmoiety)”通常是指特异性地、选择性地或优先地结合于靶分子、靶细胞、靶粒子、靶组织或靶聚集体的分子、复合体或聚集体。举例来说，靶向部分可以是抗体、抗原结合抗体片段、双特异性抗体或其它基于抗体的分子或化合物。靶向部分的其它实例可以包含但不限于适体(aptamer)、高亲和性多聚体(avimer)、受体结合配体、核酸、生物素-亲和素结合对(biotin-avidinbindingpair)、结合肽或蛋白等。术语“靶向部分”和“结合部分”在本文中可以互换使用。本文中所使用的术语“肿瘤抗原”通常是指肿瘤细胞中产生或由肿瘤细胞产生的抗原物质，其可能具有触发宿主的免疫反应的能力。举例来说，肿瘤抗原可以是蛋白质、多肽、肽或其片段，其构成肿瘤细胞的一部分并且能够诱导肿瘤特异性细胞毒性t淋巴细胞。肿瘤抗原肽可以是由于肿瘤细胞中的肿瘤抗原降解而产生的肽，且可以在通过与hla分子结合而表达于细胞表面上时诱导或激活肿瘤特异性细胞毒性t淋巴细胞。在某些实施方式中，术语“肿瘤抗原”还可以指排他地或优先地或差异性地表达于癌细胞上和/或发现与癌细胞相关并从而提供对癌症具有优先性或特异性的靶标的生物分子(例如蛋白质、碳水化合物、糖蛋白等)。举例来说，优先表达可以是与生物体中的任何其它细胞相比的优先表达，或者生物体的特定区域内(例如，特定器官或组织内)的优先表达。本文中所使用的术语“异源二聚化(heterodimerization)”通常是指在形成或不形成两个不同成员之间的共价键的情况下，例如通过络合、缔合或聚集形成两个不同成员(例如，两个不同多肽)之间的异源二聚体的过程。本文中所使用的术语“共价键”通常是指通过共用电子在原子之间形成的化学键。举例来说，共价键可以是极性或非极性的。在某些实施方式中，共价键为二硫键。本文所使用的术语“非共价成对亲和力”通常是指能够通过非共价相互作用(例如，通过离子对、氢键、偶极间相互作用、电荷转移相互作用、π-π相互作用、阳离子-π-电子相互作用、范德华相互作用以及分散相互作用、疏水性(亲脂性)相互作用、络合物形成(例如过度金属阳离子的络合物形成)或这些相互作用的组合)彼此结合的二聚化序列或异源二聚化序列。本文所使用的术语“连接子(linker)”通常是指连结(connect)或连接(link)两个多肽序列(例如连接两个多肽域)的合成氨基酸序列。连接子可以通过肽键连接两个氨基酸序列。在某些实施方式中，本申请的连接子将生物活性部分连接到直链序列中的第二部分。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换地用于指代任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是直链的或支链的，其可以包括经修饰氨基酸，且可能被非氨基酸打断。所述术语还涵盖已例如通过二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它处理(例如与标记组分偶联)进行修饰的氨基酸聚合物。所述术语可以应用于其中的一个或多个氨基酸残基为对应天然存在氨基酸的人工化学类似物的氨基酸聚合物以及应用于天然存在的氨基酸聚合物。所述术语还可以包含在传统肽键上接合组成多肽的氨基酸的变异体。举例来说，“肽”、“多肽”和“蛋白质”可以是其α碳是通过肽键连接的氨基酸链。因此，所述链的一端(氨基端)处的末端氨基酸可以具有游离氨基，而所述链的另一端(羧基端)处的末端氨基酸可以具有游离羧基。如本文所使用，术语“氨基端”(缩写为n端)通常是指肽的氨基端处的氨基酸上的游离α氨基或指肽内的任何其它位置处的氨基酸的α氨基(参与肽键的氨基)。类似地，术语“羧基端”通常是指肽的羧基端上的游离羧基或肽内的任何其它位置处的氨基酸的羧基。肽还可以包含基本上任何聚氨基酸，包含但不限于肽模拟物，例如由醚而不是酰胺键接合的氨基酸。本文所使用的术语“氨基酸”通常是指天然和/或非天然或合成氨基酸，包含但不限于d或l光学异构体或这两者、氨基酸类似物以及肽模拟物。将标准的单字母或三字母代码用于命名氨基酸。在蛋白质分子(例如多肽或蛋白质)的上下文中使用的术语“变异体”通常是指与天然生物活性蛋白具有序列同源性的蛋白质分子，其至少保留生物活性蛋白的具有治疗活性和/或生物活性的部分。举例来说，变异蛋白可以与参考生物活性蛋白共有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列一致性(identity)。在某些实施方式中，“变异体”可以包含例如通过定点诱变、编码基因合成、插入而有意地修饰或通过突变无意地修饰的蛋白质。术语“偶联(conjugated)”、“连接(linked)”和“融合(fused/fusion)”在本文中可互换使用，且通常是指两种或多种化学元素、序列或成分例如通过包含化学偶联或重组方式的方式接合在一起。举例来说，启动子或增强子在实现编码序列的转录时可操作地连接到所述序列。通常，“可操作地连接”意指连接的dna序列是相连的并处于阅读相或框架内。“框内融合”是指两个或多个开放阅读框(orf)接合以按维持原始orf的正确阅读框的方式形成相连的较长orf。因此，所得的“融合多肽”是含有对应于由原始orf编码的多肽的两个或多个片段(这些片段在自然界中一般不会如此接合)的单一蛋白质。“融合位点”是指两个或多个片段接合在一起时所处的序列。在一些情况下，融合位点可以是与所述两个或多个片段在其中进行接合的序列一致的序列。在一些情况下，融合位点可以进一步包括与所述两个或多个片段在其中进行接合的序列均不一致的空段。在多肽的上下文中，“直链序列”或“序列”为多肽中的氨基酸在氨基端到羧基端方向上的顺序，其中所述序列中紧挨彼此的残基在所述多肽的一级结构中是相连的。“部分序列”为形成已知在一个或两个方向上包括额外残基的多肽部分的直链序列。术语“多核苷酸”、“核酸”、“核苷酸”和“寡核苷酸”在本文中可互换使用，且其通常是指具有任何长度的核苷酸的聚合形式，即脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其类似物。多核苷酸可具有任何三维结构并且可以执行任何已知或未知功能。以下为多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段的编码或非编码区、根据连接分析定义的基因位(基因座)、外显子、内含子、信使rna(mrna)、转移rna、核糖体rna、核酶、cdna、重组多核苷酸、支链多核苷酸、质粒、载体、具有任何序列的分离dna、具有任何序列的分离rna、核酸探针和引物。多核苷酸可以包括经修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，对核苷酸结构的修饰可以在聚合物组装之前或之后给予。核苷酸的序列可能由非核苷酸组分打断。多核苷酸可以在聚合后例如通过与标记组分缀合而进一步予以修饰。术语“基因”和“基因片段”在本文中可互换使用且通常是指含有至少一个能够在转录和转译后编码特定蛋白质的开放阅读框的多核苷酸。基因或基因片段可以是基因组或cdna，只要多核苷酸含有至少一个可以覆盖整个编码区或其区段的开放阅读框即可。“融合基因”为由至少两个连接在一起的异源多核苷酸构成的基因。本文所使用的术语“抗体”通常是指包括一或多种实质上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因的片段编码的多肽的蛋白质。免疫球蛋白基因可以包含κ、λ、α、γ、δ、ε、μ恒定区基因以及无数免疫球蛋白可变区基因。如本文所使用，轻链可以分类为κ轻链或λ轻链。重链可以分类为γ、μ、α、δ或ε重链，其进而分别定义免疫球蛋白类别igg、igm、iga、igd和ige。本申请中使用的抗体可以具有包括四聚体的结构单位。每一个四聚体可以由两个相同的多肽链对构成，每一对具有一个“轻”链(约25kd)和一个“重”链(约50到70kd)。每一条链的n端可以定义具有约100至110或更多个主要负责抗原识别的氨基酸的可变区。本文所使用的术语“轻链可变区”(vl)和“重链可变区”(vh)通常分别指代轻链和重链的所述区。抗体可能以完整免疫球蛋白形式或以通过由各种肽酶消化产生或重新表达的许多充分表征的片段形式存在。因此，举例来说，胃蛋白酶可以在铰链区中的二硫键下消化抗体以产生f(ab)’2(fab的二聚体，fab本身为通过二硫键接合到vh-ch1的轻链)。f(ab)’2可以在温和条件下还原以打破铰链区中的二硫键，从而将(fab’)2二聚体转化成fab’单体。fab’单体实质上为具有铰链区的部分的fab(关于其它抗体片段的更详细描述，参见fundamentalimmunology，w.e.paul编，ravenpress，n.y.(1993))。虽然依据完整抗体的消化而定义了各种抗体片段，但本领域的普通技术人员将了解，这些fab’片段可以以化学方式或通过利用重组dna方法重新合成。因此，本文所使用的术语抗体还可以包含通过修饰完整抗体产生的或使用重组dna方法重新合成的抗体片段，包含但不限于fab’2、igg、igm、iga、ige、scfv、dab、纳米抗体(nanobody)、单抗体(unibody)和双抗体(diabody)。在某些实施方式中，所述抗体包含但不限于fab’2、igg、igm、iga、ige以及单链抗体，例如其中可变重链与可变轻链(直接地或通过肽连接子)接合在一起以形成相连多肽的单链fv(scfv)抗体。本文所使用的术语“抗原结合位点”或“结合部分”通常是指参与抗原结合的抗体部分。抗原结合位点可以由重(“h”)链和/或轻(“l”)链的n端可变(“v”)区的氨基酸残基形成。重链和轻链的v区内的三个高度变化的段被称为“高变区”，其插入称为“框架区”或“fr”的多个保守侧接段之间。因此，本文所使用的术语“fr”通常是指天然地在免疫球蛋白中的高变区之间和附近发现的氨基酸序列。在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中相对于彼此进行设置以形成抗原结合“表面”。这个表面可以介导靶抗原的识别和结合。重链和轻链中的每一个的三个高变区被称为“互补决定区”或“cdr”并且例如通过kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白质序列(sequencesofproteinsofimmunologicalinterest)》,第4版，美国卫生及公共服务部(u.s.dept.healthandhumanservices),公共卫生服务(publichealthservices),马里兰州贝塞斯达(bethesda,md.)(1987)表征。本文中所使用的术语“同源性(homology)”，“同源的(homologous)”或“序列一致性”通常是指两个或多个多核苷酸序列之间或两个或多个多肽序列之间的序列相似性或可互换性。当使用程序(例如，embossneedle或bestfit)来确定两个不同氨基酸序列之间的序列一致性、相似性或同源性时，可使用默认设置，或可选择适当打分矩阵(例如blosum45或blosum80)来优化一致性、相似性或同源性得分。在某些实施方式中，同源的多核苷酸为在严格条件下杂交的多核苷酸且与那些序列相比具有至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％及甚至100％的序列一致性。当相当长度的序列最佳地对准时，同源的多肽具有至少80％，或至少90％，或至少95％，或至少97％，或至少98％的序列一致性，或具有至少99％的序列一致性。术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以实现预期应用(包含但不限于疾病治疗)的组合物的量。治疗有效量可以取决于预期应用(例如体外或体内)或正在治疗的个体和疾病状况(例如可以由本领域的普通技术人员容易地确定的个体的体重和年龄、疾病状况的严重程度、施用方式等)而变化。术语还可能适用于将诱导靶细胞中的特定反应(例如靶基因诱导、增殖和/或细胞凋亡)的剂量。具体剂量将取决于所选的特定化合物、依循的给药方案、是否与其它化合物结合投予、投予时间、所投予到的组织以及进行携带的实体递送系统而变化。术语“治疗(treatment或treating)”或“减轻(palliating)”或“改善(ameliorating)”在本文中可互换使用，且是指获得有益或所需结果(包含但不限于治疗效益和/或预防效益)的途径。如本文所使用，治疗效益通常是指根治正在治疗的潜在病症或降低其严重程度。而且，如下达到治疗效益：根治与潜在病症相关的一个或多个生理症状、降低其严重程度或降低其发病率以使得尽管个体可能仍受到潜在病症的困扰，但在个体内观察到改善。为了实现预防效益，可以向处于患上特定疾病的风险下的个体或向报告疾病的一个或多个生理症状但可能尚未进行所述疾病的诊断的个体投予组合物。本文所使用的术语“治疗作用”通常涵盖上文所述的治疗效益和/或预防效益。预防作用包含延迟或消除疾病或病况的出现，延迟或消除疾病或病况的症状的发作，减缓、停止或逆转疾病或病况的进展，或其任何组合。本文所使用的术语“共同施用”、“组合施用”、“组合使用”和其语法等效物通常涵盖向个体投予两种或多种药剂或疗法以使得药剂和/或其代谢物或疗法都在个体中存在和/或起作用。共同投予包含以单独的组合物或形式同时施用、以单独的组合物或形式在不同时间点施用，或以存在两种药剂的组合物施用。本文所使用的术语“药剂”通常是指生物、药物或化学化合物或其它部分。非限制性实例包含简单或复杂有机或无机分子、肽、蛋白质、寡核苷酸、抗体、抗体衍生物、抗体片段、维生素衍生物、碳水化合物、毒素、化疗化合物或能够产生/发射辐射的药剂。本文所使用的术语“白介素”通常是指能够促进t和/或b淋巴细胞和/或造血细胞的发育与分化的分泌性蛋白或信号传导分子。白介素可以通过辅助cd4t淋巴细胞以及通过单核细胞、巨噬细胞和内皮细胞合成。如本文所使用，白介素(il)可以包含il-1、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、il-9、il-10、il-11、il-12、il-13、il-14、il-15、il-16、il-17、il-18、il-19、il-20、il-21、il-22、il-23、il-24、il-25、il-26、il-27、il-28、il-29、il-30、il-31、il-32、il-33、il-34、il-35和/或il-36。如本文所使用，术语“白介素”可以包含实质上维持对应野生型白介素的生物活性(例如具有的生物活性为对应野生型白介素的生物活性的至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或甚至至少100％)的全长白介素或其片段(例如截短形式)或变异体。本文所使用的白介素可以来自任何哺乳动物物种。在某些实施方式中，白介素来自选自下组的物种：人类、马、牛、鼠类、猪、兔、猫、狗、大鼠、山羊、绵羊和非人类灵长动物。在某些实施方式中，白介素可以呈突变形式，例如与其受体的亲和力增加或减少。本文所使用的术语“个体”通常是指人类或非人类动物，包含但不限于猫、狗、马、猪、奶牛、绵羊、山羊、兔、小鼠、大鼠或猴。本文所使用的术语“egfr家族成员”通常是指表皮生长因子受体家族的成员。举例来说，其可为erbb-1(还称为表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor；egfr))、erbb-2(在人类中还称为her2，且在啮齿动物中称为neu)、erbb-3(还称为her3)和/或erbb-4(还称为her4)。抗egfr家族抗体的实例包含但不限于以下抗体中的一个或多个：c6.5、c6ml3-9、c6mh3-b1、c6-b1d2、f5、her3.a5、her3.f4、her3.h1、her3.h3、her3.e12、her3.b12、egfr.e12、egfr.c10、egfr.b11、egfr.e8、her4.b4、her4.g4、her4.f4、her4.a8、her4.b6、her4.d4、her4.d7、her4.d11、her4.d12、her4.e3、her4.e7、her4.f8和her4.c7等，还参见例如，美国专利公开us2006/0099205a1和us2004/0071696a1，所述美国专利公开以引用的方式并入本文中。本文所使用的术语“抗her2/neu抗体”通常是指特异性地或优先地结合her2/neu受体的抗体。举例来说，抗her2/neu抗体或抗her2抗体可为曲妥珠单抗(trastuzumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)，或其抗原结合片段。本文所使用的术语“抗egfr抗体”通常是指特异性地或优先地结合egfr的抗体。在一些情况下，抗egfr抗体可结合到突变形式的egfr(例如，egfr变异体iii(还被称为egfrviii)，其为egfr的最常见胞外域突变，这一突变导致egfr基因的第2到7外显子的缺失，其由具有非配体依赖性固有活性的截短胞外域表征)。举例来说，抗egfr抗体可为西妥昔单抗、mab806，或其抗原结合片段。本文所使用的术语“抗fap抗体”通常是指特异性地或优先地结合fap的抗体。本文所使用的术语“fap”通常是指成纤维细胞活化蛋白(fibroblastactivationprotein；fap)。fap存在于肿瘤基质成纤维细胞中且在细胞表面中起作用。它是一种为ii型丝氨酸蛋白酶家族的成员且具有二肽基肽酶和胶原酶活性的膜丝氨酸肽酶。举例来说，抗fap抗体可为抗体28h1或其抗原结合片段。在某些实施方式中，抗fap抗体为抗体28h1。本文所使用的术语“成员”通常是指为免疫缀合物的一个组分的多肽、亚基或部分。本文所使用的术语“fc域”通常是指抗体重链的fc部分或fc片段。举例来说，其可指代能够结合fc受体的免疫球蛋白重链恒定区的羧基端部分，或其类似物或部分。众所周知，每一个免疫球蛋白重链恒定区包括四个或五个域。所述域如下依序命名：ch1-铰链-ch2-ch3(-ch4)。ch4以igm形式存在，其不具有铰链区。用于本申请中的免疫球蛋白重链恒定区可以包括免疫球蛋白铰链区，并且还可以包含ch3域。举例来说，免疫球蛋白重链恒定区可以包括免疫球蛋白铰链区、ch2域和ch3域。在某些实施方式中，根据本申请的fc域由铰链-ch2-ch3域组成。本文所使用的术语“fc亚基”通常是指fc域的组分。举例来说，fc域可由两个或多个成员形成，每一成员可被视为一个fc亚基。如本文中所使用，术语“与…络合”通常是指分子(例如，抗体)的一个成员/亚基与另一个成员/亚基的缔合(例如结合)。举例来说，轻链可与重链络合以形成靶向部分。本文所使用的术语“结合特异性”通常是指特异性结合(例如，与之免疫反应)给定靶标(但不结合或基本上不结合非靶标)的能力。本申请的靶向部分可以是单特异性的且含有一个或多个特异性结合靶标的结合位点，或可以是多特异性的(例如双特异性或三特异性)且含有两个或多个特异性结合相同或不同靶标的结合位点。本文所使用的术语“与…缔合”或“使得与…缔合”通常是指一个实体与另一个实体有物理缔合或接触。举例来说，免疫缀合物的第一成员可以共价地或非共价地“与第二成员缔合”。在某些实施方式中，免疫缀合物的第一成员通过界面与第二成员缔合，所述界面是由分别来自第一成员和第二成员的氨基酸残基(即界面残基)形成的。本文所使用的术语“修饰”通常是指对肽主链(例如氨基酸序列)的任何处理或对多肽的任何翻译后修饰(例如糖基化)。举例来说，修饰是相对于对应野生型多肽的序列而言的。修饰可以是一个或多个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或大于10个)的取代、添加和/或缺失。本文所使用的术语“融合蛋白”通常是指如下多肽，其包括多肽的氨基酸序列或替代地由所述氨基酸序列组成，所述氨基酸序列直接或间接地(例如通过连接子)与异源多肽(即与后一多肽或其域无关的多肽)的氨基酸序列融合。本文所使用的术语“c端”通常是指多肽的羧基端。本文所使用的术语“n端”通常是指多肽的氨基端。本文所使用的术语“免疫球蛋白”通常是指由一个或多个实质上由免疫球蛋白基因编码的多肽组成的蛋白质。已识别的免疫球蛋白基因包含κ、λ、α、γ(igg1、igg2、igg3、igg4)、δ、ε和μ恒定区基因以及无数免疫球蛋白可变区基因。一种形式的免疫球蛋白构成抗体的基本结构单位。这种形式为四聚体且由两对相同的免疫球蛋白链组成，每一对具有一个轻链和一个重链。在每一对中，轻链可变区和重链可变区共同负责结合抗原，而恒定区负责抗体效应功能。除抗体以外，免疫球蛋白可以以包含例如fv、fab、fab’和(fab’)2的各种其它形式存在。本文所使用的术语“框内融合”通常是指接合两个或多个开放阅读框(orf)以按维持原始orf的正确阅读框的方式形成相连的较长orf。