1.一种快速检测白色念珠菌的特异性引物对,其特征在于,特异性引物对的核苷酸序列如下:
ft:5’-gtcaaagcgatcccgccttactgagcgtcgtttctccct-3’;seqidno.1;
bt:5’-cattccgccctagcgaaactggatatacgtggtagacgttgc-3’;seqidno.2;
if:5’-ctcaacaccaaacccagcgg-3’;seqidno.3;
ib:5’-acattgcttgcggcg-3’;seqidno.4。
2.一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,其特征在于,包含权利要求1的特异性引物对。
3.根据权利要求2的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,其特征在于,包括试剂一、试剂二和封闭剂;
其中,试剂一包含引物ft、bt,引物if、ib,bstdna聚合酶、dntp和指示剂;试剂二包含tris-hcl、硫酸铵、硫酸镁、氯化钾、tween-20和甜菜碱,ph8.8;
封闭剂为石蜡。
4.根据权利要求3的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,其特征在于,最终工作体系中,各试剂浓度为:
ft、bt各1.6μm,if、ib各0.8μm,dntp各1.4mm,bstdna聚合酶8u,tris-hcl20.0mm,硫酸铵10mm,氯化钾50mm,硫酸镁8mm,tween-200.1%,甜菜碱0.8m,ph8.8。
5.根据权利要求3的一种快速检测白色念珠菌的试剂盒,其特征在于,指示剂包括ph指示剂;ph指示剂为甲酚红-苯酚红指示剂,最终工作体系中,甲酚红浓度0.08mm,苯酚红浓度0.02mm。
6.利用权利要求2-5任一所述的试剂盒快速检测白色念珠菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)利用chelex裂解液,加热提取待检测样品的核酸;
(2)以步骤(1)核酸为模板加入试剂盒的试剂一中,后与试剂二进行混合,加入封闭液防止污染;
(3)在65-67℃的条件下,恒温扩增30-60min,显色法观察判断结果和/或利用实时浊度法进行检测。
7.根据权利要求6所述的快速检测白色念珠菌的方法,其特征在于,试剂盒的工作体系为25μl,包括:试剂一1μl,ph为8.8的试剂二12.5μl和dna模板11.5μl。
8.根据权利要求6所述的快速检测白色念珠菌的方法,其特征在于,步骤(1)中将200μl样本或样本稀释液加入2mlchelex裂解液,充分混匀,裂解条件为90℃-95℃加热10min,冷却后的上清液即可作为待扩增的核酸模板;
所述chelex裂解液的配制:取5.0gchelex-100和1.0mltritonx-100溶于100mlte缓冲液中制成;所述te缓冲液包括:tris10mm,edta1mm。