使用基于RNAi的策略控制真菌病原体的制作方法

文档序号:20955502发布日期:2020-06-02 20:23阅读:来源:国知局

技术特征:

1.病原体抗性植物,其包含异源表达盒,所述表达盒包含与多核苷酸可操作地连接的启动子,所述多核苷酸抑制表1或表2中的一个或多个靶基因或其片段的真菌病原体表达,其中与缺乏所述表达盒的对照植物相比,所述植物对真菌病原体具有增加的抗性。

2.如权利要求1所述的病原体抗性植物,其中所述病原体为葡萄孢菌(botrytis)、轮枝菌(verticillium)、大丽轮枝菌(v.dahilae)或核盘菌(sclerotinia)。

3.如权利要求1-2中任一项所述的病原体抗性植物,其中所述多核苷酸包含反义核酸或抑制性rna(rnai),其靶向表1或表2中的一个或多个靶基因或其片段。

4.如权利要求1-3中任一项所述的病原体抗性植物,其中所述多核苷酸包含具有与表1或表2中的一个或多个靶基因中的至少15个连续核苷酸相同或互补的序列的核酸。

5.如权利要求1-4中任一项所述的病原体抗性植物,其中所述表达盒还包含抑制表1或表2中的第二靶基因的真菌表达的第二多核苷酸。

6.如权利要求1-5中任一项所述的病原体抗性植物,其中所述植物还包含第二表达盒,其中所述第二表达盒包含与第二多核苷酸可操作地连接的第二启动子,所述第二多核苷酸抑制表1或表2中的第二靶基因的真菌表达。

7.如权利要求1-6中任一项所述的病原体抗性植物,其中所述植物为以下属的物种:芦笋属(asparagus)、颠茄属(atropa)、燕麦属(avena)、芸苔属(brassica)、柑橘属(citrus)、西瓜属(citrullus)、辣椒属(capsicum)、黄瓜属(cucumis)、南瓜属(cucurbita)、胡萝卜属(daucus)、草莓属(fragaria)、大豆属(glycine)、棉属(gossypium)、向日葵属(helianthus)、萱草属(heterocallis)、大麦属(hordeum)、天仙子属(hyoscyamus)、莴苣属(lactuca)、亚麻属(linum)、毒麦属(lolium)、番茄属(lycopersicon)、苹果属(malus)、木薯属(manihot)、马郁兰属(majorana)、苜蓿属(medicago)、烟草属(nicotiana)、稻属(oryza)、稷属(panieum)、狼尾草属(pannesetum)、鳄梨属(persea)、豌豆属(pisum)、梨属(pyrus)、李属(prunus)、萝卜属(raphanus)、黑麦属(secale)、千里光属(senecio)、白芥属(sinapis)、茄属(solanum)、高粱属(sorghum)、胡卢巴属(trigonella)、小麦属(triticum)、葡萄属(vitis)、豇豆属(vigna)或玉蜀黍属(zea)。

8.培育权利要求1-7中任一项所述的多种病原体抗性植物的方法。

9.制备权利要求1-7中任一项所述的病原体抗性植物的方法,所述方法包括将包含所述表达盒的核酸引入多种植物;以及

选择包含所述表达盒的植物。

10.分离的核酸,其包含权利要求1-7中任一项所述的表达盒。

11.宿主细胞,其包含权利要求10所述的核酸。

12.制备病原体抗性植物的方法,所述方法包括:

使植物与构建体接触,所述构建体包含与多核苷酸可操作地连接的启动子,所述多核苷酸抑制表1或表2中的一个或多个靶基因的真菌表达,其中与未与所述构建体接触的对照植物相比,所述植物对真菌病原体具有增加的抗性。

13.如权利要求12所述的方法,其中所述病原体为葡萄孢菌、轮枝菌、大丽轮枝菌、核盘菌。

14.如权利要求12或13所述的方法,其中所述多核苷酸包含反义核酸或抑制性rna(rnai),其靶向表1或表2中的靶基因。

15.如权利要求12-14中任一项所述的方法,其中所述多核苷酸包含具有与表1或表2的靶基因中的至少15个连续核苷酸相同或互补的序列的核酸。

16.如权利要求12-15中任一项所述的方法,其中所述构建体还包含抑制表1或表2中的第二靶基因的真菌表达的第二多核苷酸。

17.如权利要求12-15中任一项所述的方法,其中所述方法还包括使所述植物与第二构建体接触,所述第二构建体包含与第二多核苷酸可操作地连接的第二启动子,所述第二多核苷酸抑制表1或表2中的第二真菌病原体靶基因的真菌表达。