本文所使用的术语“氨基酸取代”通常是指多肽的特定位置处的一个氨基酸由另一氨基酸置换。本文所使用的术语“kabat编号的eu索引”通常是指根据kabat等人(1971)ann.nyacad,sci.190:382-391和kabat、e.a.等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列》，第五版，美国卫生及公共服务部,nih第91-3242号出版物的对应于氨基酸序列的eu编号的索引。术语“分离的多核苷酸”和“分离的核酸”在此可以互换使用，且通常是指从其天然环境分离的或人工合成的具有任何长度的聚合形式的核苷酸，即脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。本文所使用的术语“药学上可接受的赋形剂”通常是指与药物投予相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、等强吸收延迟剂等。本文所使用的术语“细胞毒剂”通常是指抑制或防止细胞功能且最终导致细胞破坏和/或细胞死亡，尤其是肿瘤细胞死亡的物质或方法。细胞毒剂可包含放射性同位素、化疗剂，和毒素，例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，或其片段。术语“免疫原性细胞死亡”和“免疫原性细胞凋亡”在本文中可以互换使用，且通常是指一种细胞死亡的形式，其通过活化例如树突状细胞(dendriticcell；dc)且随后活化特异性t细胞反应而诱导高效抗肿瘤免疫反应。免疫原性细胞死亡可由分泌损伤相关分子模式(damage-associatedmolecularpattern；damp)表征。damp可包含钙网蛋白(crt)、热休克蛋白(hsp)、分泌性二性霉素b(hmgb1)、atp等。crt通常在内质网(endoplasmicreticulum；er)腔中，且可在诱导免疫原性细胞凋亡之后易位到濒死细胞的表面，在所述表面其对于巨噬细胞来说充当“吃我(eatme)”信号。hsp包括hsp70和hsp90，其在应激状况下还可易位到细胞质膜。hmgb1被视为晚凋亡标记且其释放到胞外空间似乎为树突状细胞的最佳释放和呈现肿瘤抗原所需。atp在分泌且诱导对细胞凋亡位点的吸引时可充当用于单核细胞的“找到我(find-me)”信号。本文所使用的术语“烷化剂”通常是指最早且最常用的化疗药物类别，其通过直接破坏dna且防止癌细胞繁殖而起作用。其通常为细胞周期非特异性的，且可在细胞周期的任何期中杀死癌细胞。烷化剂的实例可包含环磷酰胺。本文所使用的术语“抗代谢物”通常是指干扰dna和rna生长的化疗剂。其通常为细胞周期特异性的，且在细胞分裂的特异性期中杀死癌症细胞。抗代谢物的实例可包含卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞和5-fu。本文所使用的术语“蒽环类药物”通常是指一类最初来源于链霉菌属的药剂，其可用于癌症化疗。蒽环类药物可干扰dna复制所需的酶。其可为细胞周期非特异性的，且可用于治疗多种癌症。蒽环类药物可包含红芳香聚酮类化合物，其由于苷元的结构差异和所连接的不同糖残基而以多种形式存在。蒽环类药物的实例可包含柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、依达比星、戊柔比星、博来霉素和丝裂霉素c。本文所使用的术语“植物生物碱”通常是指可抑制或防止有丝分裂或抑制酶产生细胞繁殖所需的蛋白质。大多数植物生物碱为细胞周期特异性的，但可在所有期中导致损伤。植物生物碱的实例可包括紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。本文所使用的术语“辐射剂”通常是指能够产生和/或发射一种形式的辐射(例如，电离辐射)的药剂。辐射剂的实例可包含放射性同位素和包括放射性同位素的药剂。放射性同位素可为由具有不稳定原子核的原子组成的元素的放射性形式，其可经历放射性衰变到稳定形式，发射特性α、β或γ辐射。术语“辐射治疗”和“放疗”在此可以互换使用，且通常是指一种采用电离辐射(例如，通过x射线发生器或例如放射性同位素的其它能量源(例如，γ、β或α发射体)发射)来控制或杀死癌细胞的治疗形式。本文所使用的术语“分次辐射治疗”通常是指具有分成多个级分(或剂量)的剂量的辐射治疗，其中一个级分(或剂量)可包括与另一级分(或剂量)相同的剂量或不同的剂量。本文所使用的术语“铂类化合物”通常是指包括铂或其衍生物的药剂(例如，化疗药物)。铂类化合物的实例可包括卡铂、顺铂和奥沙利铂。包括免疫缀合物和细胞毒剂的组合物一方面，本申请提供一种包括免疫缀合物和细胞毒剂的组合物。免疫缀合物可包括1)一个或多个白介素，和2)由第一fc亚基和第二fc亚基组成的fc域，第一fc亚基与第二fc亚基缔合以形成二聚体。一个或多个白介素可与fc域融合。细胞毒剂可能能够诱导免疫原性细胞死亡。对于根据本申请的免疫缀合物，一个或多个白介素中的至少一个(例如il10)可与fc域的氨基端氨基酸融合(例如，在框内)。免疫缀合物可包括两个或多个白介素。在某些实施方式中，两个或多个白介素中的至少两个与fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，白介素中的一个或多个通过肽连接子与fc域融合(例如，在框内)。在某些实施方式中，两个或多个白介素中的至少两个通过肽连接子彼此融合(例如，在框内)以形成白介素二聚体。白介素二聚体中的至少一个可与fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，两个或多个白介素是同一白介素的两个或多个拷贝。举例来说，两个或多个白介素是il10的两个或多个拷贝。因此，在某些实施方式中，两个il10在框内彼此融合(例如，经由肽连接子)以形成il10二聚体，随后，il10二聚体的羧基端可融合(例如，在框内，例如经由肽连接子)到fc域的氨基端氨基酸。连接子可以是包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多氨基酸的肽。举例来说，所述连接子可以包括1至10个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10更多10个氨基酸)、1至15个氨基酸(例如，1至11、12、13、14、15个氨基酸)、1至20个氨基酸、1至30个氨基酸或更多氨基酸。在某些实施方式中，连接子包括如seqidno:49中所示的氨基酸序列。所述免疫缀合物可进一步包括与fc域融合的靶向部分，其中靶向部分可对于肿瘤抗原展现结合特异性。所述肿瘤抗原可为特异性地表达或存在于肿瘤环境中或肿瘤细胞的表面上的任何免疫原性实体或其部分。在某些实施方式中，肿瘤抗原选自下组：egfr家族成员(例如egfr或her2/neu)和fap。所述靶向部分可与fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，靶向部分通过肽连接子或免疫球蛋白铰链区与fc域融合。所述靶向部分可包括抗体的抗原结合域，例如，抗体的抗原结合域可为fab部分、域抗体或scfv部分。在某些实施方式中，抗体的抗原结合域为fab部分。抗体可选自下组：egfr抗体、抗her2抗体和抗fap抗体。在某些实施方式中，抗体为抗egfr抗体。举例来说，抗egfr抗体可为西妥昔单抗。在某些实施方式中，靶向部分包括西妥昔单抗的重链cdr1-3、西妥昔单抗的轻链cdr1-3、西妥昔单抗的重链可变区、西妥昔单抗的轻链可变区，和/或西妥昔单抗的轻链。举例来说，靶向部分可为包括西妥昔单抗的重链可变区和轻链可变区两者的fab部分。举例来说，所述靶向部分可包括重链cdr，其具有与西妥昔单抗的对应重链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。替代地或另外，靶向部分可包括轻链cdr，其具有与西妥昔单抗的对应轻链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括重链可变区，其具有与西妥昔单抗的对应重链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链可变区，其具有与西妥昔单抗的对应轻链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链，其具有与西妥昔单抗的对应轻链中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。所述西妥昔单抗的重链cdr1-3分别如seqidno:60(cdr1)、seqidno:61(cdr2)和seqidno:62(cdr3)所示。西妥昔单抗的轻链cdr1-3分别如seqidno:56(cdr1)、seqidno:57(cdr2)和seqidno:58(cdr3)所示。西妥昔单抗的重链可变区如seqidno:63所示。西妥昔单抗的轻链可变区如seqidno:59所示述。在某些实施方式中，所述抗体为抗her2抗体。举例来说，抗her2抗体可为曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。在某些实施方式中，靶向部分包括曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的重链cdr1-3、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的轻链cdr1-3、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的重链可变区、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的轻链可变区和/或曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的轻链。举例来说，靶向部分可为包括曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的重链可变区和轻链可变区两者的fab部分。举例来说，靶向部分可包括重链cdr，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应重链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。替代地或另外，靶向部分可包括轻链cdr，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应轻链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括重链可变区，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应重链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链可变区，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应轻链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应轻链中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。曲妥珠单抗的重链cdr1-3分别如seqidno:68(cdr1)、seqidno:69(cdr2)和seqidno:70(cdr3)所示。曲妥珠单抗的轻链cdr1-3分别如seqidno:64(cdr1)、seqidno:65(cdr2)和seqidno:66(cdr3)所示。曲妥珠单抗的重链可变区如seqidno:71所示。曲妥珠单抗的轻链可变区如seqidno:67所示。帕妥珠单抗的重链cdr1-3分别如seqidno:88(cdr1)、seqidno:89(cdr2)和seqidno:90(cdr3)所示。帕妥珠单抗的轻链cdr1-3分别如seqidno:84(cdr1)、seqidno:85(cdr2)和seqidno:86(cdr3)所示。帕妥珠单抗的重链可变区如seqidno:91所示。帕妥珠单抗的轻链可变区如seqidno:87所示。在某些实施方式中，抗体为抗fap抗体。举例来说，抗fap抗体可为28h1。在某些实施方式中，靶向部分包括28h1的重链cdr1-3、28h1的轻链cdr1-3、28h1的重链可变区、28h1的轻链可变区和/或28h1的轻链。举例来说，靶向部分可为包括28h1的重链可变区和轻链可变区两者的fab部分。举例来说，靶向部分可包括重链cdr，其具有与28h1的对应重链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。替代地或另外，靶向部分可包括轻链cdr，其具有与28h1的对应轻链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括重链可变区，其具有与28h1的对应重链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链可变区，其具有与28h1的对应轻链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链，其具有与28h1的对应轻链中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。28h1的重链cdr1-3分别如seqidno:76(cdr1)、seqidno:77(cdr2)和seqidno:78(cdr3)所示。28h1的轻链cdr1-3分别如seqidno:72(cdr1)、seqidno:73(cdr2)和seqidno:74(cdr3)所示。28h1的重链可变区如seqidno:79所示。28h1的轻链可变区是如seqidno:75所示。对于根据本申请的免疫缀合物，fc域可为iggfc域。igg可选自下组：igg1、igg2、igg3和igg4。在某些实施方式中，igg为人类igg1，fc域为人类igg1fc域(野生型或经修饰)。在某些实施方式中，免疫缀合物为由两个相同成员组成的蛋白质同源二聚体。两个相同成员中的每一个可包括与fc域的亚基融合(例如，在框内，例如经由肽连接子)的一个或多个白介素(例如，il10)。举例来说，一个或多个白介素的羧基端可与fc亚基的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，一个白介素(例如，il10)的羧基端与所述两个fc亚基中的一个的氨基端氨基酸框内融合，以形成同源二聚体的一个成员，两个相同的此类成员经由两个fc亚基之间的相互作用彼此缔合以形成同源二聚体(例如，如图8a中所示出)。在某些实施方式中，两个白介素(例如，两个il10)在框内彼此融合(例如，经由肽连接子)以形成白介素二聚体。随后，白介素二聚体的羧基端与所述两个fc亚基中的一个的氨基端氨基酸框内融合，以形成同源二聚体的一个成员，两个相同的此类成员经由两个fc亚基之间的相互作用彼此缔合以形成同源二聚体。在某些实施方式中，免疫缀合物是包括第一成员和与第一成员不同的第二成员的蛋白质异源二聚体，其中第一成员包括第一fc亚基，第二成员包括与第二fc亚基融合的一个或多个白介素，第一fc亚基与第二fc亚基缔合以形成异源二聚体。在某些实施方式中，在第二成员中，一个或多个白介素中的至少一个与第二fc亚基的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，在第二成员中，一个或多个白介素中的至少两个彼此融合以形成白介素二聚体，白介素二聚体进一步与第二fc亚基的氨基端氨基酸融合。举例来说，两个il10可在框内彼此融合(例如，经由肽连接子，以形成il10二聚体)且随后与第二fc亚基框内融合，以形成蛋白质异源二聚体的第二成员。举例来说，il10二聚体的羧基端可与第二fc亚基的氨基端氨基酸融合(例如，如图8b和8c中所示)。举例来说，免疫缀合物的第二成员可为融合蛋白，其中第二fc亚基可与白介素框内融合。在某些实施方式中，白介素的羧基端直接或间接地与第二fc亚基的氨基端融合以形成融合蛋白。在某些实施方式中，第二fc亚基经由肽连接子与白介素框内融合。根据本申请的肽连接子可为连接或连接(例如经由肽键)两个多肽序列的合成氨基酸序列。在某些实施方式中，连接子是包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多氨基酸的肽。举例来说，连接子可以包括1至10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多氨基酸)、1至15个氨基酸(例如1至11、12、13、14、15个氨基酸)、1至20个氨基酸、1至30个氨基酸或更多氨基酸。在某些实施方式中，连接子包括如seqidno:41中所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，连接子耐蛋白质水解或基本上耐蛋白质水解。在某些实施方式中，第一成员进一步包括与第一fc亚基融合的靶向部分。举例来说，靶向部分可与第一fc亚基的氨基端氨基酸融合。举例来说，第一成员可包括抗体的fab部分，其羧基端(例如，重链部分的羧基端，例如ch1域或铰链区)与第一fc亚基的氨基端氨基酸融合(例如，如图8c中所示)。在某些实施方式中，蛋白质异源二聚体并不包括任何靶向部分。举例来说，第一成员可仅包括第一fc亚基(例如，如图8b中所示)。在某些实施方式中，第一fc亚基与第二fc亚基相同(例如，野生型人类igg1fc域的亚基)。在某些实施方式中，第一fc亚基不同于第二fc亚基，fc域包括促进第一fc亚基与第二fc亚基之间的异源二聚化的修饰。举例来说，第一fc亚基可以包括第一修饰，第二fc亚基可以包括第二修饰。举例来说，第一修饰可处于第一fc亚基的ch3域中，第二修饰可处于第二fc亚基的ch3域中。举例来说，第一修饰和/或第二修饰分别与其对应野生型fc域的序列相比较。举例来说，第一修饰可包括位置t366处的氨基酸取代，以及选自下组的一个或多个位置处的氨基酸取代：y349、f405、k409、d399、k360、q347、k392和s354，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一修饰包括位置t366处的氨基酸取代以及选自下组的一个或多个位置处的氨基酸取代：y349、f405、k409、d399、k360、q347、k392和s354，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。举例来说，第一修饰所包括的氨基酸取代可以选自下组：y349c、y349d、d399s、f405k、k360e、k409a、k409e、q347e、q347r、s354d、k392d和t366w。在某些实施方式中，第一修饰包括2至5个氨基酸取代。在某些实施方式中，第一修饰包括在选自以下任意一组位置处的氨基酸取代：1)y349和t366；2)y349、t366和f405；3)y349、t366和k409；4)y349、t366、f405、k360和q347；5)y349、t366、f405和q347；6)y349、t366、k409、k360和q347；7)y349、t366、k409和q347；8)t366、k409和k392；9)t366和k409；10)t366、k409、y349和s354；11)t366和f405；12)t366、f405和d399；以及13)t366、f405、y349和s354；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一修饰包括选自以下任意一组的氨基酸取代：1)y349c和t366w；2)y349c、t366w和f405k；3)y349c、t366w和k409e；4)y349c、t366w和k409a；5)y349c、t366w、f405k、k360e和q347e；6)y349c、t366w、f405k和q347r；7)y349c、t366w、k409a、k360e和q347e；8)y349c、t366w、k409a和q347r；9)t366w、k409a和k392d；10)t366w和k409a；11)t366w、k409a和y349d；12)t366w、k409a、y349d和s354d；13)t366w和f405k；14)t366w、f405k和d399s；15)t366w、f405k和y349d；以及16)t366w、f405k、y349d和s354d；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第二修饰包括位置t366、l368和y407处的氨基酸取代以及在选自由d356、d399、e357、f405、k360、k392、k409和q347组成的群组的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第二修饰所包括的氨基酸取代选自由d356c、d399s、e357a、f405k、k360e、k392d、k409a、l368a、l368g、q347e、q347r、t366s、y407a和y407v组成的群组。