一种杂交肉羊专用复合菌制剂及其制备方法与流程

文档序号:19741423发布日期:2020-01-18 05:16阅读:252来源:国知局

本发明属于杂交肉羊用微生态制剂,尤其涉及一种杂交肉羊专用复合菌制剂及其制备方法。



背景技术:

杜泊羊遗传性很稳定,无论纯繁后代或改良后代,都表现出极好的生产性能与适应能力,特别是产肉性能,肉中脂肪分布均匀,为高品质胴体。为中国引进和国产的肉用绵羊品种都是不可比拟的。生长良好的羔羊,其胴体品质无论在形状或脂肪分布方面均能达到优秀的标准。目前国内引进品种以白头为主,黑头很少有纯种引进,我们通过引进澳大利亚纯种黑头杜泊羊的胚胎,以小尾寒羊和湖羊为受体母羊,通过胚胎移植技术获得纯种黑头杜泊羊良种群。获得的纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊,通过同期发情,子宫角受精等技术杂交,建立并扩大优质f1代杂交肉羊群。

纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代肉羊,羔羊生长迅速,6月龄体重高达52公斤以上,并具有早期采食的能力,出肉率高达46%,肥羔屠宰率高达55%,肌间脂肪丰富,肉质鲜美,板皮附加值高,是国际畅销的高端皮革原料。但这种杂交肉羊由于生长迅速,羔羊饲养条件要求高,肠道菌群易失衡,导致羔羊肠道疾病,饲料利用率降低。现有技术中也有调理肉羊肠道菌群的微生物制剂,但用于纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代肉羊,效果并不理想。

现有技术存在以下技术缺陷:用于纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代肉羊,羔羊疾病预防效果差,不能很好的调理羔羊肠道菌群,导致羔羊饲料利用率低,上述杂交肉羊品质较差。



技术实现要素:

针对以上技术问题,本发明提供一种杂交肉羊专用复合菌制剂及其制备方法,针对纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代肉羊,可以很好的改善肉羊肠道菌群平衡,预防杂交肉羔羊疾病、提高饲料利用率,改善杂交肉羊品质;同时,无毒、无抗药性、无残留。

本发明杂交肉羊专用复合菌制剂的制备方法,生产成本低、操作简便。

为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:

一种杂交肉羊专用复合菌制剂,由以下重量份的原料制备而成:

枯草芽孢杆菌cicc100905-15份

枯草芽孢杆菌cicc2044510-20份

解淀粉芽孢杆菌cicc230435-10份

乳酸乳球菌cicc2360910-20份

两歧双歧杆菌cicc616810-20份

嗜酸乳杆菌accc110735-15份

产朊假丝酵母cicc180710-20份

酿酒酵母cicc14215-10份

米曲霉cicc414785-10份。

一种杂交肉羊专用复合菌制剂的制备方法,包括以下步骤:

步骤1、培养枯草芽孢杆菌cicc10090

将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌cicc10090菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为15~30%的活化培养基;所述活化培养基为lb培养基,在培养温度为28~30℃,摇瓶转速140~160rpm培养10~12h;

将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为0.1~0.5%,培养温度为28~30℃,种子罐搅拌转速220~240rpm,培养10~12h,菌种达到对数生长期;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为5~10%,在培养温度为28~30℃,发酵罐搅拌转速200~220rpm培养36~42h,发酵罐中枯草芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上,含量≥1010个/ml,然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为玉米粉20~25g/l、葡萄糖5~10g/l、豆粕粉30~40g/l、氯化钙1~3g/l、硫酸镁1~3g/l和硫酸锰0.5~0.8g/l。

步骤2、培养枯草芽孢杆菌cicc20445

将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌cicc20445菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为15~30%的活化培养基;所述活化培养基的配方为牛肉膏蛋白胨培养基,在培养温度为36~39℃,摇瓶转速140~180rpm培养8~12h;