18.如权利要求12-17中任一项所述的方法,其中所述植物为以下属的物种:芦笋属、颠茄属、燕麦属、芸苔属、柑橘属、西瓜属、辣椒属、黄瓜属、南瓜属、胡萝卜属、草莓属、大豆属、棉属、向日葵属、萱草属、大麦属、天仙子属、莴苣属、亚麻属、毒麦属、番茄属、苹果属、木薯属、马郁兰属、苜蓿属、烟草属、稻属、稷属、狼尾草属、鳄梨属、豌豆属、梨属、李属、萝卜属、黑麦属、千里光属、白芥属、茄属、高粱属、胡卢巴属、小麦属、葡萄属、豇豆属或玉蜀黍属。

19.增加植物或植物的一部分的病原体抗性的方法,所述方法包括:

使所述植物或所述植物的一部分与靶向表1或表2中的真菌病原体靶基因的dsrna或rna(srna)双链体接触,其中与未与所述dsrna或srna双链体接触的对照植物或对照植物的一部分相比,所述植物或所述植物的一部分对真菌病原体具有增加的抗性。

20.如权利要求19所述的方法,其中所述病原体为葡萄孢菌、轮枝菌、大丽轮枝菌、核盘菌。

21.如权利要求19或20所述的方法,其中所述dsrna或srna包含在脂质体中。

22.如权利要求19-21中任一项所述的方法,其中所述方法还包括使所述植物或所述植物的一部分与靶向表1或表2中的第二靶基因,或者靶向另一病原体中的同源基因的第二dsrna或第二组srna双链体接触。

23.如权利要求19-22中任一项所述的方法,其中所述方法包括使所述植物或所述植物的一部分与靶向来自第一种类的真菌病原体的表1或表2中的一个或多个靶基因的一种或多种dsrna或srna双链体接触,以及还包括使所述植物或所述植物的一部分与靶向来自第二种类的真菌病原体的表1或表2中的一个或多个靶基因的一种或多种dsrna或srna双链体接触。

24.如权利要求19-23中任一项所述的方法,其中将所述dsrna或srna双链体喷到所述植物或所述植物的一部分上。

25.如权利要求19-24中任一项所述的方法,其中所述植物为以下属的物种:芦笋属、颠茄属、燕麦属、芸苔属、柑橘属、西瓜属、辣椒属、黄瓜属、南瓜属、胡萝卜属、草莓属、大豆属、棉属、向日葵属、萱草属、大麦属、天仙子属、莴苣属、亚麻属、毒麦属、番茄属、苹果属、木薯属、马郁兰属、苜蓿属、烟草属、稻属、稷属、狼尾草属、鳄梨属、豌豆属、梨属、李属、萝卜属、黑麦属、千里光属、白芥属、茄属、高粱属、胡卢巴属、小麦属、葡萄属、豇豆属或玉蜀黍属。

26.如权利要求19-25中任一项所述的方法,其中所述植物的一部分为叶、果实、蔬菜或花。

27.分离的合成脂质体,其包含靶向表1或2中的一个或多个靶基因的dsrna、srna或srna双链体。


技术总结
本发明涉及病原体抗性植物。在一方面,提供了包含异源表达盒的植物,其中所述表达盒包含抑制真菌病原体基因表达的多核苷酸,并且其中与缺乏所述表达盒的对照植物相比,所述植物对真菌病原体或多种病原体具有增加的抗性。在另一方面,使植物或植物的一部分与抑制真菌靶基因或来自多种病原体的基因的表达的双链RNA或小RNA接触,其中与未与所述RNA接触的对照植物相比,所述植物对病原体或多种病原体具有增加的抗性。还提供了制备和培育病原体抗性植物的方法。

技术研发人员:金海翎
受保护的技术使用者:加利福尼亚大学董事会
技术研发日:2018.10.04
技术公布日:2020.06.02
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