在某些实施方式中，第二修饰包括4至6个位置处的氨基酸取代。在某些实施方式中，第二修饰包括在选自任何以下群组的一组位置处的氨基酸取代：1)d356、t366、l368、y407和f405；2)d356、t366、l368和y407；3)d356、t366、l368、y407和q347；4)d356、t366、l368、y407、k360和q347；5)d356、t366、l368、y407、f405和q347；6)d356、t366、l368、y407、f405、k360和q347；7)t366、l368、y407、d399和f405；8)t366、l368、y407和f405；9)t366、l368、y407、f405和e357；10)t366、l368、y407和k409；11)t366、l368、y407、k409和k392；以及12)t366、l368、y407、k409和e357；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第二修饰包括选自任何以下群组的一组氨基酸取代：1)d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；2)d356c、t366s、l368a和y407v；3)d356c、t366s、l368a、y407v和q347r；4)d356c、t366s、l368a、y407v、k360e和q347e；5)d356c、t366s、l368a、y407v、f405k和q347r；6)d356c、t366s、l368a、y407v、f405k、k360e和q347e；7)t366s、l368a、y407v、d399s和f405k；8)t366s、l368g、y407a和f405k；9)t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；10)t366s、l368a、y407v和k409a；11)t366s、l368a、y407v、k409a和k392d；12)t366s、l368g、y407a和k409a；13)t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，第一修饰和第二修饰包括选自以下任意一组位置处的氨基酸取代：1)第一修饰：y349和t366；第二修饰：d356、t366、l368、y407和f405；2)第一修饰：y349、t366和f405；第二修饰：d356、t366、l368和y407；3)第一修饰：y349、t366和k409；第二修饰：d356、t366、l368、y407和f405；4)第一修饰：y349、t366、f405、k360和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407和q347；5)第一修饰：y349、t366、f405和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、k360和q347；6)第一修饰：y349、t366、k409、k360和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、f405和q347；7)第一修饰：y349、t366、k409和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、f405、k360和q347；8)第一修饰：t366、k409和k392；第二修饰：t366、l368、y407、d399和f405；9)第一修饰：t366和k409；第二修饰：t366、l368、y407和f405；10)第一修饰：t366、k409和y349；第二修饰：t366、l368、y407、f405和e357；11)第一修饰：t366、k409、y349和s354；第二修饰：t366、l368、y407、f405和e357；12)第一修饰：t366和f405；第二修饰：t366、l368、y407和k409；13)第一修饰：t366、f405和d399；第二修饰：t366、l368、y407、k409和k392；14)第一修饰：t366、f405和y349；第二修饰：t366、l368、y407、k409和e357；15)第一修饰：t366、f405、y349和s354；第二修饰：t366、l368、y407、k409和e357；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，其中第一修饰和第二修饰包括选自任何以下群组的一组氨基酸取代：1)第一修饰：y349c和t366w；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；2)第一修饰：y349c、t366w和f405k；第二修饰：d356c、t366s、l368a和y407v；3)第一修饰：y349c、t366w和k409e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；4)第一修饰：y349c、t366w和k409a；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；5)第一修饰：y349c、t366w、f405k、k360e和q347e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和q347r；6)第一修饰：y349c、t366w、f405k和q347r；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、k360e和q347e；7)第一修饰：y349c、t366w、k409a、k360e和q347e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、f405k和q347r；8)第一修饰：y349c、t366w、k409a和q347r；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、f405k、k360e和q347e；9)第一修饰：t366w、k409a和k392d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、d399s和f405k；10)第一修饰：t366w和k409a；第二修饰：t366s、l368g、y407a和f405k；11)第一修饰：t366w、k409a和y349d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；12)第一修饰：t366w、k409a、y349d和s354d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；13)第一修饰：t366w和f405k；第二修饰：t366s、l368a、y407v和k409a；14)第一修饰：t366w、f405k和d399s；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和k392d；15)第一修饰：t366w和f405k；第二修饰：t366s、l368g、y407a和k409a；16)第一修饰：t366w、f405k和y349d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；17)第一修饰：t366w、f405k、y349d和s354d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，第一修饰包括氨基酸取代t366w和k409a，第二修饰包括氨基酸取代t366s、l368g、y407a和f405k，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。举例来说，第一fc亚基的氨基酸序列可选自seqidno:39、43或47。白介素的氨基酸序列可如seqidno:50或52所示。第二fc亚基的氨基酸序列可选自seqidno:50。在某些实施方式中，本申请的免疫缀合物是蛋白质异源二聚体，第二成员的氨基酸序列可选自seqidno:50。所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂可选自下组：烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、铂类化合物和辐射剂或辐射治疗。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂或细胞毒疗法包括选自环磷酰胺的烷化剂。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂或细胞毒疗法包括选自下组的铂类化合物：卡铂、顺铂和奥沙利铂。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的抗代谢物：卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞和5-fu。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的蒽环类药物：博来霉素、阿霉素、表阿霉素、柔红霉素、依达比星、戊柔比星和丝裂霉素c。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂或细胞毒疗法包括阿霉素。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的植物生物碱：紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。所述辐射剂可为能够发射x射线辐射和/或γ射线辐射的药剂(例如，是放射性同位素或包括放射性同位素)。在某些实施方式中，辐射剂能够发射至少一个剂量的x射线辐射。每一剂量的x射线辐射可具有约50gy或更低的剂量(例如约45gy或更低、约40gy或更低、约35gy或更低、约30gy或更低、约25gy或更低、约20gy或更低、约15gy或更低、约14gy或更低、约13gy或更低、约12gy或更低、约11gy或更低、约10gy或更低、约9gy或更低、约8gy或更低、约7gy或更低、约6gy或更低、约5gy或更低或约4gy或更低)。在某些实施方式中，每一剂量的x射线辐射具有约6至15gy的剂量，例如6至14gy、6至13gy、6至12gy、6至11gy、6至10gy、6至9gy、6至8gy、6至7gy、7至15gy、7至14gy、7至13gy、7至12gy、7至11gy、7至10gy、7至9gy或7至8gy。在某些实施方式中，辐射剂能够发射至少一个剂量的γ射线辐射。每一剂量的γ射线辐射可具有约50gy或更低的剂量(例如约45gy或更低、约40gy或更低、约35gy或更低、约30gy或更低、约25gy或更低、约20gy或更低、约15gy或更低、约14gy或更低、约13gy或更低、约12gy或更低、约11gy或更低、约10gy或更低、约9gy或更低、约8gy或更低、约7gy或更低、约6gy或更低、约5gy或更低或约4gy或更低)。在某些实施方式中，每一剂量的γ射线辐射具有约6至15gy的剂量，例如6至14gy、6至13gy、6至12gy、6至11gy、6至10gy、6至9gy、6至8gy、6至7gy、7至15gy、7至14gy、7至13gy、7至12gy、7至11gy、7至10gy、7至9gy或7至8gy。在某些实施方式中，辐射剂能够发射约2至15个剂量(或级分)(例如至少2个剂量、至少3个剂量、至少4个剂量、至少5个剂量、至少6个剂量、至少7个剂量、至少8个剂量、至少9个剂量、至少10个剂量、至少11个剂量、至少12个剂量或更多，例如2至14个剂量、2至13个剂量、2至12个剂量、2至11个剂量、2至10个剂量、2至9个剂量、2至8个剂量、2至7个剂量、2至6个剂量、2至5个剂量、2至4个剂量、3至8个剂量、3至7个剂量或4至10个剂量)的x射线辐射或γ射线辐射。组合物的不同组分可独立地包装(例如，在施用之前并不彼此混合)或预先混合且包装在同一包装单元中。本申请的组合物可为药物组合物，可进一步包括药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂的实例包含但不限于惰性固体稀释剂和填充剂、稀释剂、无菌水溶液以及各种有机溶剂、促渗剂、增溶剂和佐剂。在某些实施方式中，药物组合物调配为用于经口施用、静脉内施用、肌肉内施用、肿瘤位点原位施用、吸入、直肠施用、阴道施用、经皮施用或经皮下储集施用。本申请的组合物可包括治疗有效量的活性剂(例如，免疫缀合物和细胞毒剂)。治疗有效量为本申请组合物能够预防和/或治愈(至少部分)患有或有风险患上病况或病症(例如癌症)的个体的所述病况或病症和/或其任何并发症的量。所含活性剂的具体量/浓度可根据施用方法和患者的需求而变化，可以基于例如体积、粘稠度和/或患者的体重等确定。包括免疫缀合物和细胞毒剂的组合物一方面，本申请提供一种包括免疫缀合物和细胞毒剂的组合物。免疫缀合物可包括1)一个或多个白介素，和2)由第一fc亚基和第二fc亚基组成的fc域，第一fc亚基与第二fc亚基缔合以形成二聚体。一个或多个白介素可与fc域融合。细胞毒剂可能能够诱导免疫原性细胞死亡。对于根据本申请的免疫缀合物，一个或多个白介素中的至少一个(例如il10)可与fc域的氨基端氨基酸融合(例如，在框内)。免疫缀合物可包括两个或多个白介素。在某些实施方式中，两个或多个白介素中的至少两个与fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，白介素中的一个或多个通过肽连接子与fc域融合(例如，在框内)。在某些实施方式中，两个或多个白介素中的至少两个通过肽连接子彼此融合(例如，在框内)以形成白介素二聚体。白介素二聚体中的至少一个可与fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，两个或多个白介素是同一白介素的两个或多个拷贝。举例来说，两个或多个白介素是il10的两个或多个拷贝。因此，在某些实施方式中，两个il10在框内彼此融合(例如，经由肽连接子)以形成il10二聚体，随后，il10二聚体的羧基端可融合(例如，在框内，例如经由肽连接子)到fc域的氨基端氨基酸。连接子可以是包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多氨基酸的肽。举例来说，所述连接子可以包括1至10个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10更多10个氨基酸)、1至15个氨基酸(例如，1至11、12、13、14、15个氨基酸)、1至20个氨基酸、1至30个氨基酸或更多氨基酸。在某些实施方式中，连接子包括如seqidno:49中所示的氨基酸序列。所述免疫缀合物可进一步包括与fc域融合的靶向部分，其中靶向部分可对于肿瘤抗原展现结合特异性。所述肿瘤抗原可为特异性地表达或存在于肿瘤环境中或肿瘤细胞的表面上的任何免疫原性实体或其部分。在某些实施方式中，肿瘤抗原选自下组：egfr家族成员(例如egfr或her2/neu)和fap。所述靶向部分可与fc域的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，靶向部分通过肽连接子或免疫球蛋白铰链区与fc域融合。所述靶向部分可包括抗体的抗原结合域，例如，抗体的抗原结合域可为fab部分、域抗体或scfv部分。在某些实施方式中，抗体的抗原结合域为fab部分。抗体可选自下组：egfr抗体、抗her2抗体和抗fap抗体。在某些实施方式中，抗体为抗egfr抗体。举例来说，抗egfr抗体可为西妥昔单抗。在某些实施方式中，靶向部分包括西妥昔单抗的重链cdr1-3、西妥昔单抗的轻链cdr1-3、西妥昔单抗的重链可变区、西妥昔单抗的轻链可变区，和/或西妥昔单抗的轻链。举例来说，靶向部分可为包括西妥昔单抗的重链可变区和轻链可变区两者的fab部分。举例来说，所述靶向部分可包括重链cdr，其具有与西妥昔单抗的对应重链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。替代地或另外，靶向部分可包括轻链cdr，其具有与西妥昔单抗的对应轻链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括重链可变区，其具有与西妥昔单抗的对应重链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链可变区，其具有与西妥昔单抗的对应轻链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链，其具有与西妥昔单抗的对应轻链中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。所述西妥昔单抗的重链cdr1-3分别如seqidno:60(cdr1)、seqidno:61(cdr2)和seqidno:62(cdr3)所示。西妥昔单抗的轻链cdr1-3分别如seqidno:56(cdr1)、seqidno:57(cdr2)和seqidno:58(cdr3)所示。西妥昔单抗的重链可变区如seqidno:63所示。西妥昔单抗的轻链可变区如seqidno:59所示述。在某些实施方式中，所述抗体为抗her2抗体。举例来说，抗her2抗体可为曲妥珠单抗或帕妥珠单抗。在某些实施方式中，靶向部分包括曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的重链cdr1-3、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的轻链cdr1-3、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的重链可变区、曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的轻链可变区和/或曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的轻链。举例来说，靶向部分可为包括曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的重链可变区和轻链可变区两者的fab部分。举例来说，靶向部分可包括重链cdr，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应重链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。替代地或另外，靶向部分可包括轻链cdr，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应轻链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括重链可变区，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应重链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链可变区，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应轻链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链，其具有与曲妥珠单抗或帕妥珠单抗的对应轻链中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。曲妥珠单抗的重链cdr1-3分别如seqidno:68(cdr1)、seqidno:69(cdr2)和seqidno:70(cdr3)所示。