将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为0.2~1%,培养温度为36~39℃,种子罐搅拌转速220~240rpm培养8~10h,菌种达到对数生长期;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为5~10%,在培养温度为36~39℃,发酵罐搅拌转速200~220rpm培养26~36h,发酵罐中枯草芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上,含量≥1010个/ml,然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量≥1011个/克。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为玉米淀粉15~25g/l、豆粕粉20~30g/l、氯化钠1~5g/l、磷酸氢二钾2~6g/l、硫酸镁0.5~2g/l和硫酸锰0.1~0.5g/l。

步骤3、培养解淀粉芽孢杆菌cicc23043

将纯化培养的斜面培养基上的解淀粉芽孢杆菌cicc23043菌种接种至锥形瓶中,所述锥形瓶装有体积百分含量为15~30%的活化培养基;所述活化培养基的配方为牛肉膏蛋白胨培养基,培养温度为36~38℃,摇瓶转速130~150rpm培养10~12h;

将活化培养好的解淀粉芽孢杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为0.1~0.5%,培养温度为36~38℃,种子罐搅拌转速220~240rpm培养10~12h,菌种达到对数生长期;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为5~10%,在培养温度为36~38℃,发酵罐搅拌转速200~220rpm培养35~40h,发酵罐中解淀粉芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上,含量≥1.6×1010个/ml,然后将发酵得到的解淀粉芽孢杆菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中解淀粉芽孢杆菌芽孢含量≥1.8×1011个/克。

所述种子罐和发酵罐的配方相同,培养基的配方为玉米粉25~35g/l、豆粕30~40g/l、氯化钠1~5g/l、磷酸二氢钾1~3g/l、磷酸氢二钾1~3g/l、硫酸猛0.1~0.5g/l。

步骤4、培养乳酸乳球菌cicc23609

将纯化培养的斜面培养基上的乳酸乳球菌cicc23609菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为15~30%的活化培养基;所述活化培养基的配方为:酵母膏7.5g,葡萄糖10g,番茄汁100ml,蛋白胨7.5g,磷酸二氢钾2.0g,吐温800.5ml,蒸馏水900ml,ph为7.0;在培养温度为26~29℃,静置培养26~30h;

将活化培养好的乳酸乳球菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为1~3%,培养温度为26~29℃,种子罐搅拌转速150~180rpm培养24~26h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到装有体积百分含量为50~70%发酵培养基的发酵罐内,体积接种量为5~10%,在培养温度为26~29℃,发酵罐搅拌转速150~180rpm培养40~48h,发酵罐中乳酸乳球菌含量≥109个/ml,然后将发酵得到的乳酸乳球菌单菌添加保护剂经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中乳酸乳球菌含量≥1010个/克。

所述保护剂为乳清粉和脱脂乳粉,按照3-5:2-4的质量比复配而成。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为:酵母粉5~15g/l、葡萄糖10~20g/l、蛋白胨10~20g/l、磷酸二氢钾1~5g/l、吐温800.5~1ml/l、乙酸钠1~5g/l和番茄汁100~150ml/l。

步骤5、培养两歧双歧杆菌cicc6168

将纯化培养的斜面培养基上的两歧双歧杆菌cicc6168菌种接种至厌氧瓶中,所述厌氧瓶装有体积百分含量为60~80%的活化培养基;所述活化培养基的配方为酪蛋白胨10~20g/l、葡萄糖10~20g/l、大豆蛋白胨5~10g/l、酵母粉5~10g/l、磷酸氢二钾1~5g/l、硫酸镁0.1~0.5g/l、l-半胱氨酸0.1~0.5g/l、吐温800.5~1ml/l、氯化钠1~5g/l和氯化钙0.01~0.05g/l;在培养温度为36~38℃,静置培养42~46h;

将活化培养好的两歧双歧杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为60~80%发酵培养基;体积接种量为1~3%,培养温度为36~38℃,静置培养22~25h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为60~80%发酵培养基;体积接种量为5~10%,在培养温度为36~38℃,静置培养44~48h,发酵罐中两歧双歧杆菌含量≥6×108个/ml,然后将发酵得到的两歧双歧杆菌单菌添加保护剂经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中两歧双歧杆菌含量≥2×1010个/克。

