一种分离绵羊肺炎支原体的方法与流程

文档序号:19159998发布日期:2019-11-16 01:14阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分离绵羊肺炎支原体的方法,其特征在于:包括以下步骤:

(1)采集样品及样品处理,得到样品接种液;

(2)鸡胚接种:将步骤(1)得到的样品接种液接种7-8日龄健康spf鸡胚,接种后,将鸡胚置于孵化箱中继续培养;

(3)绵羊肺炎支原体的分离:收集接种后死亡鸡胚和/或9d后未死亡鸡胚,取鸡胚尿囊液进行绵羊肺炎支原体进行活菌检测,若收集鸡胚尿囊液绵羊肺炎支原体阳性,进行保存;若第1代鸡胚尿囊液均为阴性,则将收集鸡胚尿囊液盲传鸡胚,方法同上,若盲传3代仍为阴性,则判定样品为绵羊肺炎支原体阴性,弃去。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述采集样品及样品处理的具体方法为:无菌棉签采集羊鼻拭子;鼻拭子样品中加入灭菌的0.01mph7.2pbs,用振荡器充分振荡,将棉签挤压干净,弃去棉签,用灭菌的0.01mph7.2pbs补足;取上述样品处理液经滤膜孔径为0.45μm的无菌滤器过滤除菌,取1.0ml滤过液,加入青霉素,置4℃作用12~18小时,得到样品接种液。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中,所述接种的方法为鸡胚卵黄囊接种,接种量为每枚0.2ml。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中,所述孵化箱中培养的温度为37.0~37.5℃,湿度为50%。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种分离绵羊肺炎支原体的方法在绵羊肺炎支原体分离中的应用。


技术总结
本发明提供一种分离绵羊肺炎支原体的方法,包括以下步骤:(1)采集样品及样品处理,得到样品接种液;(2)鸡胚接种;(3)绵羊肺炎支原体的分离:收集接种后死亡鸡胚和/或9d后未死亡鸡胚,取鸡胚尿囊液进行绵羊肺炎支原体进行活菌检测,若收集鸡胚尿囊液绵羊肺炎支原体阳性,进行保存;若第1代鸡胚尿囊液均为阴性,则将收集鸡胚尿囊液盲传鸡胚,方法同上,若盲传3代仍为阴性,则判定样品为绵羊肺炎支原体阴性,弃去。本发明的方法操作简单,不需要配制成分复杂的绵羊肺炎支原体培养基,避免了现有技术分离培养基配制中常需要高压灭菌或配备大容量滤器等问题;本发明方法可获得不含动物血清的绵羊肺炎支原体。

技术研发人员:郝华芳;陈胜利;储岳峰;袁婷;颜新敏;刘永生
受保护的技术使用者:中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日:2019.09.04
技术公布日:2019.11.15
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1