曲妥珠单抗的轻链cdr1-3分别如seqidno:64(cdr1)、seqidno:65(cdr2)和seqidno:66(cdr3)所示。曲妥珠单抗的重链可变区如seqidno:71所示。曲妥珠单抗的轻链可变区如seqidno:67所示。帕妥珠单抗的重链cdr1-3分别如seqidno:88(cdr1)、seqidno:89(cdr2)和seqidno:90(cdr3)所示。帕妥珠单抗的轻链cdr1-3分别如seqidno:84(cdr1)、seqidno:85(cdr2)和seqidno:86(cdr3)所示。帕妥珠单抗的重链可变区如seqidno:91所示。帕妥珠单抗的轻链可变区如seqidno:87所示。在某些实施方式中，抗体为抗fap抗体。举例来说，抗fap抗体可为28h1。在某些实施方式中，靶向部分包括28h1的重链cdr1-3、28h1的轻链cdr1-3、28h1的重链可变区、28h1的轻链可变区和/或28h1的轻链。举例来说，靶向部分可为包括28h1的重链可变区和轻链可变区两者的fab部分。举例来说，靶向部分可包括重链cdr，其具有与28h1的对应重链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。替代地或另外，靶向部分可包括轻链cdr，其具有与28h1的对应轻链cdr1-3中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括重链可变区，其具有与28h1的对应重链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链可变区，其具有与28h1的对应轻链可变区中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。举例来说，靶向部分可包括轻链，其具有与28h1的对应轻链中包括的氨基酸序列至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。28h1的重链cdr1-3分别如seqidno:76(cdr1)、seqidno:77(cdr2)和seqidno:78(cdr3)所示。28h1的轻链cdr1-3分别如seqidno:72(cdr1)、seqidno:73(cdr2)和seqidno:74(cdr3)所示。28h1的重链可变区如seqidno:79所示。28h1的轻链可变区是如seqidno:75所示。对于根据本申请的免疫缀合物，fc域可为iggfc域。igg可选自下组：igg1、igg2、igg3和igg4。在某些实施方式中，igg为人类igg1，fc域为人类igg1fc域(野生型或经修饰)。在某些实施方式中，免疫缀合物为由两个相同成员组成的蛋白质同源二聚体。两个相同成员中的每一个可包括与fc域的亚基融合(例如，在框内，例如经由肽连接子)的一个或多个白介素(例如，il10)。举例来说，一个或多个白介素的羧基端可与fc亚基的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，一个白介素(例如，il10)的羧基端与所述两个fc亚基中的一个的氨基端氨基酸框内融合，以形成同源二聚体的一个成员，两个相同的此类成员经由两个fc亚基之间的相互作用彼此缔合以形成同源二聚体(例如，如图8a中所示出)。在某些实施方式中，两个白介素(例如，两个il10)在框内彼此融合(例如，经由肽连接子)以形成白介素二聚体。随后，白介素二聚体的羧基端与所述两个fc亚基中的一个的氨基端氨基酸框内融合，以形成同源二聚体的一个成员，两个相同的此类成员经由两个fc亚基之间的相互作用彼此缔合以形成同源二聚体。在某些实施方式中，免疫缀合物是包括第一成员和与第一成员不同的第二成员的蛋白质异源二聚体，其中第一成员包括第一fc亚基，第二成员包括与第二fc亚基融合的一个或多个白介素，第一fc亚基与第二fc亚基缔合以形成异源二聚体。在某些实施方式中，在第二成员中，一个或多个白介素中的至少一个与第二fc亚基的氨基端氨基酸融合。在某些实施方式中，在第二成员中，一个或多个白介素中的至少两个彼此融合以形成白介素二聚体，白介素二聚体进一步与第二fc亚基的氨基端氨基酸融合。举例来说，两个il10可在框内彼此融合(例如，经由肽连接子，以形成il10二聚体)且随后与第二fc亚基框内融合，以形成蛋白质异源二聚体的第二成员。举例来说，il10二聚体的羧基端可与第二fc亚基的氨基端氨基酸融合(例如，如图8b和8c中所示)。举例来说，免疫缀合物的第二成员可为融合蛋白，其中第二fc亚基可与白介素框内融合。在某些实施方式中，白介素的羧基端直接或间接地与第二fc亚基的氨基端融合以形成融合蛋白。在某些实施方式中，第二fc亚基经由肽连接子与白介素框内融合。根据本申请的肽连接子可为连接或连接(例如经由肽键)两个多肽序列的合成氨基酸序列。在某些实施方式中，连接子是包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多氨基酸的肽。举例来说，连接子可以包括1至10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多氨基酸)、1至15个氨基酸(例如1至11、12、13、14、15个氨基酸)、1至20个氨基酸、1至30个氨基酸或更多氨基酸。在某些实施方式中，连接子包括如seqidno:41中所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，连接子耐蛋白质水解或基本上耐蛋白质水解。在某些实施方式中，第一成员进一步包括与第一fc亚基融合的靶向部分。举例来说，靶向部分可与第一fc亚基的氨基端氨基酸融合。举例来说，第一成员可包括抗体的fab部分，其羧基端(例如，重链部分的羧基端，例如ch1域或铰链区)与第一fc亚基的氨基端氨基酸融合(例如，如图8c中所示)。在某些实施方式中，蛋白质异源二聚体并不包括任何靶向部分。举例来说，第一成员可仅包括第一fc亚基(例如，如图8b中所示)。在某些实施方式中，第一fc亚基与第二fc亚基相同(例如，野生型人类igg1fc域的亚基)。在某些实施方式中，第一fc亚基不同于第二fc亚基，fc域包括促进第一fc亚基与第二fc亚基之间的异源二聚化的修饰。举例来说，第一fc亚基可以包括第一修饰，第二fc亚基可以包括第二修饰。举例来说，第一修饰可处于第一fc亚基的ch3域中，第二修饰可处于第二fc亚基的ch3域中。举例来说，第一修饰和/或第二修饰分别与其对应野生型fc域的序列相比较。举例来说，第一修饰可包括位置t366处的氨基酸取代，以及选自下组的一个或多个位置处的氨基酸取代：y349、f405、k409、d399、k360、q347、k392和s354，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一修饰包括位置t366处的氨基酸取代以及选自下组的一个或多个位置处的氨基酸取代：y349、f405、k409、d399、k360、q347、k392和s354，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。举例来说，第一修饰所包括的氨基酸取代可以选自下组：y349c、y349d、d399s、f405k、k360e、k409a、k409e、q347e、q347r、s354d、k392d和t366w。在某些实施方式中，第一修饰包括2至5个氨基酸取代。在某些实施方式中，第一修饰包括在选自以下任意一组位置处的氨基酸取代：1)y349和t366；2)y349、t366和f405；3)y349、t366和k409；4)y349、t366、f405、k360和q347；5)y349、t366、f405和q347；6)y349、t366、k409、k360和q347；7)y349、t366、k409和q347；8)t366、k409和k392；9)t366和k409；10)t366、k409、y349和s354；11)t366和f405；12)t366、f405和d399；以及13)t366、f405、y349和s354；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一修饰包括选自以下任意一组的氨基酸取代：1)y349c和t366w；2)y349c、t366w和f405k；3)y349c、t366w和k409e；4)y349c、t366w和k409a；5)y349c、t366w、f405k、k360e和q347e；6)y349c、t366w、f405k和q347r；7)y349c、t366w、k409a、k360e和q347e；8)y349c、t366w、k409a和q347r；9)t366w、k409a和k392d；10)t366w和k409a；11)t366w、k409a和y349d；12)t366w、k409a、y349d和s354d；13)t366w和f405k；14)t366w、f405k和d399s；15)t366w、f405k和y349d；以及16)t366w、f405k、y349d和s354d；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第二修饰包括位置t366、l368和y407处的氨基酸取代以及在选自由d356、d399、e357、f405、k360、k392、k409和q347组成的群组的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第二修饰所包括的氨基酸取代选自由d356c、d399s、e357a、f405k、k360e、k392d、k409a、l368a、l368g、q347e、q347r、t366s、y407a和y407v组成的群组。在某些实施方式中，第二修饰包括4至6个位置处的氨基酸取代。在某些实施方式中，第二修饰包括在选自任何以下群组的一组位置处的氨基酸取代：1)d356、t366、l368、y407和f405；2)d356、t366、l368和y407；3)d356、t366、l368、y407和q347；4)d356、t366、l368、y407、k360和q347；5)d356、t366、l368、y407、f405和q347；6)d356、t366、l368、y407、f405、k360和q347；7)t366、l368、y407、d399和f405；8)t366、l368、y407和f405；9)t366、l368、y407、f405和e357；10)t366、l368、y407和k409；11)t366、l368、y407、k409和k392；以及12)t366、l368、y407、k409和e357；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第二修饰包括选自任何以下群组的一组氨基酸取代：1)d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；2)d356c、t366s、l368a和y407v；3)d356c、t366s、l368a、y407v和q347r；4)d356c、t366s、l368a、y407v、k360e和q347e；5)d356c、t366s、l368a、y407v、f405k和q347r；6)d356c、t366s、l368a、y407v、f405k、k360e和q347e；7)t366s、l368a、y407v、d399s和f405k；8)t366s、l368g、y407a和f405k；9)t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；10)t366s、l368a、y407v和k409a；11)t366s、l368a、y407v、k409a和k392d；12)t366s、l368g、y407a和k409a；13)t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，第一修饰和第二修饰包括选自以下任意一组位置处的氨基酸取代：1)第一修饰：y349和t366；第二修饰：d356、t366、l368、y407和f405；2)第一修饰：y349、t366和f405；第二修饰：d356、t366、l368和y407；3)第一修饰：y349、t366和k409；第二修饰：d356、t366、l368、y407和f405；4)第一修饰：y349、t366、f405、k360和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407和q347；5)第一修饰：y349、t366、f405和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、k360和q347；6)第一修饰：y349、t366、k409、k360和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、f405和q347；7)第一修饰：y349、t366、k409和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、f405、k360和q347；8)第一修饰：t366、k409和k392；第二修饰：t366、l368、y407、d399和f405；9)第一修饰：t366和k409；第二修饰：t366、l368、y407和f405；10)第一修饰：t366、k409和y349；第二修饰：t366、l368、y407、f405和e357；11)第一修饰：t366、k409、y349和s354；第二修饰：t366、l368、y407、f405和e357；12)第一修饰：t366和f405；第二修饰：t366、l368、y407和k409；13)第一修饰：t366、f405和d399；第二修饰：t366、l368、y407、k409和k392；14)第一修饰：t366、f405和y349；第二修饰：t366、l368、y407、k409和e357；15)第一修饰：t366、f405、y349和s354；第二修饰：t366、l368、y407、k409和e357；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，其中第一修饰和第二修饰包括选自任何以下群组的一组氨基酸取代：1)第一修饰：y349c和t366w；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；2)第一修饰：y349c、t366w和f405k；第二修饰：d356c、t366s、l368a和y407v；3)第一修饰：y349c、t366w和k409e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；4)第一修饰：y349c、t366w和k409a；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；5)第一修饰：y349c、t366w、f405k、k360e和q347e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和q347r；6)第一修饰：y349c、t366w、f405k和q347r；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、k360e和q347e；7)第一修饰：y349c、t366w、k409a、k360e和q347e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、f405k和q347r；8)第一修饰：y349c、t366w、k409a和q347r；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、f405k、k360e和q347e；9)第一修饰：t366w、k409a和k392d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、d399s和f405k；10)第一修饰：t366w和k409a；第二修饰：t366s、l368g、y407a和f405k；11)第一修饰：t366w、k409a和y349d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；12)第一修饰：t366w、k409a、y349d和s354d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；13)第一修饰：t366w和f405k；第二修饰：t366s、l368a、y407v和k409a；14)第一修饰：t366w、f405k和d399s；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和k392d；15)第一修饰：t366w和f405k；第二修饰：t366s、l368g、y407a和k409a；16)第一修饰：t366w、f405k和y349d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；17)第一修饰：t366w、f405k、y349d和s354d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。在某些实施方式中，第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，第一修饰包括氨基酸取代t366w和k409a，第二修饰包括氨基酸取代t366s、l368g、y407a和f405k，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。举例来说，第一fc亚基的氨基酸序列可选自seqidno:39、43或47。白介素的氨基酸序列可如seqidno:50或52所示。第二fc亚基的氨基酸序列可选自seqidno:50。在某些实施方式中，本申请的免疫缀合物是蛋白质异源二聚体，第二成员的氨基酸序列可选自seqidno:50。所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂可选自下组：烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、铂类化合物和辐射剂或辐射治疗。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂或细胞毒疗法包括选自环磷酰胺的烷化剂。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂或细胞毒疗法包括选自下组的铂类化合物：卡铂、顺铂和奥沙利铂。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的抗代谢物：卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞和5-fu。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的蒽环类药物：博来霉素、阿霉素、表阿霉素、柔红霉素、依达比星、戊柔比星和丝裂霉素c。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂或细胞毒疗法包括阿霉素。在某些实施方式中，所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的植物生物碱：紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。所述辐射剂可为能够发射x射线辐射和/或γ射线辐射的药剂(例如，是放射性同位素或包括放射性同位素)。在某些实施方式中，辐射剂能够发射至少一个剂量的x射线辐射。每一剂量的x射线辐射可具有约50gy或更低的剂量(例如约45gy或更低、约40gy或更低、约35gy或更低、约30gy或更低、约25gy或更低、约20gy或更低、约15gy或更低、约14gy或更低、约13gy或更低、约12gy或更低、约11gy或更低、约10gy或更低、约9gy或更低、约8gy或更低、约7gy或更低、约6gy或更低、约5gy或更低或约4gy或更低)。在某些实施方式中，每一剂量的x射线辐射具有约6至15gy的剂量，例如6至14gy、6至13gy、6至12gy、6至11gy、6至10gy、6至9gy、6至8gy、6至7gy、7至15gy、7至14gy、7至13gy、7至12gy、7至11gy、7至10gy、7至9gy或7至8gy。在某些实施方式中，辐射剂能够发射至少一个剂量的γ射线辐射。