所述种子罐和发酵罐的配方相同,培养基的配方为酪蛋白胨15~25g/l、葡萄糖15~25g/l、大豆蛋白胨10~15g/l、酵母粉5~10g/l、磷酸氢二钾3~8g/l、硫酸镁0.1~0.5g/l、l-半胱氨酸0.1~0.5g/l、吐温800.5~1ml/l、氯化钠5~10g/l和氯化钙0.01~0.05g/l。

步骤6、培养嗜酸乳杆菌accc11073

将纯化培养的斜面培养基上的嗜酸乳杆菌accc11073菌种接种至三角瓶中,所述三角瓶装有体积百分含量为60~80%的活化培养基;所述活化培养基的配方为mrs培养基,在培养温度为35~38℃,静置培养22~26h;

将活化培养好的嗜酸乳杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为60~80%发酵培养基;体积接种量为1~3%,培养温度为35~38℃,种子罐静置培养18~22h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为60~80%发酵培养基;体积接种量为5~10%,在培养温度为35~38℃,发酵罐静置培养24~30h,发酵罐中嗜酸乳杆菌含量≥3×109个/ml,然后将发酵得到的嗜酸乳杆菌添加保护剂经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中嗜酸乳杆菌含量≥5×1010个/克。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为葡萄糖20~25g/l、蛋白胨15~25g/l、酵母粉5~15g/l、磷酸氢二钾1~5g/l、柠檬酸氢二铵1~5g/l、吐温800.5~1ml/l、乙酸钠1~10g/l和硫酸镁0.01~0.05g/l。

步骤7、培养产朊假丝酵母cicc1807

将纯化培养的斜面培养基上的产朊假丝酵母菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为15~30%的活化培养基;所述活化培养基的配方为葡萄糖马铃薯培养基,培养温度为28~30℃,摇瓶转速130~150rpm培养18~20h;

将活化培养好的产朊假丝酵母菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为1~3%,培养温度为28~30℃,种子罐搅拌转速220~240rpm培养18~20h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为5~10%,在培养温度为28~30℃,发酵罐搅拌转速200~220rpm培养32~36h,发酵罐中产朊假丝酵母含量≥3×109个/ml,然后将发酵得到的产朊假丝酵母经流化床沸腾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中产朊假丝酵母含量≥2×1010个/克。

所述种子罐和发酵罐的配方相同,培养基的配方为蛋白胨10~20g/l、糖蜜20~30g/l、牛肉粉5~15g/l、磷酸二氢钾1~5g/l、磷酸氢二钾1~5g/l和硫酸铵10~20g/l。

步骤8、培养酿酒酵母cicc1421

将纯化培养的斜面培养基上的酿酒酵母菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为15~30%的活化培养基。所述活化培养基的配方为麦芽汁培养基,培养温度为28~30℃,摇瓶转速130~150rpm培养20~24h;

将活化培养好的酿酒酵母菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为1~3%,培养温度为28~30℃,种子罐搅拌转速200~220rpm培养20~22h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为5~10%,在培养温度为28~30℃,发酵罐搅拌转速200~220rpm培养28~32h,发酵罐中酿酒酵母含量≥4×109个/ml,然后将发酵得到的酿酒酵母经流化床沸腾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中酿酒酵母含量≥5×1010个/克。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为葡萄糖15~25g/l、糖蜜20~30g/l、酵母粉5~10g/l、硫酸镁1~5g/l、磷酸氢二钾1~5g/l和硫酸铵10~20g/l。

步骤8、培养米曲霉cicc41478

将纯化培养的斜面培养基上的米曲霉cicc41478菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为15~30%的活化培养基;所述活化培养基的配方为pda培养基,培养温度为25~28℃,摇瓶转速130~150rpm培养36~40h。

将活化培养好的米曲霉菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为1~3%,培养温度为25~28℃,种子罐搅拌转速200~220rpm培养40~48小时,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为50~70%发酵培养基;体积接种量为5~10%,在培养温度为25~28℃,发酵罐搅拌转速180~200rpm培养3~4天,发酵罐中米曲霉孢子含量≥108个/ml,然后将发酵得到的米曲霉经流化床干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中米曲霉含量≥109个/克。

