一种嗜血杆菌体外药敏试验检测条的制作方法

本发明涉及一种药敏试验工具，具体地，涉及一种嗜血杆菌体外药敏试验检测条。

背景技术：

体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验(ast)，也就是耐药试验，是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感(或耐受)程度，以指导临床合理选用抗生素药物的微生物学试验。

各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的药敏试验结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。一种抗生素如果以很小的剂量便可抑制、杀灭致病菌，则称该种致病菌对该抗生素“敏感”。反之，则称为“不敏感”或“耐药”。为了解致病菌对哪种抗菌素敏感，以合理用药，减少盲目性，往往应进行药敏试验。其大致方法是：从病人的感染部位采取含致病菌的标本，接种在适当的培养基上，于一定条件下培养；同时将分别沾有一定量各种抗生素的纸片贴在培养基表面(或用不锈钢圈，内放定量抗生素溶液)，培养一定时间后观察结果。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现不同大小的抑制病菌生长而形成的“空圈”，称为抑菌圈。抑菌圈大小与致病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系。于是可以根据试验结果有针对性地选用抗生素。根据美国国家临床实验室标准化委员会(nccls)近期推荐的标准，对非苛氧菌(肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌)和苛氧菌(嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌)选择常规药敏试验的首选药物(a组抗生素)或临床使用的主要抗生素(b组抗生素)进行药敏试验。

目前滥用抗生素，致使抗药菌增加，甚至因长期大量使用广谱抗生素，杀伤体内正常微生物，失去微生物的相互制约作用，从而使一些少见的或一般情况下的非致病菌大量繁殖，引起所谓“二次感染”的情况屡有发生，给治疗造成人为的困难。因此，提倡使用药敏试验，坚持合理用药十分重要。

细菌体外药敏试验的方式主要有三种：琼脂扩散法、琼脂稀释法和e-test法。

第一种称为琼脂扩散法。具体方法是将分离出的待检测细菌制成相应浓度的菌液，将菌液涂布到适应的琼脂平板上后，粘贴含有被检测抗菌药物的略大于6mm的圆形纸片，再经过适当温度、气体、时间培养后，纸片周围会出现一个细菌不生长的圈，此圈大小可反映细菌对药物的敏感性。此方法来源于琼脂稀释法，以其操作简单、检测灵活等被广泛使用。缺点是其一，个别药物对个别细菌出现的抑菌圈大小和其敏感性关系不一致。其二，此为二级方法，只能做到定性检测。其三，许多细菌还没有敏感性标准。其四，尽管临床分离的多数细菌均可在mh琼脂平板上检测，还有一些细菌只能在其各自专用培养基检测。嗜血杆菌是其中之一。由于嗜血杆菌较少遇到，而其药敏所需培养基保质期很短，所以，其药敏检测就很混乱，有些不得已做法结果准确性不能保证。

第二种称为琼脂稀释法。此方法是所有方法的基础。具体方法是将抗菌药物加入适于被检测细菌生长的培养基中制成琼脂平板，一个药物一般需做15不同浓度平板，药物浓度按倍比稀释，如第一个512μg/ml、第二个256μg/ml、第三128μg/ml依次排列。将被检测细菌菌液分别点种到每个平板上，经过适当温度、气体和时间培养后，细菌不能再接种点生长的平板所含药物浓度即为最低抑菌浓度mic(minimalinhibitconcentration)。此方法有点是具有定量特点和一次可检测多个细菌。缺点是多数药物在培养基中不稳定而保质期更短，其操作十分不便，所以临床实验室基本不使用本方法用于日常检测。此方法派生出了肉汤稀释法和微量肉汤稀释法。此方法用于回顾性科研和其他方法校准。同样此方法也不适合日常用于嗜血杆菌检测。

第三种为e-test法。此方法属较新的方法，也是和本申请最接近的方法。具体方法是在条形载体上含有一个抗菌药物，药物量在条上依次增减，在条上标识药物相当最低抑菌浓度如顺序512、256、128、64直到0.03μg/ml，也就是15个mic倍比稀释值，此即是e-test条。将菌液涂布到适应的琼脂平板上后，粘贴eest条，再经过适当温度、气体、时间培养后，条周围会出现个细菌不生长的卵圆形圈，卵圆形圈尖对应的数即此细菌的mic。此方法具备前两种优点。缺点不同细菌需要各自专用培养基。嗜血杆菌专用培养基保质期很短，实际使用同样十分不便。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种体外药敏试验检测条，加入了苛养菌所需生长因子，使在常规应用培养基上不能检测苛养菌药敏问题得到解决。