每一剂量的γ射线辐射可具有约50gy或更低的剂量(例如约45gy或更低、约40gy或更低、约35gy或更低、约30gy或更低、约25gy或更低、约20gy或更低、约15gy或更低、约14gy或更低、约13gy或更低、约12gy或更低、约11gy或更低、约10gy或更低、约9gy或更低、约8gy或更低、约7gy或更低、约6gy或更低、约5gy或更低或约4gy或更低)。在某些实施方式中，每一剂量的γ射线辐射具有约6至15gy的剂量，例如6至14gy、6至13gy、6至12gy、6至11gy、6至10gy、6至9gy、6至8gy、6至7gy、7至15gy、7至14gy、7至13gy、7至12gy、7至11gy、7至10gy、7至9gy或7至8gy。在某些实施方式中，辐射剂能够发射约2至15个剂量(或级分)(例如至少2个剂量、至少3个剂量、至少4个剂量、至少5个剂量、至少6个剂量、至少7个剂量、至少8个剂量、至少9个剂量、至少10个剂量、至少11个剂量、至少12个剂量或更多，例如2至14个剂量、2至13个剂量、2至12个剂量、2至11个剂量、2至10个剂量、2至9个剂量、2至8个剂量、2至7个剂量、2至6个剂量、2至5个剂量、2至4个剂量、3至8个剂量、3至7个剂量或4至10个剂量)的x射线辐射或γ射线辐射。组合物的不同组分可独立地包装(例如，在施用之前并不彼此混合)或预先混合且包装在同一包装单元中。本申请的组合物可为药物组合物，可进一步包括药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂的实例包含但不限于惰性固体稀释剂和填充剂、稀释剂、无菌水溶液以及各种有机溶剂、促渗剂、增溶剂和佐剂。在某些实施方式中，药物组合物调配为用于经口施用、静脉内施用、肌肉内施用、肿瘤位点原位施用、吸入、直肠施用、阴道施用、经皮施用或经皮下储集施用。本申请的组合物可包括治疗有效量的活性剂(例如，免疫缀合物和细胞毒剂)。治疗有效量为本申请组合物能够预防和/或治愈(至少部分)患有或有风险患上病况或病症(例如癌症)的个体的所述病况或病症和/或其任何并发症的量。所含活性剂的具体量/浓度可根据施用方法和患者的需求而变化，可以基于例如体积、粘稠度和/或患者的体重等确定。癌症治疗的方法和使用另一方面，本申请提供一种与细胞毒疗法结合用于治疗癌症的免疫缀合物。免疫缀合物可包括1)一个或多个白介素，和2)由第一fc亚基和第二fc亚基组成的fc域，第一fc亚基与第二fc亚基缔合以形成二聚体。一个或多个白介素可与fc域融合。细胞毒剂可能能够诱导免疫原性细胞死亡。另一方面，本申请提供免疫缀合物与细胞毒疗法结合的用途，其用于制备用于治疗有需要的个体的癌症的药物。免疫缀合物可包括1)一个或多个白介素，和2)由第一fc亚基和第二fc亚基组成的fc域，第一fc亚基与第二fc亚基缔合以形成二聚体。一个或多个白介素可与fc域融合。细胞毒剂可能能够诱导免疫原性细胞死亡。又一方面，本申请提供一种用于治疗有需要的个体的癌症的方法。所述方法包括向个体施用有效量的(a)免疫缀合物结合有效剂量的(b)细胞毒疗法。免疫缀合物可包括1)一个或多个白介素，和2)由第一fc亚基和第二fc亚基组成的fc域，第一fc亚基与第二fc亚基缔合以形成二聚体。一个或多个白介素可与fc域融合。细胞毒剂可能能够诱导免疫原性细胞死亡。免疫缀合物如本申请的其它部分中所定义。举例来说，免疫缀合物可为本申请的组合物中所包括的免疫缀合物。能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法可选自下组：烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、铂类化合物和辐射剂或辐射治疗。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法包括选自下组的烷化剂：环磷酰胺组成。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法包括选自下组的抗代谢物：卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞和5-fu。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法包括选自下组的蒽环类药物：博来霉素、阿霉素、表阿霉素、柔红霉素、依达比星、戊柔比星和丝裂霉素c。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂或细胞毒疗法包括阿霉素。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法包括选自下组的植物生物碱：紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法包括选自下组的铂类化合物：卡铂、顺铂和奥沙利铂。在某些实施方式中，能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法包括至少一个剂量的辐射治疗。辐射治疗可包括x射线辐射和/或γ射线辐射。辐射治疗可为分次辐射治疗，例如，以多个剂量或作为多个级分施用的辐射治疗。每一剂量或级分的x射线辐射可具有约50gy或更低的剂量(例如约45gy或更低、约40gy或更低、约35gy或更低、约30gy或更低、约25gy或更低、约20gy或更低、约15gy或更低、约14gy或更低、约13gy或更低、约12gy或更低、约11gy或更低、约10gy或更低、约9gy或更低、约8gy或更低、约7gy或更低、约6gy或更低、约5gy或更低或约4gy或更低)。在某些实施方式中，每一剂量或级分的x射线辐射具有约6至15gy的剂量，例如6至14gy、6至13gy、6至12gy、6至11gy、6至10gy、6至9gy、6至8gy、6至7gy、7至15gy、7至14gy、7至13gy、7至12gy、7至11gy、7至10gy、7至9gy或7至8gy。在某些实施方式中，使用单一剂量的辐射治疗，且辐射为具有约5至15gy(例如，6至15gy、7至15gy、7至10gy或6至12gy)的剂量的x射线辐射或γ射线辐射。在某些实施方式中，使用4至10个剂量或级分的辐射治疗，且辐射为x射线辐射(例如，分次x射线辐射)或γ射线辐射(例如，分次γ射线辐射)，其中每一剂量包括约5至15gy(例如，6至15gy、7至15gy、7至10gy或6至12gy)的剂量。在某些实施方式中，可向个体施用多于一个剂量(例如，至少两个剂量、至少3个剂量、至少4个剂量、至少5个剂量、至少6个剂量、至少7个剂量、至少8个剂量、至少9个剂量、至少10个剂量、至少11个剂量、至少12剂量过更多)的细胞毒疗法。举例来说，可向个体施用2至15个剂量、2至14个剂量、2至13个剂量、2至12个剂量、2至11个剂量、2至10个剂量、2至9个剂量、2至8个剂量、3至10个剂量、4至10个剂量或4至12个剂量的细胞毒疗法。可在施用细胞毒疗法之后向个体施用免疫缀合物。在某些实施方式中，向个体施用多于一个剂量的细胞毒疗法，且在施用最后一个(或最终)剂量的细胞毒疗法之后向个体施用免疫缀合物。举例来说，可向个体施用2至15个剂量(例如，2至14个剂量、2至13个剂量、2至12个剂量、2至11个剂量、2至10个剂量、2至9个剂量、2至8个剂量、3至10个剂量、4至10个剂量或4至12个剂量)的细胞毒疗法，且可在施用最后一个(或最终)剂量的细胞毒疗法之后向个体施用免疫缀合物。可在施用细胞毒疗法之后(例如，在施用最后一个剂量的细胞毒剂之后)不超过10天(例如，不超过9天、不超过8天、不超过7天、不超过6天、不超过5天、不超过4天、不超过3天、不超过2天、不超过1天或立即)向个体施用免疫缀合物。在某些实施方式中，在施用细胞毒疗法之后0至7天(例如0至6天、0至5天、0至4天、0至3天、0至2天或0至1天)向个体施用免疫缀合物。可向个体施用免疫缀合物达两次或多次(例如至少2次、至少3次、至少4次或更多次)。癌症可包括实体肿瘤。举例来说，癌症可以选自下组：b细胞淋巴瘤、肺癌、支气管癌、结肠直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、脑癌或中枢神经系统癌、外周神经系统癌、食道癌、宫颈癌、黑色素瘤、子宫或子宫内膜癌、口腔及咽喉癌、肝癌、肾癌、胆管癌、小肠或阑尾癌、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤、脂肪肉瘤、睾丸癌和恶性纤维组织细胞瘤。在某些实施方式中，癌症在个体体内，例如，癌症或癌症细胞在人类或非人类动物(例如哺乳动物)体内。在某些实施方式中，哺乳动物是人类。在某些实施方式中，哺乳动物是小鼠、大鼠、猫、狗、兔、猪、绵羊、马、牛、山羊、沙鼠、仓鼠、豚鼠、猴或任何其它哺乳动物。许多这些哺乳动物可以是本领域已知作为某些疾病或病症(包含实体肿瘤和/或其它癌症)的临床前模型的个体(例如，talmadge等人，2007am.j.pathol.170:793；kerbel,2003canc.biol.therap.2(4suppl1):s134；man等人，2007canc.met.rev.26:737；cespedes等人，2006clin.transloncol.8:318)。本申请还包含以下实施方案：1.一种组合物，包括免疫缀合物和细胞毒剂，其中：所述免疫缀合物包括1)一个或多个白介素，和2)由第一fc亚基和第二fc亚基组成的fc域，所述第一fc亚基与所述第二fc亚基缔合以形成二聚体；所述一个或多个白介素与所述fc域融合；其中所述细胞毒剂能够诱导免疫原性细胞死亡。2.根据实施方案1所述的组合物，其中所述一个或多个白介素中的至少一个与所述fc域的氨基端氨基酸融合。3.根据实施方案1至2中任一项所述的组合物，其中所述免疫缀合物包括两个或多个白介素。4.根据实施方案3所述的组合物，其中所述两个或多个白介素中的至少两个与所述fc域的氨基端氨基酸融合。5.根据实施方案1至4中任一项所述的组合物，其中所述白介素中的一个或多个通过肽连接子与所述fc域融合。6.根据实施方案3至5中任一项所述的组合物，其中所述两个或多个白介素中的至少两个通过肽连接子彼此融合以形成白介素二聚体。7.根据实施方案6所述的组合物，其中至少一个所述白介素二聚体与所述fc域的氨基端氨基酸融合。8.根据实施方案3至7中任一项所述的组合物，其中所述两个或多个白介素是同一白介素的两个或多个拷贝。9.根据实施方案8所述的组合物，其中所述两个或多个白介素是il10的两个或多个拷贝。10.根据实施方案1至9中任一项所述的组合物，其中所述免疫缀合物进一步包括与所述fc域融合的靶向部分，其中所述靶向部分对肿瘤抗原展现结合特异性。11.根据实施方案10所述的组合物，其中所述靶向部分与所述fc域的氨基端氨基酸融合。12.根据实施方案10至11中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分通过肽连接子或免疫球蛋白铰链区与所述fc域融合。13.根据实施方案10至12中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括抗体的抗原结合域。14.根据实施方案13所述的组合物，其中抗体的所述抗原结合域为fab部分。15.根据实施方案10至14中任一项所述的组合物，其中所述肿瘤抗原选自下组：egfr、her2/neu和fap。16.根据实施方案10至15中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括抗体的抗原结合域，所述抗体选自下组：抗egfr抗体、抗her2抗体和抗fap抗体。17.根据实施方案16所述的组合物，其中所述抗体为抗egfr抗体。18.根据实施方案17所述的组合物，其中所述抗egfr抗体为西妥昔单抗。19.根据实施方案18所述的组合物，其中所述靶向部分包括西妥昔单抗的重链cdr1-3。20.根据实施方案18至19中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括西妥昔单抗的轻链cdr1-3。21.根据实施方案18至20中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括西妥昔单抗的重链可变区。22.根据实施方案18至21中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括西妥昔单抗的轻链可变区。23.根据实施方案16所述的组合物，其中所述抗体为抗her2抗体。24.根据实施方案23所述的组合物，其中所述抗her2抗体为曲妥珠单抗。25.根据实施方案24所述的组合物，其中所述靶向部分包括曲妥珠单抗的重链cdr1-3。26.根据实施方案24至25中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括曲妥珠单抗的轻链cdr1-3。27.根据实施方案24至26中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括曲妥珠单抗的重链可变区。28.根据实施方案24至27中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括曲妥珠单抗的轻链可变区。29.根据实施方案16所述的组合物，其中所述抗体为抗fap抗体。30.根据实施方案29所述的组合物，其中所述抗fap抗体为28h1。31.根据实施方案30所述的组合物，其中所述靶向部分包括28h1的重链cdr1-3。32.根据实施方案30至31中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括28h1的轻链cdr1-3。33.根据实施方案30至32中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括28h1的重链可变区。34.根据实施方案30至33中任一项所述的组合物，其中所述靶向部分包括28h1的轻链可变区。35.根据实施方案1至34中任一项所述的组合物，其中所述fc域为iggfc域。36.根据实施方案35所述的组合物，其中所述igg选自由igg1、igg2、igg3和igg4组成的群组。37.根据实施方案36所述的组合物，其中所述igg为人类igg1。38.根据实施方案1至37中任一项所述的组合物，其中所述免疫缀合物是包括第一成员和与所述第一成员不同的第二成员的免疫缀合物，其中所述第一成员包括所述第一fc亚基，所述第二成员包括与所述第二fc亚基融合的所述一个或多个白介素，所述第一fc亚基与所述第二fc亚基缔合以形成所述异源二聚体。39.根据实施方案38所述的组合物，其中在所述第二成员中，所述一个或多个白介素中的至少一个与所述第二fc亚基的氨基端氨基酸融合。40.根据实施方案39所述的组合物，其中在所述第二成员中，所述一个或多个白介素中的至少两个彼此融合以形成白介素二聚体，所述白介素二聚体进一步与所述第二fc亚基的氨基端氨基酸融合。41.根据实施方案38至40中任一项所述的组合物，其中所述第一成员进一步包括与所述第一fc亚基融合的所述靶向部分。42.根据实施方案41所述的组合物，其中在所述第一成员中，所述靶向部分与所述第一fc亚基的氨基端氨基酸融合。43.根据实施方案38至40中任一项所述的组合物，其中所述免疫缀合物并不包括任何靶向部分。44.根据实施方案1至43中任一项所述的组合物，其中所述第一fc亚基不同于所述第二fc亚基，所述fc域包括促进所述第一fc亚基与所述第二fc亚基之间的异源二聚化的修饰。45.根据实施方案44所述的组合物，其中所述第一fc亚基包括第一修饰，所述第二fc亚基包括第二修饰。46.根据实施方案45所述的组合物，其中所述第一修饰包括位置t366处的氨基酸取代以及选自由以下组成的群组的一个或多个位置处的氨基酸取代：y349、f405、k409、d399、k360、q347、k392和s354，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。47.根据实施方案46所述的组合物，其中第一修饰所包括的氨基酸取代选自下组：y349c、y349d、d399s、f405k、k360e、k409a、k409e、q347e、q347r、s354d、k392d和t366w。48.根据实施方案45至47中任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括2至5个氨基酸取代。49.根据实施方案45至48中任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括在选自以下任意一组位置处的氨基酸取代：1)y349和t366；2)y349、t366和f405；3)y349、t366和k409；4)y349、t366、f405、k360和q347；5)y349、t366、f405和q347；6)y349、t366、k409、k360和q347；7)y349、t366、k409和q347；8)t366、k409和k392；9)t366和k409；10)t366、k409、y349和s354；11)t366和f405；12)t366、f405和d399；以及13)t366、f405、y349和s354；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。50.根据实施方案45至49中任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括选自以下任意一组氨基酸取代：1)y349c和t366w；2)y349c、t366w和f405k；3)y349c、t366w和k409e；4)y349c、t366w和k409a；5)y349c、t366w、f405k、k360e和q347e；6)y349c、t366w、f405k和q347r；7)y349c、t366w、k409a、k360e和q347e；8)y349c、t366w、k409a和q347r；9)t366w、k409a和k392d；10)t366w和k409a；11)t366w、k409a和y349d；12)t366w、k409a、y349d和s354d；13)t366w和f405k；14)t366w、f405k和d399s；15)t366w、f405k和y349d；和16)t366w、f405k、y349d和s354d；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。51.根据实施方案45至50中任一项所述的组合物，其中所述第二修饰包括位置t366、l368和y407处的氨基酸取代以及选自由d356、d399、e357、f405、k360、k392、k409和q347组成的群组的一个或多个位置处的氨基酸取代，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。52.根据实施方案51所述的组合物，其中第二修饰所包括的氨基酸取代选自下组：d356c、d399s、e357a、f405k、k360e、k392d、k409a、l368a、l368g、q347e、q347r、t366s、y407a和y407v。53.根据实施方案45至52中任一项所述的组合物，其中第二修饰包括4至6个位置处的氨基酸取代。54.根据实施方案45至53中任一项所述的组合物，其中第二修饰包括选自任何以下群组的一组位置处的氨基酸取代：1)d356、t366、l368、y407和f405；2)d356、t366、l368和y407；3)d356、t366、l368、y407和q347；4)d356、t366、l368、y407、k360和q347；5)d356、t366、l368、y407、f405和q347；6)d356、t366、l368、y407、f405、k360和q347；7)t366、l368、y407、d399和f405；8)t366、l368、y407和f405；9)t366、l368、y407、f405和e357；10)t366、l368、y407和k409；11)t366、l368、y407、k409和k392；以及12)t366、l368、y407、k409和e357；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。55.