所述种子罐和发酵罐的配方相同,培养基的配方为麸皮10~20g/l、葡萄糖20~30g/l、豆粕25~35g/l、氯化钠1~5g/l、氯化钙0.5~1g/l、磷酸二氢钾5~10g/l、硫酸亚铁1~3mg/l、硫酸铜0.5~1mg/l、硫酸猛0.1~5mg/l。

步骤9、制得成品

分别将制备的枯草芽孢杆菌cicc10090、枯草芽孢杆菌cicc20445、解淀粉芽孢杆菌cicc23043、乳酸乳球菌cicc23609、两歧双歧杆菌cicc6168、嗜酸乳杆菌accc11073、产朊假丝酵母cicc1807、酿酒酵母cicc1421、米曲霉cicc41478的休眠体微生物干粉,按照枯草芽孢杆菌(cicc10096)5-15份、枯草芽孢杆菌(cicc20445)10-20份、解淀粉芽孢杆菌(cicc23043)5-10份、乳酸乳球菌(cicc23609)10-20份、两歧双歧杆菌(cicc6168)10-20份、嗜酸乳杆菌(accc11073)5-15份、产朊假丝酵母(cicc1807)10-20份、酿酒酵母(cicc1421)5-10份、米曲霉(cicc41478)5-10份的重量比,混合得到杂交肉羊专用复合菌制剂。

由于采用了上述技术方案,本发明的有益效果是:

(1)本发明杂交肉羊专用复合菌制剂,无毒、无抗药性、无残留;

(2)本发明杂交肉羊专用复合菌制剂,显著改善纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代杂交肉羊的品质,屠宰率提高2.5%以上,酮体产肉率提高4%以上;

(3)本发明杂交肉羊专用复合菌制剂,显著改善纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代杂交肉羊的肠道性能,提高饲料利用率8%以上;

(4)本发明杂交肉羊专用复合菌制剂,可明显预防纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代杂交肉羊的羔羊疾病,尤其是对羔羊腹泻有很好的疗效。

具体实施方式

下面结合具体的实施例,进一步阐述本发明。

实施例1一种杂交肉羊专用复合菌制剂

由以下重量份的原料混合制备而成:

枯草芽孢杆菌cicc100905份

枯草芽孢杆菌cicc2044520份

解淀粉芽孢杆菌cicc2304310份

乳酸乳球菌cicc2360910份

两歧双歧杆菌cicc616810份

嗜酸乳杆菌accc110735份

产朊假丝酵母cicc180710份

酿酒酵母cicc142110份

米曲霉cicc414785份。

所述枯草芽孢杆菌cicc10090:为保藏号为cicc10090的枯草芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量1.8×1011个/克;

所述枯草芽孢杆菌cicc20445:为保藏号为cicc20445的枯草芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量1.5×1011个/克;

所述解淀粉芽孢杆菌cicc23043:为保藏号为cicc23043的解淀粉芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中解淀粉芽孢杆菌芽孢含量1.8×1011个/克;

所述乳酸乳球菌cicc23609:为保藏号为cicc23609的乳酸乳球菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中乳酸乳球菌含量8×1010个/克;

所述两歧双歧杆菌cicc6168:为保藏号为cicc6168的两歧双歧杆菌的休眠体微生物干粉,干粉中两歧双歧杆菌含量2×1010个/克;

所述嗜酸乳杆菌accc11073:为保藏号为accc11073的嗜酸乳杆菌的休眠体微生物干粉,干粉中嗜酸乳杆菌含量5×1010个/克;

所述产朊假丝酵母cicc1807:为保藏号为cicc1807的产朊假丝酵母的休眠体微生物干粉,粉中产朊假丝酵母含量2×1010个/克;

所述酿酒酵母cicc1421:为保藏号为cicc1421的酿酒酵母的休眠体微生物干粉,干粉中酿酒酵母含量5×1010个/克;