为了达到上述目的，本发明提供了一种嗜血杆菌体外药敏试验检测条，其中，所述检测条为长条形，其一面在检测区域均匀地设有苛养菌生长所需的生长因子，并沿长度方向间隔地依次设有按顺序倍比减量的抗菌药物，检测条的另一面在相应位置分别设有刻度以及与抗菌药物量对应的最低抑菌浓度(mic)值；所述的检测条上的抗菌药物是对检测药物进行倍比稀释后，将所得的不同浓度的药物溶液涂布在检测条的相应位置上，再干燥而成。

上述的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，其中，所述的苛养菌包含嗜血杆菌，所述的生长因子包含嗜血杆菌生长所需的v因子和x因子。将适合苛养菌生长的含有适量的苛养菌生长因子的溶液均匀涂布在检测条的一面，再进行干燥；溶液中v因子和x因子的质量浓度优选为0.03％～0.05％，采用双蒸水配制而成。v因子(vfacto)是嗜血杆菌属(haemophilus)的某些种(例如流感嗜血菌h.influenza)生长所必需的因子。v因子为辅酶i(即烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，nad)或辅酶ii(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，nadp)。x因子(xfactor)是一种化学因子，是嗜血菌属的某些种细菌生长所必需的，可由正铁血红素(hemin)代替。嗜血杆菌需要x因子和v因子的存在才可以生长，常见的肉汤和普通的琼脂培养基不能生长。

上述的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，其中，所述的检测条的宽度为3mm，比国外进口的4mm更适合。

上述的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，其中，所述的检测条上沿长度方向间隔地设有8～15个倍比稀释的溶液浓度梯度。检测条长度与检测范围有关，优选为8～10个梯度即可完全达到临床实验室要求，也可以做15个梯度或更多，但超过15个梯度后检测条会过长，检测所需琼脂平板必须特制，只可在科研中应用。

上述的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，其中，所述的检测条上每个浓度梯度的长度为0.25mm，相邻的浓度梯度的间隔优选为大于或等于0.25mm。

上述的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，其中，所述的倍比稀释的溶液浓度梯度在检测条的另一面对应设置的最低抑菌浓度依次优选为512μg/ml、256μg/ml、128μg/ml、64μg/ml直到0.03μg/ml，一共15个mic倍比稀释值。

上述的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，其中，所述的检测条上涂有溶液的一面贴在涂布了被检测的苛养菌的琼脂平板培养基(mha)上，设有刻度和最低抑菌浓度值的一面朝上。

上述的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，其中，所述的琼脂平板培养基上的苛养菌经过适当温度、气体、时间条件进行培养后，在检测条周围出现一个细菌不生长的卵圆形圈，卵圆形圈尖对应的刻度和最低抑菌浓度值即为该细菌的最低抑菌浓度。由于生长因子来自检测条，如果检测条上不含抗菌药物，检测菌生长会出现距离检测条越近生长越好，导致看上去并非完整卵圆形，但判别的点是检测条最近点，并不影响最终判断。优选地，贴上检测条后培养15～18小时，然后读取抑菌浓度。

本发明提供的嗜血杆菌体外药敏试验检测条具有以下优点：

本发明可以在微生物实验室最基础必备的mh琼脂平板检测苛养菌体外药敏试验。解决了临床实验室当遇到苛养菌时尴尬现象，保证了检验结果真实性，克服了苛养菌检测方面的不足。

附图说明

图1为本发明的嗜血杆菌体外药敏试验检测条的示意图。

图2为本发明的嗜血杆菌体外药敏试验检测条的使用示意图。

图3为本发明的嗜血杆菌体外药敏试验检测条的判读方式示意图。

图4为本发明的嗜血杆菌体外药敏试验检测条的读数示意图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的具体实施方式作进一步地说明。

如图1所示，本发明提供的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，该检测条为长条形，其一面在检测区域均匀地设有苛养菌生长所需的生长因子，并沿长度方向间隔地依次设有按顺序倍比减量的抗菌药物，检测条的另一面在相应位置分别设有刻度以及与抗菌药物量对应的最低抑菌浓度值；检测条上的抗菌药物是对检测药物进行倍比稀释后，将所得的不同浓度的药物溶液涂布在检测条的相应位置上，再干燥而成。