根据实施方案45至54中任一项所述的组合物，其中第二修饰包括选自以下任意一组的氨基酸取代：1)d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；2)d356c、t366s、l368a和y407v；3)d356c、t366s、l368a、y407v和q347r；4)d356c、t366s、l368a、y407v、k360e和q347e；5)d356c、t366s、l368a、y407v、f405k和q347r；6)d356c、t366s、l368a、y407v、f405k、k360e和q347e；7)t366s、l368a、y407v、d399s和f405k；8)t366s、l368g、y407a和f405k；9)t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；10)t366s、l368a、y407v和k409a；11)t366s、l368a、y407v、k409a和k392d；12)t366s、l368g、y407a和k409a；13)t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。56.根据实施方案45至55中任一项所述的组合物，其中第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，第一修饰和第二修饰包括选自以下任意一组位置处的氨基酸取代：1)第一修饰：y349和t366；第二修饰：d356、t366、l368、y407和f405；2)第一修饰：y349、t366和f405；第二修饰：d356、t366、l368和y407；3)第一修饰：y349、t366和k409；第二修饰：d356、t366、l368、y407和f405；4)第一修饰：y349、t366、f405、k360和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407和q347；5)第一修饰：y349、t366、f405和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、k360和q347；6)第一修饰：y349、t366、k409、k360和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、f405和q347；7)第一修饰：y349、t366、k409和q347；第二修饰：d356、t366、l368、y407、f405、k360和q347；8)第一修饰：t366、k409和k392；第二修饰：t366、l368、y407、d399和f405；9)第一修饰：t366和k409；第二修饰：t366、l368、y407和f405；10)第一修饰：t366、k409和y349；第二修饰：t366、l368、y407、f405和e357；11)第一修饰：t366、k409、y349和s354；第二修饰：t366、l368、y407、f405和e357；12)第一修饰：t366和f405；第二修饰：t366、l368、y407和k409；13)第一修饰：t366、f405和d399；第二修饰：t366、l368、y407、k409和k392；14)第一修饰：t366、f405和y349；第二修饰：t366、l368、y407、k409和e357；15)第一修饰：t366、f405、y349和s354；第二修饰：t366、l368、y407、k409和e357；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。57.根据实施方案45至56中任一项所述的组合物，其中第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，其中第一修饰和第二修饰包括选自以下任意一组的氨基酸取代：1)第一修饰：y349c和t366w；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；2)第一修饰：y349c、t366w和f405k；第二修饰：d356c、t366s、l368a和y407v；3)第一修饰：y349c、t366w和k409e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；4)第一修饰：y349c、t366w和k409a；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和f405k；5)第一修饰：y349c、t366w、f405k、k360e和q347e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v和q347r；6)第一修饰：y349c、t366w、f405k和q347r；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、k360e和q347e；7)第一修饰：y349c、t366w、k409a、k360e和q347e；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、f405k和q347r；8)第一修饰：y349c、t366w、k409a和q347r；第二修饰：d356c、t366s、l368a、y407v、f405k、k360e和q347e；9)第一修饰：t366w、k409a和k392d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、d399s和f405k；10)第一修饰：t366w和k409a；第二修饰：t366s、l368g、y407a和f405k；11)第一修饰：t366w、k409a和y349d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；12)第一修饰：t366w、k409a、y349d和s354d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、f405k和e357a；13)第一修饰：t366w和f405k；第二修饰：t366s、l368a、y407v和k409a；14)第一修饰：t366w、f405k和d399s；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和k392d；15)第一修饰：t366w和f405k；第二修饰：t366s、l368g、y407a和k409a；16)第一修饰：t366w、f405k和y349d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；17)第一修饰：t366w、f405k、y349d和s354d；第二修饰：t366s、l368a、y407v、k409a和e357a；其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。58.根据实施方案57所述的组合物，其中第一fc亚基包括第一修饰，第二fc亚基包括第二修饰，第一修饰包括氨基酸取代t366w和k409a，第二修饰包括氨基酸取代t366s、l368g、y407a和f405k，其中氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。59.根据实施方案1至58中任一项所述的组合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂选自下组：烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、铂类化合物和辐射剂。60.根据实施方案59所述的组合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自环磷酰胺的烷化剂。61.根据实施方案59所述的组合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的抗代谢物：卡培他滨,吉西他滨,培美曲塞和5-fu。62.根据实施方案59所述的组合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的蒽环类药物：博来霉素、阿霉素和丝裂霉素c。63.根据实施方案59所述的组合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的植物生物碱：紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。64.根据实施方案59所述的组合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括发射x射线辐射和/或γ射线辐射的辐射剂。65.根据实施方案64所述的组合物，其中所述辐射剂发射x射线辐射，每一剂量的x射线辐射具有约50gy或更低的剂量。66.根据实施方案65所述的组合物，其中所述辐射剂发射γ射线辐射，每一剂量的γ射线辐射具有约50gy或更低的剂量。67.根据实施方案59所述的组合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的铂类化合物：卡铂、顺铂和奥沙利铂。68.一种免疫缀合物，其与细胞毒疗法结合用于治疗癌症，其中所述免疫缀合物为如实施方案1至58中任一项中所述，所述细胞毒疗法能够诱导免疫原性细胞死亡。69.根据实施方案68所述的免疫缀合物，其中能够诱导免疫原性细胞死亡的所述细胞毒疗法选自由以下组成的群组：烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、铂类化合物和辐射治疗。70.根据实施方案69所述的免疫缀合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法包括至少一个剂量的辐射治疗。71.根据实施方案70所述的免疫缀合物，其中所述辐射包括x射线辐射和/或γ射线辐射。72.根据实施方案71所述的免疫缀合物，其中所述辐射包括x射线辐射，每一剂量的x射线辐射具有约50gy或更低的剂量。73.根据实施方案71所述的免疫缀合物，其中所述辐射包括γ射线辐射，每一剂量的γ射线辐射具有约50gy或更低的剂量。74.根据实施方案70至73中任一项所述的免疫缀合物，其中所述辐射治疗是分次辐射治疗。75.根据实施方案74所述的免疫缀合物，其中所述分次辐射治疗包括2至15个级分。76.根据实施方案69所述的免疫缀合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自环磷酰胺的烷化剂。77.根据实施方案69所述的免疫缀合物，其中能够诱导免疫原性细胞死亡的所述细胞毒剂包括选自下组的抗代谢物：卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞和5-fu。78.根据实施方案69所述的免疫缀合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的蒽环类药物：博来霉素,阿霉素和丝裂霉素c。79.根据实施方案69所述的免疫缀合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的植物生物碱：紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。80.根据实施方案69所述的免疫缀合物，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的铂类化合物：卡铂、顺铂和奥沙利铂。81.一种免疫缀合物与细胞毒疗法组合用于制备治疗有需要的个体的癌症的药物的用途，其，其中所述免疫缀合物如实施方案1到58中任一项中所定义，所述细胞毒疗法能够诱导免疫原性细胞死亡。82.根据实施方案81所述的用途，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法选自下组：烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、铂类化合物和辐射治疗。83.根据实施方案82所述的用途，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法包括至少一个剂量的辐射治疗。84.根据实施方案83所述的用途，其中所述辐射治疗包括x射线辐射和/或γ射线辐射。85.根据实施方案84所述的用途，其中所述辐射包括x射线辐射，每一剂量的x射线辐射具有约50gy或更低的剂量。86.根据实施方案84所述的用途，其中所述辐射包括γ射线辐射，每一剂量的γ射线辐射具有约50gy或更低的剂量。87.根据实施方案83至86中任一项所述的用途，其中所述辐射治疗是分次辐射治疗。88.根据实施方案87所述的用途，其中所述分次辐射治疗包括2至15个级分。89.根据实施方案82所述的用途，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自环磷酰胺的烷化剂。90.根据实施方案82所述的用途，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的抗代谢物：卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞和5-fu。91.根据实施方案82所述的用途，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的蒽环类药物：博来霉素、阿霉素和丝裂霉素c。92.根据实施方案82所述的用途，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的植物生物碱：紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。93.根据实施方案82所述的用途，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的铂类化合物：卡铂、顺铂和奥沙利铂。94.一种用于治疗有需要的个体的癌症的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的(a)免疫缀合物结合有效剂量的(b)细胞毒疗法，其中所述免疫缀合物如实施方案1至58中任一项中所述，所述细胞毒疗法能够诱导免疫原性细胞死亡。95.根据实施方案93所述的方法，其中在施用所述细胞毒疗法之后向所述个体施用所述免疫缀合物。96.根据实施方案95所述的方法，其中在施用所述细胞毒疗法之后不超过10天向所述个体施用所述免疫缀合物。97.根据实施方案95到96中任一项所述的方法，其中在施用所述细胞毒疗法之后不超过3天向所述个体施用所述免疫缀合物。98.根据实施方案94到97中任一项所述的方法，其中向所述个体施用所述免疫缀合物达两次或多次。99.根据实施方案94到98中任一项所述的方法，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒疗法选自下组：烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、铂类化合物和辐射治疗。100.根据实施方案99所述的方法，其中能够诱导免疫原性细胞死亡的所述细胞毒疗法包括至少一个剂量的辐射治疗。101.根据实施方案100所述的方法，其中所述辐射治疗包括x射线辐射和/或γ射线辐射。102.根据实施方案101所述的方法，其中所述辐射包括x射线辐射，每一剂量的x射线辐射具有约50gy或更低的剂量。103.根据实施方案101所述的方法，其中所述辐射包括γ射线辐射，每一剂量的γ射线辐射具有约50gy或更低的剂量。104.根据实施方案100到103中任一项所述的方法，其中所述辐射治疗是分次辐射治疗。105.根据实施方案104所述的方法，其中所述分次辐射治疗包括2至15个级分。106.根据实施方案99所述的方法，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自环磷酰胺的烷化剂。107.根据实施方案99所述的方法，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的抗代谢物：卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞和5-fu。108.根据实施方案99所述的方法，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的蒽环类药物：博来霉素、阿霉素和丝裂霉素c。109.根据实施方案99所述的方法，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的植物生物碱：紫杉烷、多烯紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春新碱和长春瑞滨。110.根据实施方案99所述的方法，其中所述能够诱导免疫原性细胞死亡的细胞毒剂包括选自下组的铂类化合物：卡铂、顺铂和奥沙利铂。虽然本文中已展示和描述本申请的各种实施方案，但本领域的技术人员将显而易见，这些实施方案仅仅通过实例的方式提供。本领域的技术人员可想到不脱离本申请的众多变化形式、改变和替换。应理解，可以采用本文所描述的本申请实施方案的各种替代方案。实施例阐述以下实例以便向本领域的普通技术人员完整地公开且描述如何制备和使用本申请，且并不打算限制本申请人视为其申请的范围，也不打算表示下文实验是所进行的全部或唯一实验。已努力确保所使用的数字(例如量、温度等)的准确性，但应当考虑存在一些实验性误差和偏差。除非另外规定，否则部分为重量份，分子量为重量平均分子量，温度是以摄氏度计，且压力是处于大气压或接近大气压。可使用标准缩写，例如，bp：碱基对；kb：千碱基；pl：微微升；s或sec：秒；min：分钟；h或hr：小时；aa：氨基酸；nt：核苷酸；i.m.：肌内(地)；i.p.：腹膜内(地)；s.c.：皮下(地)；等等。实施例1核酸的修饰和制备1.1fc修饰对人类igg1fc域的界面残基进行氨基酸修饰(例如，氨基酸取代)以获得以下修饰群组(如下文表1中所示)，在本申请中链a也称为fc9或第一fc亚基，链b也称为fc6或第二fc亚基：表1氨基酸修饰群组随后，如下文详细说明，使用scfv-fc/fc系统检查包括上表1中所列的修饰群组的异源二聚体蛋白的形成。首先，从数据库uniprot获得人类免疫球蛋白γ1(igg1)恒定区氨基酸序列(p01857)，以得到野生型人类igg1-fc区氨基酸序列(seqidno:30)。通过rt-pcr从人类pbmc总rna获得编码野生型人类igg1-fc的多核苷酸片段(seqidno:31，命名为fc基因片段)。通过重叠pcr将编码小鼠κiii信号肽的多核苷酸片段(seqidno:32)添加到fc基因的5’端，随后亚克隆到载体pcdna4(invitrogen，catv86220)，以获得在哺乳动物细胞中表达人类igg1-fc的重组表达载体。合成编码scfv-fc融合蛋白的核酸分子(seqidno:33)，其中scfv指代抗her2单链抗体，scfv-fc融合蛋白的氨基酸序列如seqidno:34中所示。随后将scfv-fc基因片段亚克隆到载体pcdna4(invitrogen，catv86220)，以获得用于在哺乳动物细胞中表达scfv-fc融合蛋白的重组表达载体。在一些情况下，使编码骆驼单域抗体(vhh)的可变区的多肽与fc基因片段的n端融合，以获得编码融合蛋白vhh-fc(如seqidno:36中所示)的融合基因片段(如seqidno:35)。随后将其亚克隆到载体pcdna4(invitrogen，catv86220)，以获得用于在哺乳动物细胞中表达融合蛋白vhh-fc的重组表达载体。接着，通过重叠pcr分别将上表1中所列的氨基酸修饰引入到scfv-fc(第1至17组)、vhh-fc(第9至12组、第14组、第15组和第17组)和fc基因片段(第1至8组)，其中链a指代scfv-fc中的fc亚单位，链b指代单独的fc亚单位或vhh-fc中的fc亚单位。将具有氨基酸修饰的基因片段分别亚克隆到载体pcdna4(invitrogen，catv86220)以获得用于在哺乳动物细胞中表达经修饰scfv-fc融合蛋白、经修饰fc蛋白和经修饰vhh-fc融合蛋白的重组表达载体。接着，用pei使所构筑的表达载体转染悬浮培养的hek293细胞(atcccrl-1573tm)。对于每一群组，以1:1的比率共转染表达a链(scfv-fc融合蛋白)和表达b链(fc蛋白或vhh-fc融合蛋白)的表达载体。在培养5到6天后，收集瞬时表达产物的上清液，并且使用proteina亲和色谱初步纯化包括对应蛋白质异源二聚体的表达产物。