所述米曲霉cicc41478:为保藏号为cicc41478的米曲霉休眠体微生物干粉,干粉中米曲霉含量8.6×109个/克。

实施例2一种杂交肉羊专用复合菌制剂

由以下重量份的原料混合制备而成:

枯草芽孢杆菌cicc1009010份

枯草芽孢杆菌cicc2044515份

解淀粉芽孢杆菌cicc230435份

乳酸乳球菌cicc2360915份

两歧双歧杆菌cicc616820份

嗜酸乳杆菌accc1107310份

产朊假丝酵母cicc180715份

酿酒酵母cicc142110份

米曲霉cicc414788份;

所述枯草芽孢杆菌cicc10090:为保藏号为cicc10090的枯草芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量1.8×1011个/克;

所述枯草芽孢杆菌cicc20445:为保藏号为cicc20445的枯草芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量1.5×1011个/克;

所述解淀粉芽孢杆菌cicc23043:为保藏号为cicc23043的解淀粉芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中解淀粉芽孢杆菌芽孢含量1.8×1011个/克;

所述乳酸乳球菌cicc23609:为保藏号为cicc23609的乳酸乳球菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中乳酸乳球菌含量8×1010个/克;

所述两歧双歧杆菌cicc6168:为保藏号为cicc6168的两歧双歧杆菌的休眠体微生物干粉,干粉中两歧双歧杆菌含量2×1010个/克;

所述嗜酸乳杆菌accc11073:为保藏号为accc11073的嗜酸乳杆菌的休眠体微生物干粉,干粉中嗜酸乳杆菌含量5×1010个/克;

所述产朊假丝酵母cicc1807:为保藏号为cicc1807的产朊假丝酵母的休眠体微生物干粉,粉中产朊假丝酵母含量2×1010个/克;

所述酿酒酵母cicc1421:为保藏号为cicc1421的酿酒酵母的休眠体微生物干粉,干粉中酿酒酵母含量5×1010个/克;

所述米曲霉cicc41478:为保藏号为cicc41478的米曲霉休眠体微生物干粉,干粉中米曲霉含量8.6×109个/克。

实施例3一种杂交肉羊专用复合菌制剂

由以下重量份的原料混合制备而成:

枯草芽孢杆菌cicc1009015份

枯草芽孢杆菌cicc2044510份

解淀粉芽孢杆菌cicc230437份

乳酸乳球菌cicc2360920份

两歧双歧杆菌cicc616810份

嗜酸乳杆菌accc1107315份

产朊假丝酵母cicc180720份

酿酒酵母cicc14215份

米曲霉cicc4147810份;

所述枯草芽孢杆菌cicc10090:为保藏号为cicc10090的枯草芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量1.8×1011个/克;

所述枯草芽孢杆菌cicc20445:为保藏号为cicc20445的枯草芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量1.5×1011个/克;

所述解淀粉芽孢杆菌cicc23043:为保藏号为cicc23043的解淀粉芽孢杆菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中解淀粉芽孢杆菌芽孢含量1.8×1011个/克;

所述乳酸乳球菌cicc23609:为保藏号为cicc23609的乳酸乳球菌制备的休眠体微生物干粉,干粉中乳酸乳球菌含量8×1010个/克;

所述两歧双歧杆菌cicc6168:为保藏号为cicc6168的两歧双歧杆菌的休眠体微生物干粉,干粉中两歧双歧杆菌含量2×1010个/克;

所述嗜酸乳杆菌accc11073:为保藏号为accc11073的嗜酸乳杆菌的休眠体微生物干粉,干粉中嗜酸乳杆菌含量5×1010个/克;

所述产朊假丝酵母cicc1807:为保藏号为cicc1807的产朊假丝酵母的休眠体微生物干粉,粉中产朊假丝酵母含量2×1010个/克;

所述酿酒酵母cicc1421:为保藏号为cicc1421的酿酒酵母的休眠体微生物干粉,干粉中酿酒酵母含量5×1010个/克;