苛养菌包含嗜血杆菌，生长因子包含嗜血杆菌生长所需的v因子和x因子。

检测条的宽度优选为3mm。

检测条上沿长度方向间隔地设有8～15个倍比稀释的溶液浓度梯度。检测条上每个浓度梯度的长度为0.25mm。

倍比稀释的溶液浓度梯度在检测条的另一面对应设置的最低抑菌浓度依次为512μg/ml、256μg/ml、128μg/ml、64μg/ml直到0.03μg/ml。

检测条上涂有溶液的一面贴在涂布了被检测的苛养菌的琼脂平板培养基上，设有刻度和最低抑菌浓度值的一面朝上。琼脂平板培养基上的苛养菌经过培养后，在检测条周围出现一个细菌不生长的卵圆形圈，卵圆形圈尖对应的刻度和最低抑菌浓度值即为该细菌的最低抑菌浓度。

下面结合实施例对本发明提供的嗜血杆菌体外药敏试验检测条做更进一步描述。

实施例1

一种嗜血杆菌体外药敏试验检测条，该检测条为长条形，其一面在检测区域均匀地设有苛养菌生长所需的生长因子，并沿长度方向间隔地依次设有按顺序倍比减量的抗菌药物，检测条的另一面在相应位置分别设有刻度以及与抗菌药物量对应的最低抑菌浓度(mic)值；检测条上的抗菌药物是对检测药物进行倍比稀释后，将所得的不同浓度的药物溶液涂布在检测条的相应位置上，再干燥而成。

苛养菌包含嗜血杆菌，生长因子包含嗜血杆菌生长所需的v因子和x因子。将适合苛养菌生长的含有适量的苛养菌生长因子的溶液均匀涂布在检测条的一面，再进行干燥；溶液中v因子和x因子的质量浓度优选为0.03％～0.05％，采用双蒸水配制而成。v因子(vfacto)是嗜血杆菌属(haemophilus)的某些种(例如流感嗜血菌h.influenza)生长所必需的因子。v因子为辅酶i(即烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，nad)或辅酶ii(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，nadp)。x因子(xfactor)是一种化学因子，是嗜血菌属的某些种细菌生长所必需的，可由正铁血红素(hemin)代替。嗜血杆菌需要x因子和v因子的存在才可以生长，常见的肉汤和普通的琼脂培养基不能生长。

检测条的宽度为3mm，比国外进口的4mm更适合。

检测条上沿长度方向间隔地设有8～15个倍比稀释的溶液浓度梯度。检测条长度与检测范围有关，优选为8～10个梯度即可完全达到临床实验室要求，也可以做15个梯度或更多，但超过15个梯度后检测条会过长，检测所需琼脂平板必须特制，只可在科研中应用。

检测条上每个浓度梯度的长度为0.25mm，相邻的浓度梯度的间隔优选为大于或等于0.25mm。

倍比稀释的溶液浓度梯度在检测条的另一面对应设置的最低抑菌浓度依次优选为512μg/ml、256μg/ml、128μg/ml、64μg/ml直到0.03μg/ml，一共15个mic倍比稀释值。

检测条上涂有溶液的一面贴在涂布了被检测的苛养菌的琼脂平板培养基(mha)上，设有刻度和最低抑菌浓度值的一面朝上。

琼脂平板培养基上的苛养菌经过适当温度、气体、时间条件进行培养后，在检测条周围出现一个细菌不生长的卵圆形圈，卵圆形圈尖对应的刻度和最低抑菌浓度值即为该细菌的最低抑菌浓度。由于生长因子来自检测条，如果检测条上不含抗菌药物，检测菌生长会出现距离检测条越近生长越好，导致看上去并非完整卵圆形，但判别的点是检测条最近点，并不影响最终判断。优选地，贴上检测条后培养15～18小时，然后读取抑菌浓度。参见图2～4所示。

本发明提供的嗜血杆菌体外药敏试验检测条，e-test条的基础上加入了苛养菌所需生长因子，可以在微生物实验室最基础必备的mh琼脂平板检测苛养菌体外药敏试验，使在常规应用培养基上不能检测苛养菌药敏问题得到解决。

尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。