每一种初步纯化的表达产物包括分别以各种百分比存在的同源二聚体蛋白scfv-fc/scfv-fc、同源二聚体蛋白fc/fc(或同源二聚体蛋白vhh-fc/vhh-fc)和异源二聚体蛋白scfv-fc/fc(或异源二聚体蛋白scfv-fc/vhh-fc)。由于这些蛋白质(即，同源二聚体和异源二聚体)的分子量不同，所以其对应百分比可以根据非还原性sds-page凝胶上所反映的对应谱带强度来确定。所述强度经过量化，结果汇总在下文表2至表5中。群组scfv-fc同源二聚体(％)scfv-fc/fc异源二聚体(％)fc同源二聚体(％)1245818210702032557184107713表2同源二聚体和异源二聚体在表达产物中的百分比群组scfv-fc同源二聚体(％)scfv-fc/fc异源二聚体(％)fc同源二聚体(％)21760235147214614622442169107246412821718表3同源二聚体和异源二聚体在表达产物中的百分比表4同源二聚体和异源二聚体在表达产物中的百分比表5同源二聚体和异源二聚体在表达产物中的百分比如上文表2至表5中可见，所有修饰群组都十分有效地促进了异源二聚体形成。出于说明目的，第10组中的修饰(链a中的修饰：t366w+k409a；链b中的修饰：t366s+l368g+y407a+f405k)用于以下实例中以产生本申请的免疫缀合物或蛋白质混合物。1.2抗egfr(西妥昔单抗(cetuximab))的制备获得西妥昔单抗(也称为爱必妥或erb，其为抗表皮生长因子受体egfr的抗体)的重链和轻链的全长氨基酸序列，使用在线工具dnaworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码这些氨基酸序列的对应dna序列。接着，合成编码西妥昔单抗的轻链(erb-lc)的核酸分子。erb-lc的氨基酸序列如seqidno:37中所示，且编码其的对应多核苷酸序列如seqidno:38中所示。接着，将点突变(t366w和k409a)引入到西妥昔单抗重链基因的编码fc区的多核苷酸序列，合成编码经修饰西妥昔单抗重链的核酸分子(在本文中称为erb-fc9)，编码其的对应多肽命名为erb-fc9。erb-fc9的氨基酸序列如seqidno:39中所示，编码其的多核苷酸序列如seqidno:40中所示。1.3抗her2(曲妥珠单抗)的制备曲妥珠单抗的重链和轻链的全长氨基酸序列根据美国专利us7879325b2(以引用的方式并入本文)获得。接着，使用在线工具dnaworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码所述氨基酸序列的对应dna序列。接着，合成编码曲妥珠单抗的轻链(t-lc)的核酸分子。t-lc的氨基酸序列如seqidno:41中所示，编码其的对应多核苷酸序列如seqidno:42中所示。接着，将点突变(t366w和k409a)引入到曲妥珠单抗重链基因的编码fc区的多核苷酸序列，合成编码经修饰曲妥珠单抗重链的核酸分子(在本文中称为t-fc9)，编码其的对应多肽命名为t-fc9。t-fc9的氨基酸序列如seqidno:43中所示，编码其的多核苷酸序列如seqidno:44中所示。1.4抗fap(28h1)的制备28h1的重链和轻链的全长氨基酸序列根据us20120128591a1(以引用的方式并入本文)获得。接着，使用在线工具dnaworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)获得编码所述氨基酸序列的对应dna序列。接着，合成编码28h1的轻链(28h1-lc)的核酸分子。28h1-lc的氨基酸序列如seqidno:45中所述，编码其的对应多核苷酸序列如seqidno:46中所述。接着，将点突变(t366w和k409a)引入到编码28h1重链基因的fc区的多核苷酸序列，合成编码经修饰28h1重链的核酸分子(在本文中称为28h1-fc9)，编码其的对应多肽命名为28h1-fc9。28h1-fc9的氨基酸序列如seqidno:47中所述，编码其的多核苷酸序列如seqidno:48中所述。1.5(il10)2-fc6的制备首先，从美国国家生物技术信息中心(ncbi)获得人类白介素10(il10)的序列信息(p22301)，且获得编码其的全长多核苷酸序列。接着，根据来自蛋白质数据库uniprot的人类免疫球蛋白γ1(igg1)恒定区的氨基酸序列(p01857)获得人类igg1-fc的氨基酸序列(即，p01857的残基104至残基330)。然后，将点突变(t366s、l368g、y407a和f405k)引入到igg1-fc片段，借此获得的多肽被称为fc6。接着，将连接子序列“(ggggs)3”(seqidno:49)添加到fc6的n端，以获得连接子-fc6。接着，使用在线工具dnaworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码其的对应dna序列。接着，将连接子序列“(ggggs)3”(seqidno:49)添加在il10的两个拷贝之间，以获得(il10)2。接着，将编码(il10)2的多核苷酸序列添加到编码连接子-fc6的多核苷酸序列的5’端，从而获得并合成编码融合蛋白(il10)2-fc6的多核苷酸序列。(il10)2-fc6的氨基酸序列如seqidno:50中所示，编码其的多核苷酸序列如seqidno:51中所示。1.6il10-fc的制备首先，从美国国家生物技术信息中心(ncbi)获得人类白介素10(il10)的序列信息(p22301)，且获得编码其的全长多核苷酸序列。接着，根据来自蛋白质数据库uniprot的人类免疫球蛋白γ1(igg1)恒定区的氨基酸序列(p01857)获得人类igg1-fc的氨基酸序列(即，p01857的残基104至残基330)。接着，将连接子序列“(ggggs)3”(seqidno:49)添加到igg1-fc的n端，以获得连接子-fc。接着，使用在线工具dnaworks(helixweb.nih.gov/dnaworks/)设计编码其的对应dna序列。将编码il10的多核苷酸序列添加到编码连接子-fc的多核苷酸序列的5’端，从而获得并合成编码融合蛋白il10-fc的多核苷酸序列。il10-fc的氨基酸序列如seqidno:52中所示，编码其的多核苷酸序列如seqidno:53中所示。1.7fc9的制备根据来自蛋白质数据库uniprot的人类免疫球蛋白γ1(igg1)恒定区的氨基酸序列(p01857)获得人类igg1-fc的氨基酸序列(即，p01857的残基104至残基330)。然后，将点突变(t366w和k409a)引入到igg1fc片段，借此获得的多肽被称为fc9。fc9的氨基酸序列如seqidno:17中所示，编码其的多核苷酸序列如seqidno:54中所示。实例2重组质粒的构筑用hindiii和ecori(takara)消化根据实例1获得的核酸分子(编码erb-fc9、t-fc9、28h1-fc9、fc9、t-lc(曲妥珠单抗轻链)、erb-lc(西妥昔单抗轻链)、28h1-lc、(il10)2-fc6和il10-fc)，接着分别亚克隆到载体pcdna4/myc-hisa(invitrogen，v863-20)。通过测序验证获得的质粒，并且将正确的重组质粒分别命名为：pcdna4-erb-fc9、pcdna4-t-fc9、pcdna4-28h1-fc9、pcdna4-fc9、pcdna4-t-lc、pcdna4-erb-lc、pcdna4-28h1-lc、pcdna4-(il10)2-fc6和pcdna4-il10-fc。实例3免疫缀合物的表达和纯化在转染前两天，准备12×600ml悬浮液驯化的hek293(atcc，crl-1573tm)细胞以供瞬时转染，以0.8×106个细胞/毫升的密度接种细胞。两天后，将三等份细胞悬浮液离心，随后在600mlfreestyle293培养基中再次悬浮。将从实例2获得的重组表达载体分成以下各组：第1组：pcdna4-erb-fc9(200μg)+pcdna4-erb-lc(200μg)+pcdna4-(il10)2-fc6(200μg)第2组：pcdna4-t-fc9(200μg)+pcdna4-t-lc(200μg)+pcdna4-(il10)2-fc6(200μg)第3组：pcdna4-28h1-fc9(200μg)+pcdna4-28h1-lc(200μg)+pcdna4-(il10)2-fc6(200μg)第4组：pcdna4-fc9(200μg)+pcdna4-(il10)2-fc6(200μg)第5组：pcdna4-il10-fc(200μg)在瞬时转染的293f细胞中产生所有蛋白质。简而言之，使freestyle293f细胞(invitrogen)在293f培养基(invitrogen)中生长，用非线性质粒dna和293fectin试剂(invitrogen)转染，并以80至100毫升/烧瓶的体积在37℃、5％co2下在振荡烧瓶中分批生长6天。通过一步proteina色谱纯化所有蛋白质。通过sds-page和sec-hplc确定每种蛋白质的质量。类似地，用sds-page验证并确认本申请的其它免疫缀合物的表达和纯化结果。由此获得的免疫缀合物命名为(从第1组到第5组分别为)：erb-(il10)2、tmab-(il10)2、28h1-(il10)2、fc9-(il10)2和(il10-fc)2.图1a至图1f展示erb-(il10)2、tmab-(il10)2、(il10-fc)2和fc9-(il10)2的免疫缀合物已成功表达和纯化。在图1a中，泳道1装载erb-(il10)2(还原的)；泳道2装载标记；泳道3装载erb-(il10)2(非还原的)。在图1b中，泳道1装载tmab-(il10)2(还原的)；泳道2装载标记；泳道3装载tmab-(il10)2(非还原的)。在图1c中，泳道1装载(il10-fc)2(原始样本)；泳道2装载(il10-fc)2(流通)；泳道3装载(il10-fc)2(洗脱)；泳道4装载标记；泳道5装载标准阳性对照bsa；泳道6装载空白缓冲剂；泳道7为空白物；泳道8装载(il10-fc)2(洗脱；非还原的)。在图1d中，泳道1装载fc9-(il10)2(原始样本)；泳道2装载fc9-(il10)2(流通)；泳道3装载fc9-(il10)2(洗脱)；泳道4装载标记；泳道5装载标准阳性对照bsa；泳道6装载空白缓冲剂；泳道7为空白物；泳道8装载fc9-(il10)2(洗脱；非还原的)。图1e展示sec-hplc结果，可以看出非所需寡聚物在(il10-fc)2在表达产物中的百分比为约27％。图1e展示sec-hplc结果，可以看出非所需寡聚物fc9-(il10)2在表达产物中的百分比为约3.3％。根据这些结果，可以看出已成功产生本申请的免疫缀合物。有趣的是，与(il10-fc)2相比，fc9-(il10)2的表达产物含有少得多的非所需寡聚物。实例4检查放疗剂量和肿瘤控制4.1动物和细胞培养从中国科学院实验动物中心(中国上海)获得6至8周大的雌性c57bl/6小鼠并保持在特定无病原体条件下。根据当地伦理委员会使用所有动物。这项研究受到《医学实验动物的护理与使用指南》(guideforthecareanduseofmedicallaboratoryanimals)(中华人民共和国卫生部，1998)中的推荐规范的认可。内部产生表达人类egfr和kb结合肽抗原siyryygl的b16-egfr-siy黑色素瘤细胞系(siy，seqidno:55)并在补充有10％(v/v)胎牛血清(fbs)、100单位/毫升青霉素和100μg/ml链霉素(gibcoinvitrogen)的dmem培养基中生长。4.2肿瘤生长将b16-egfr-siy黑色素瘤细胞(5×105)皮下(s.c.)接种到小鼠侧腹并让其生长约10天。肿瘤体积记录为两个垂直直径(长度和宽度)并计算为v＝ab2/2，其中a和b分别为最长和最短直径。根据肿瘤尺寸，将小鼠随机分配为多个群组。通过腹膜内(i.p.)注射约150μl/20g1％(w/v)戊巴比妥钠将各个重约18至20g的c57/bl6小鼠麻醉。用具有10-mm×10-mm孔的铅屏保护横放在方块的平坦水平面上的每一个麻醉小鼠。接着，在苏州大学第一附属医院放疗科(departmentofradiotherapy,thefirstaffiliatedhospitalofsoochowuniversity)通过所述孔用单剂量进行局部辐照(电子辐射束，3gy/min；医用线性加速器，siemensprimus,德国)，每周测量肿瘤体积两次。因此，获得b16-egfr-siy对照肿瘤模型。4.3放疗剂量和肿瘤控制用5gy、10gy、20gy、30gy的局部单剂量放疗(rt)处理b16-egfr-siy对照肿瘤。并且，将不进行任何其它局部单剂量控制的b16-egfr-siy对照肿瘤模型设置为对照。在rt处理21天后，b16-egfr-siy对照肿瘤模型从123.4±43.7mm3生长到2797.1±917.8mm3体积，但这种生长由5gy与30gy之间的局部单剂量rt减缓(图2)。图2反映单剂量rt与肿瘤体积之间的关系。在增加单剂量的rt的情况下，rt对肿瘤的抑制作用增强，30gy几乎促成完全肿瘤消除，而5gy几乎没有作用。这些结果表明，不同放射方案在辐照肿瘤的生长抑制方面产生不同的直接作用。实例5rt和本申请的免疫缀合物的协同效应于rt后的第3天开始施用实例3中获得的erb-(il10)2或同型对照(人类igg1)，以1mg/kg的剂量每3至4天i.p.施用，总共3次(除非另外阐明)。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，在第10天予以局部辐照，随后在第13天每3至4天用200μloferb-(il10)2(1mg/kg)或fc9-(il10)2(1mg/kg)或同型对照i.p.注射，总共3次。测定erb-(il10)2、rt；fc9-(il10)2、rt以及erb-(il10)2与rt的组合；fc9-(il10)2与rt的组合的效力，在图3a至图3c中展示结果。使用graphpadprism第5.0版软件(sandiego,ca)分析数据。结果表示为平均值±sem。使用非成对学生t检验执行两组对比。所有报告的p值都是双面的，统计显著性水平设置为*p<0.05、**p<0.01和***p<0.001。并且，小于0.05的p值被认为在统计学上显著。图3a和图3c反映肿瘤体积与分别使用为10gy、5gy、10gy的单剂量rt进行肿瘤攻毒之后的天数之间的关系。并且，在图3b中，横坐标为肿瘤攻毒后的天数，纵坐标为小鼠的存活百分比。rt5gy与同型对照组相比对肿瘤生长具有轻微影响，而rt10gy，erb-(il10)2减缓肿瘤进展(图3a和图3c)。用rt10gy+erb-(il10)2的组合处理有效控制了肿瘤生长(p＝0.0349，rt10gy对rt10gy+erb-(il10)2在第34天显示1597.6±474.7mm3对329.4±156.5mm3的肿瘤体积)(图3a)。对于用rt10gy和erb-(il10)2的组合处理的肿瘤，5/5未达到2000mm3的体积，与同型对照组的1/5形成对比(图3a)。将单剂量辐射降低到5gy显示，rt5gy+erb-(il10)2无明显协同效应(p＝0.7088，erb-(il10)21940.2±539.7mm3对rt5gy+erb-(il10)21654.3±504.4mm3，第34天)(图3c)。此外，rt10gy和erb-(il10)2的组合显著提高了存活率，如图3b所示。这些数据表明，erb-(il10)2明显改进rt10gy的作用，rt10gy和erb-(il10)2的组合延长了患b16-egfr-siy肿瘤的小鼠的存活时间。施用实例3中获得的fc9-(il10)2或同型对照(人类igg1)开始于rt后的第3天，以1mg/kg的剂量每3至4天i.p.施用，总共3次(除非另外阐明)。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，在第10天予以局部辐照，随后在第13天，每3至4天用0.32mg/kgfc9-(il10)2或0.5mg/kg同型对照i.p.注射，总共3次。测定fc9-(il10)2、rt；fc9-(il10)2、rt以及fc9-(il10)2和rt的组合；fc9-(il10)2和rt的组合的效力，在图3d中展示结果。使用graphpadprism第5.0版软件(sandiego,ca)分析数据。结果表示为平均值±sem。图3d反映肿瘤体积与使用10gy的单剂量rt进行肿瘤攻毒之后的天数之间的关系。用rt10gy+fc9-(il10)2的组合处理有效控制了肿瘤生长(图3d)。数据表明，fc9-(il10)2与rt10gy发挥有效协同效应。实例6测定rt和本申请的免疫缀合物的施用方案为了确定施用方案对与本申请的免疫缀合物结合的rt处理的协同效应的影响，在rt处理后的不同天数提供erb-(il10)2处理。分别在施用rt10gy之前三天(第10天)、与施用rt10gy同时(第13天)或在施用rt10gy之后三天(第16天)对小鼠i.p.注射erb-(il10)2。结果展示在图4中，其中横坐标为肿瘤攻毒后的天数，纵坐标为肿瘤体积。从图4可以看出，所有组合在第10天到第30天对肿瘤生长率有明显作用。尽管所有处理组对肿瘤生长的作用相当(p＝0.5218,rt10gyd10+erb-(il10)2d13对rt10gyd10+erb-(il10)2d10＝853.0±476.2mm3对1318.8±506.7mm3，第30天；p＝0.3115,rt10gyd10+erb-(il10)2d13对rt10gyd10+erb-(il10)2d16＝853.0±476.2mm3对2109.4±1061.2mm3，第30天)，但出人意料地，与同时施用erb-(il10)2和rt或将erb-(il10)2的施用延迟到第16天相比，在rt后大约第3天施用erb-(il10)2发挥出最有效的协同效应。.实例7协同效应为cd8+t细胞依赖性的接着，研究基于rt与erb-(il10)2组合的协同效应的机制。首先，探索在组合处理后效应t细胞和nk细胞在调节抗肿瘤效力方面的功能。用rt和erb-(il10)2处理的小鼠分别进一步接受i.p.注射抗cd4mab(克隆tib207，200微克/小鼠)、抗cd8mab(克隆tib210,200微克/小鼠)或抗nkmab(克隆pk136，200微克/小鼠)，每周一次，在第10天开始，总共施用处理两次。如图5a和图5c中所示，cd4+t细胞或nk细胞的消耗未显著影响组合疗法对肿瘤生长的作用(p＝0.2872，rt10gy+erb-(il10)21mg/kg+抗cd4mab对rt10gy+erb-(il10)21mg/kg＝771.4±172.5mm3对474.8±190.7mm3，第27天；p＝0.1651,rt10gy+erb-(il10)21mg/kg+抗nkmab对rt10gy+erb-(il10)21mg/kg＝940.1±219.7mm3对474.8±190.7mm3，第27天)然而，cd8+t细胞的消耗急剧降低处理效力，导致快速肿瘤外生长(p＝0.0376,rt10gy+erb-(il10)21mg/kg+抗cd8mab对rt10gy+erb-(il10)21mg/kg＝1896.1±499.6mm3对474.8±190.7mm3，第27天)，如图5b中所示。因此，这些结果表明，cd8+t细胞对于组合疗法的抗肿瘤作用至关重要。实例8组合疗法促成对较远肿瘤的异位效应且提高肿瘤肿块中肿瘤特异性cd8+t细胞的功能8.1异位效应在第0天用5×105b16-egfr-siy细胞在右侧腹上(原发性肿瘤)以及用同等数量的细胞在左侧腹上(继发性肿瘤)对c57bl/6小鼠进行s.c.注射。在第10天用rt10gy局部处理原发性肿瘤，并且接着在第13天每3至4天用1mg/kgerb-(il10)2i.p.注射，如所指示进行三次。测量并监测原发性和继发性肿瘤体积。为了评定rt和rt+erb-(il10)2组合的任何异位效应，在两侧腹部对c57bl/6小鼠s.c.注射b16-egfr-siy细胞：辐照右侧腹上的原发性肿瘤以确定直接治疗作用，而不辐照左侧腹上的继发性肿瘤且用于测量潜在间接全身作用。这些处理使得原发性肿瘤的生长显著延迟，类似于图3a中所示。在图6a中展示对继发性肿瘤的作用。用每组5只小鼠进行三个实验。单独erb-(il10)2i.p.注射的作用类似于针对原发性肿瘤所见的作用。然而，虽然单次rt10gy处理使得原发性肿瘤的生长显著延迟，但尚未观察到对于继发性肿瘤的作用(图6a)。相反，与通过施用单独的erb-(il10)2所获得的结果相比，erb-(il10)2与rt的组合使得继发性肿瘤的生长更显著地延迟(p＝0.0009，erb-(il10)2与rt10gy+erb-(il10)2＝970.2±119.6mm3对253.9±71.6mm3，第26天)。