所述米曲霉cicc41478:为保藏号为cicc41478的米曲霉休眠体微生物干粉,干粉中米曲霉含量8.6×109个/克。

实施例4一种杂交肉羊专用复合菌制剂的制备方法

包括以下步骤:

步骤1、培养枯草芽孢杆菌cicc10090

将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌cicc10090菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为30%的活化培养基;所述活化培养基为lb培养基,在培养温度为30℃,摇瓶转速140rpm培养12h;

将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为0.1%,培养温度为30℃,种子罐搅拌转速220rpm,培养11h,菌种达到对数生长期;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为10%,在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速200rpm培养36h,发酵罐中枯草芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上,含量为1.5×1010个/ml,然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量1.8×1011个/克。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为玉米粉25g/l、葡萄糖10g/l、豆粕粉30g/l、氯化钙3g/l、硫酸镁3g/l和硫酸锰0.5g/l。

步骤2、培养枯草芽孢杆菌cicc20445

将纯化培养的斜面培养基上的枯草芽孢杆菌cicc20445菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为30%的活化培养基;所述活化培养基的配方为牛肉膏蛋白胨培养基,在培养温度为36℃,摇瓶转速140rpm培养12h;

将活化培养好的枯草芽孢杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为0.2%,培养温度为36℃,种子罐搅拌转速220rpm培养10h,菌种达到对数生长期;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为10%,在培养温度为36℃,发酵罐搅拌转速200rpm培养36h,发酵罐中枯草芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上,含量1.3×1010个/ml,然后将发酵得到的枯草芽孢杆菌单菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中枯草芽孢杆菌芽孢含量1.5×1011个/克。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为玉米淀粉25g/l、豆粕粉30g/l、氯化钠5g/l、磷酸氢二钾6g/l、硫酸镁2g/l和硫酸锰0.5g/l。

步骤3、培养解淀粉芽孢杆菌cicc23043

将纯化培养的斜面培养基上的解淀粉芽孢杆菌cicc23043菌种接种至锥形瓶中,所述锥形瓶装有体积百分含量为15%的活化培养基;所述活化培养基的配方为牛肉膏蛋白胨培养基,培养温度为37℃,摇瓶转速150rpm培养10h;

将活化培养好的解淀粉芽孢杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为50%发酵培养基;体积接种量为0.1%,培养温度为37℃,种子罐搅拌转速220rpm培养10h,菌种达到对数生长期;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为50%发酵培养基;体积接种量为10%,在培养温度为37℃,发酵罐搅拌转速200rpm培养40h,发酵罐中解淀粉芽孢杆菌芽孢转化率为95%以上,含量1.6×1010个/ml,然后将发酵得到的解淀粉芽孢杆菌经喷雾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中解淀粉芽孢杆菌芽孢含量1.8×1011个/克。

所述种子罐和发酵罐的配方相同,培养基的配方为玉米粉35g/l、豆粕40g/l、氯化钠5g/l、磷酸二氢钾3g/l、磷酸氢二钾3g/l、硫酸猛0.5g/l。

步骤4、培养乳酸乳球菌cicc23609

将纯化培养的斜面培养基上的乳酸乳球菌cicc23609菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为30%的活化培养基;所述活化培养基的配方为:酵母膏7.5g,葡萄糖10g,番茄汁100ml,蛋白胨7.5g,磷酸二氢钾2.0g,吐温800.5ml,蒸馏水900ml,ph为7.0;在培养温度为29℃,静置培养30h;

将活化培养好的乳酸乳球菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为1%,培养温度为29℃,种子罐搅拌转速150rpm培养26h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到装有体积百分含量为70%发酵培养基的发酵罐内,体积接种量为10%,在培养温度为29℃,发酵罐搅拌转速150rpm培养48h,发酵罐中乳酸乳球菌含量2.5×109个/ml,然后将发酵得到的乳酸乳球菌单菌添加保护剂经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中乳酸乳球菌含量8×1010个/克。

