一种快速检测白色念珠菌的试剂盒的制作方法

文档序号:19419329发布日期:2019-12-14 01:15阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种快速检测白色念珠菌的特异性引物对,其特征在于,特异性引物对的核苷酸序列如下:

ft:5’-gtcaaagcgatcccgccttactgagcgtcgtttctccct-3’;seqidno.1;

bt:5’-cattccgccctagcgaaactggatatacgtggtagacgttgc-3’;seqidno.2;

if:5’-ctcaacaccaaacccagcgg-3’;seqidno.3;

ib:5’-acattgcttgcggcg-3’;seqidno.4。

2.一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,其特征在于,包含权利要求1的特异性引物对。

3.根据权利要求2的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,其特征在于,包括试剂一、试剂二和封闭剂;

其中,试剂一包含引物ft、bt,引物if、ib,bstdna聚合酶、dntp和指示剂;试剂二包含tris-hcl、硫酸铵、硫酸镁、氯化钾、tween-20和甜菜碱,ph8.8;

封闭剂为石蜡。

4.根据权利要求3的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,其特征在于,最终工作体系中,各试剂浓度为:

ft、bt各1.6μm,if、ib各0.8μm,dntp各1.4mm,bstdna聚合酶8u,tris-hcl20.0mm,硫酸铵10mm,氯化钾50mm,硫酸镁8mm,tween-200.1%,甜菜碱0.8m,ph8.8。

5.根据权利要求3的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,其特征在于,指示剂包括ph指示剂;ph指示剂为甲酚红-苯酚红指示剂,最终工作体系中,甲酚红浓度0.08mm,苯酚红浓度0.02mm。

6.利用权利要求2-5任一所述的试剂盒快速检测白色念珠菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)利用chelex裂解液,加热提取待检测样品的核酸;

(2)以步骤(1)核酸为模板加入试剂盒的试剂一中,后与试剂二进行混合,加入封闭液防止污染;

(3)在65-67℃的条件下,恒温扩增30-60min,显色法观察判断结果和/或利用实时浊度法进行检测。

7.根据权利要求6所述的快速检测白色念珠菌的方法,其特征在于,试剂盒的工作体系为25μl,包括:试剂一1μl,ph为8.8的试剂二12.5μl和dna模板11.5μl。

8.根据权利要求6所述的快速检测白色念珠菌的方法,其特征在于,步骤(1)中将200μl样本或样本稀释液加入2mlchelex裂解液,充分混匀,裂解条件为90℃-95℃加热10min,冷却后的上清液即可作为待扩增的核酸模板;

所述chelex裂解液的配制:取5.0gchelex-100和1.0mltritonx-100溶于100mlte缓冲液中制成;所述te缓冲液包括:tris10mm,edta1mm。


技术总结
本发明公开了一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,包括试剂一、试剂二和封闭剂;试剂一包含引物Ft、Bt,引物IF、IB,Bst DNA聚合酶,dNTP和指示剂;试剂二包含Tris‑HCl、硫酸铵、硫酸镁、氯化钾、Tween‑20和甜菜碱,pH 8.8。本发明提供的试剂盒采用独特的缓冲体系,具有扩增兼容性较强的优点,无需彻底去除蛋白等杂质,便能进行高效特异扩增,检测灵敏,快速准确。

技术研发人员:王静;刘威;慈颖;张乔;张晓龙;杨燕;孙筱霞
受保护的技术使用者:中国检验检疫科学研究院
技术研发日:2019.10.10
技术公布日:2019.12.13
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