综观来说，这些结果表明，单剂量的局部辐射(10gy)不太可能触发异位效应，而rt10gy与erb-(il10)2的组合可以引起对较远肿瘤的显著抗肿瘤作用。8.2增强抗原特异性t细胞反应为了研究组合疗法在增强肿瘤抗原特异性t细胞反应中的作用，将siy肽用于识别siy反应性cd8+t细胞。将酶联免疫斑点(elispot)分析用于使用96孔板对分泌干扰素γ(ifnγ)的细胞进行定量。根据制造商的说明书使用elispot试剂盒(bdbiosciencescat#551083)。如所描述去除肿瘤引流淋巴结(dln)以获得单细胞悬浮液。在4℃下隔夜用5μg/ml纯化抗小鼠ifn-γ(bdbiosciencescat#51-2525kc)预涂96孔elispot板。在存在10μg/mlsiy多肽(sl-9glbiochemcat#057787)或卵白蛋白(ova)多肽(invivogencat#vac-sin)的情况下共同培养5×105个淋巴结细胞/孔，卵白蛋白多肽用作抗原特异性的阴性对照。在培育72小时后，去除细胞，添加2μg/ml生物素化抗小鼠ifn-γ(bdbiosciencescat#51-1818kz)，且将板在室温下孵化2小时。使用链霉亲和素-hrp(bdbiosciencescat#557630)和aec基质(bdbiosciencescat#551951)使斑点可视化，接着进行图像分析和斑点计数。一式两份地测试每一种情况，且展示平均值。如先前所描述，肿瘤接受rt10gy，i.p.施用1mg/kgerb-(il10)2。在第二次施用erb-(il10)2后三天，处死小鼠，并去除肿瘤dln以获得单细胞悬浮液和进行elispot分析。在第二次施用erb-(il10)2后3天(即，第19天)，从用b16-egfr-siy黑色素瘤细胞培育的小鼠分离来自肿瘤dln的淋巴细胞。在elispot分析中用siy或ova肽体外活化来自每一组小鼠的肿瘤引流淋巴结细胞，接着确定分泌ifn-γ的细胞的数量，如图6b中所示。与用单独的rt或erb-(il10)2处理的那些小鼠相比，接受rt和erb-(il10)2的组合处理的小鼠的dln中的siy特异性产生ifn-γ的cd8+t细胞的数量显著增加(p＝0.0026，同型对照对rt+erb-(il10)2；p＝0.0034,erb-(il10)2对rt+erb-(il10)2；p＝0.0064，rt对rt+erb-(il10)2)。总的来说，这些结果表明，rt和erb-(il10)2疗法的组合通过改善肿瘤dln中的肿瘤特异性t细胞的全身性活化以及通过增强肿瘤抗原特异性t细胞在肿瘤微环境中的功能来提高了肿瘤控制效果。8.3在用组合疗法治疗之后衍生活化t细胞fty720(sigma，cat#sml0700-5mg)用于在肿瘤环境中测试t细胞的活化。fty720为亲油性免疫调节鞘氨醇-1-磷酸盐类似物，其通过经由激动剂诱导的受体内在化抑制淋巴细胞从淋巴器官的流出而诱导小鼠的严重外周血淋巴细胞减少症且维持淋巴细胞减少症。b16-egfr-siy细胞s.c.接种到小鼠的两个侧腹。b16-egfr-siy黑色素瘤细胞植入10天后开始，放疗+erb-(il10)2组中的小鼠接受其第一次i.p.注射。接着在3天后，在首次施用减液抗体或fty720之后，从其外周血液制备淋巴细胞悬浮液，且用以下标记：apc-抗-mcd4(克隆gk1.5,biolegend)、fitc-抗-mcd8a(克隆53-6.7,biolegend)、fitc-抗-mcd3(克隆17a2,biolegend)或apc-抗-mnk1.1(克隆pk136,biolegend)。测量和监测两个侧腹上的肿瘤体积。在lifeattune流式细胞仪(life)上分析样本，并分析数据。基于从用每组5至6个小鼠进行的三个实验获得的结果的代表性数据展示于图6c至图6f中。在首次施用fty7203天之后，评估外周血液中的cd4+和cd8+淋巴细胞的分布，发现cd8+t细胞和cd4+t细胞的相对数目分别下降约0.5％和1.5％，如图6c中所示。然而，观察到单独的erb-(il10)21mg/kg的抗肿瘤作用并未通过fty720处理削弱，如图6d中所示。在组合治疗中(即，rt+erb-(il10)2)，fty720针对继发肿瘤明显消除抗肿瘤作用(p＝0.0081，rt10gy+erb-(il10)21mg/kg对rt10gy+erb-(il10)21mg/kg+fty720＝392.5±33.9mm3对1052.4±197.5mm3，第31天)(如图6f中所示)，而仅对原发肿瘤具有轻微影响(p＝0.0665,rt10gy+erb-(il10)21mg/kg对rt10gy+erb-(il10)21mg/kg+fty720＝298.1±73.4mm3对537.9±90.4mm3，第31天)(如图6e中所示)。因此，rt与本申请的免疫缀合物的组合在肿瘤环境中活化t细胞。对于以上实验，针对tmab-(il10)2、28h1-(il10)2、fc9-(il10)2和(il10-fc)2获得类似结果。实例9细胞毒化疗与本申请的免疫缀合物结合的效应9.1根据本申请的免疫缀合物与阿霉素结合的效应如上文在实例4中所描述获得b16-egfr-siy对照肿瘤模型。为比较erb-(il10)2与阿霉素结合的效应，将小鼠分成若干组，每组5只小鼠：同型对照组，用1mg/kg人类igg1(20微克/小鼠)处理；erb-(il10)2组，用1mg/kg(20微克/小鼠)erb-(il10)2处理；阿霉素组，用5mg/kg(100微克/小鼠)阿霉素处理；erb-(il10)2+阿霉素组，用1mg/kgerb-(il10)2加5mg/kg阿霉素处理。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，分别在第7、10、14天i.p.注射erb-(il10)2；在第7天经尾静脉注射阿霉素。结果展示于图7a中。可以看出，对于erb-(il10)2与阿霉素的组合观察到在控制肿瘤生长方面的协同效应。为比较fc9-(il10)2与阿霉素组合，将小鼠分成若干组，每组5只小鼠：同型对照组，用0.5mg/kg人类igg1(10微克/小鼠)处理；fc9-(il10)2组，用0.5mg/kg(10微克/小鼠)fc9-(il10)2处理；阿霉素组，用5mg/kg(100微克/小鼠)阿霉素处理；fc9-(il10)2+阿霉素组，用0.5mg/kgfc9-(il10)2加5mg/kg阿霉素处理。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，分别在第7、10、14天i.p.注射fc9-(il10)2；在第7天经尾静脉注射阿霉素。结果展示于图7b中。可以看出，对于fc9-(il10)2与阿霉素的组合观察到在控制肿瘤生长方面的协同效应。9.2根据本申请的免疫缀合物与奥沙利铂结合的效应如上文在实例4中所描述获得b16-egfr-siy对照肿瘤模型。为比较erb-(il10)2与奥沙利铂结合的效应，将小鼠分成若干组，每组5只小鼠：同型对照组，用0.5mg/kg人类igg1(10微克/小鼠)处理；erb-(il10)2组，用0.5mg/kg(10微克/小鼠)erb-(il10)2处理；奥沙利铂组，用15mg/kg(300微克/小鼠)奥沙利铂处理；erb-(il10)2+奥沙利铂组，用0.5mg/kgerb-(il10)2+15mg/kg奥沙利铂处理。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，分别在第7、10、14天i.p.注射erb-(il10)2；在第7天经尾静脉注射奥沙利铂。结果展示于图7c中。归因于奥沙利铂的高毒性，奥沙利铂组中的所有小鼠在14天后死亡(参见图7i)。可以看出，对于erb-(il10)2与奥沙利铂的组合观察到在控制肿瘤生长方面的协同效应。为比较fc9-(il10)2与奥沙利铂结合的效应，将小鼠分成若干组，每组5只小鼠：同型对照组，用0.5mg/kg人类igg1(10微克/小鼠)处理；fc9-(il10)2组，用0.5mg/kg(10微克/小鼠)fc9-(il10)2处理；奥沙利铂组，用15mg/kg(300微克/小鼠)奥沙利铂处理；fc9-(il10)2+奥沙利铂组，用0.5mg/kgfc9-(il10)2+15mg/kg(300微克/小鼠)奥沙利铂处理。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，分别在第7、10、14天i.p.注射fc9-(il10)2；在第7天经尾静脉注射奥沙利铂。结果展示于图7d中。归因于奥沙利铂的高毒性，奥沙利铂组和fc9-(il10)2+奥沙利铂组中的所有小鼠在14天后死亡(参见图7j)。因此，无法比较各组之间的协同效应。9.3根据本申请的免疫缀合物与ctx(环磷酰胺)结合的效应如上文在实例4中所描述获得b16-egfr-siy对照肿瘤模型。为比较erb-(il10)2与ctx结合的效应，将小鼠分成若干组，每组5只小鼠：pbs组，用pbs缓冲剂处理；erb-(il10)2组，用0.5mg/kg(10微克/小鼠)erb-(il10)2处理；ctx组，用100mg/kg(2毫克/小鼠)ctx处理；erb-(il10)2+ctx组，用0.5mg/kgerb-(il10)2加100mg/kgctx处理。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，分别在第7、10、14天i.p.注射erb-(il10)2；在第7天经尾静脉注射ctx。结果展示于图7e中。可以看出，对于erb-(il10)2与ctx的组合观察到在控制肿瘤生长方面的协同效应。为fc9-(il10)2与ctx结合的效应，将小鼠分成若干组，每组5只小鼠：同型对照组，用1mg/kg人类igg1(20微克/小鼠)处理；fc9-(il10)2组，用0.65mg/kg(13微克/小鼠)fc9-(il10)2处理；ctx组，用100mg/kg(2毫克/小鼠)ctx处理；fc9-(il10)2+ctx组，用0.65mg/kgfc9-(il10)2加100mg/kgctx处理。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，分别在第7、10、14天i.p.注射fc9-(il10)2；在第7天经尾静脉注射ctx。结果展示于图7f中。可以看出，对于fc9-(il10)2与ctx的组合观察到在控制肿瘤生长方面的协同效应。9.4根据本申请的免疫缀合物与长春瑞滨结合的效应如上文在实例4中所描述获得b16-egfr-siy对照肿瘤模型。为比较erb-(il10)2与长春瑞滨结合的效应，将小鼠分成若干组，每组5只小鼠：同型对照组，用0.5mg/kg人类igg1(10微克/小鼠)处理；erb-(il10)2组，用0.5mg/kg(10微克/小鼠)erb-(il10)2处理；长春瑞滨组；用5mg/kg(100微克/小鼠)长春瑞滨处理；erb-(il10)2+长春瑞滨组；用0.5mg/kgerb-(il10)2+5mg/kg长春瑞滨处理；在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，分别在第7、10、14天i.p.注射erb-(il10)2；在第7天经尾静脉注射长春瑞滨。结果展示于图7g中。可以看出，对于erb-(il10)2与长春瑞滨的组合观察到在控制肿瘤生长方面的协同效应。为比较fc9-(il10)2与长春瑞滨结合的效应，将小鼠分成若干组，每组5只小鼠：同型对照组，用0.5mg/kg人类igg1(10微克/小鼠)处理；fc9-(il10)2组，用0.5mg/kg(10微克/小鼠)fc9-(il10)2处理；长春瑞滨组，用5mg/kg(100微克/小鼠)长春瑞滨处理；fc9-(il10)2+长春瑞滨组，用0.5mg/kgfc9-(il10)2+5mg/kg长春瑞滨处理。在第0天用b16-egfr-siy细胞s.c.接种c57bl/6小鼠，分别在第7、10、14天i.p.注射fc9-(il10)2；在第7天经尾静脉注射长春瑞滨。结果展示于图7h中。可以看出，对于fc9-(il10)2与长春瑞滨的组合观察到在控制肿瘤生长方面的协同效应。图7i展示对erb-(il10)2、奥沙利铂及erb-(il10)2与奥沙利铂的组合的存活率的影响。图7j展示对fc9-(il10)2、奥沙利铂及fc9-(il10)2与奥沙利铂的组合的存活率的影响。对于以上实验，从tmab-(il10)2、28h1-(il10)2和(il10-fc)2获得类似结果。另外，发现本申请的免疫缀合物在与各种其它化疗药物组合施用时具有(选择性)协同效应。虽然本文已展示和描述本申请的优选实施例，但本领域的技术人员将显而易见，这些实施例仅仅通过实例的方式提供。本申请不打算受说明书中提供的具体实例限制。虽然已参考前述说明书描述本申请，但本文实施例的描述和说明不打算以限制性意义进行。本领域的技术人员将想到不脱离本申请的众多变化形式、改变和替换。此外，将理解，取决于各种条件和变量，本申请的所有方面不限于本文中所述的具体叙述、配置或相对比例。应理解，本文所描述的本申请实施例的各种替代方案可以用于实践本申请。因此，设想本申请应同样涵盖任何这类替代方案、修改、变化形式或等效物。以下实施例旨在限定本申请的范围，并且借此涵盖这些实施例范围内的方法和结构以及其等效物。序列表<110>苏州丁孚靶点生物技术有限公司<120>用于癌症治疗的方法和组合物<130>0027-pa-017cn<160>91<170>patentinversion3.5<210>1<211>227<212>prt<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>y349c+t366w<400>1asplysthrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleugly151015glyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumet202530ileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhis354045gluasnprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluval505560hisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyr65707580argvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasngly859095lysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproile100105110glulysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnval115120125cysthrleuproproserargaspgluleuthrlysasnglnvalser130135140leutrpcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglu145150155160trpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpropro165170175valleuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrval180185190asplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmet195200205hisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuser210215220proglylys225<210>2<211>227<212>prt<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>d356c+t366s+l368a+y407v+f405k<400>2asplysthrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleugly151015glyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumet202530ileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhis354045gluaspprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluval505560hisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyr65707580argvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasngly859095lysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproile100105110glulysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnval115120125tyrthrleuproproserargcysgluleuthrlysasnglnvalser130135140leusercysalavallysglyphetyrproseraspilealavalglu145150155160trpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpropro165170175valleuaspseraspglyserphelysleuvalserlysleuthrval180185190asplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmet195200205hisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuser210215220proglylys225<210>3<211>227<212>prt<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>y349c+t366w+f405k<400>3asplysthrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleugly151015glyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumet202530ileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhis354045gluasnprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluval505560hisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyr65707580argvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasngly859095lysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproile100105110glulysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnval115120125cysthrleuproproserargaspgluleuthrlysasnglnvalser130135140leutrpcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglu145150155160trpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpropro165170175valleuaspseraspglyserphelysleutyrserlysleuthrval180185190asplysserargtrpg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