所述保护剂为乳清粉和脱脂乳粉,按照4:3的质量比复配而成。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为:酵母粉15g/l、葡萄糖20g/l、蛋白胨10g/l、磷酸二氢钾5g/l、吐温801ml/l、乙酸钠5g/l和番茄汁150ml/l。

步骤5、培养两歧双歧杆菌cicc6168

将纯化培养的斜面培养基上的两歧双歧杆菌cicc6168菌种接种至厌氧瓶中,所述厌氧瓶装有体积百分含量为80%的活化培养基;所述活化培养基的配方为酪蛋白胨20g/l、葡萄糖20g/l、大豆蛋白胨10g/l、酵母粉5g/l、磷酸氢二钾5g/l、硫酸镁0.1g/l、l-半胱氨酸0.1g/l、吐温800.5ml/l、氯化钠5g/l和氯化钙0.05g/l;在培养温度为36℃,静置培养46h;

将活化培养好的两歧双歧杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为80%发酵培养基;体积接种量为1%,培养温度为36℃,静置培养24h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为80%发酵培养基;体积接种量为10%,在培养温度为36℃,静置培养48h,发酵罐中两歧双歧杆菌含量6×108个/ml,然后将发酵得到的两歧双歧杆菌单菌添加保护剂经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中两歧双歧杆菌含量2×1010个/克。

所述种子罐和发酵罐的配方相同,培养基的配方为酪蛋白胨25g/l、葡萄糖25g/l、大豆蛋白胨15g/l、酵母粉10g/l、磷酸氢二钾8g/l、硫酸镁0.5g/l、l-半胱氨酸0.5g/l、吐温801ml/l、氯化钠5g/l和氯化钙0.01g/l。

步骤6、培养嗜酸乳杆菌accc11073

将纯化培养的斜面培养基上的嗜酸乳杆菌accc11073菌种接种至三角瓶中,所述三角瓶装有体积百分含量为80%的活化培养基;所述活化培养基的配方为mrs培养基,在培养温度为35℃,静置培养26h;

将活化培养好的嗜酸乳杆菌菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为80%发酵培养基;体积接种量为3%,培养温度为35℃,种子罐静置培养22h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为80%发酵培养基;体积接种量为10%,在培养温度为35℃,发酵罐静置培养30h,发酵罐中嗜酸乳杆菌含量3×109个/ml,然后将发酵得到的嗜酸乳杆菌添加保护剂经冷冻干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中嗜酸乳杆菌含量5×1010个/克。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为葡萄糖25g/l、蛋白胨15g/l、酵母粉15g/l、磷酸氢二钾1g/l、柠檬酸氢二铵1g/l、吐温801ml/l、乙酸钠10g/l和硫酸镁0.01g/l。

步骤7、培养产朊假丝酵母cicc1807

将纯化培养的斜面培养基上的产朊假丝酵母菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为15%的活化培养基;所述活化培养基的配方为葡萄糖马铃薯培养基,培养温度为28℃,摇瓶转速130rpm培养20h;

将活化培养好的产朊假丝酵母菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为1%,培养温度为28℃,种子罐搅拌转速240rpm培养18h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为5%,在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养36h,发酵罐中产朊假丝酵母含量3×109个/ml,然后将发酵得到的产朊假丝酵母经流化床沸腾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中产朊假丝酵母含量2×1010个/克。

所述种子罐和发酵罐的配方相同,培养基的配方为蛋白胨20g/l、糖蜜30g/l、牛肉粉15g/l、磷酸二氢钾5g/l、磷酸氢二钾5g/l和硫酸铵20g/l。

步骤8、培养酿酒酵母cicc1421

将纯化培养的斜面培养基上的酿酒酵母菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为15%的活化培养基。所述活化培养基的配方为麦芽汁培养基,培养温度为30℃,摇瓶转速150rpm培养20h;

将活化培养好的酿酒酵母菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为1%,培养温度为30℃,种子罐搅拌转速220rpm培养20h,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为5%,在培养温度为30℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养32h,发酵罐中酿酒酵母含量4×109个/ml,然后将发酵得到的酿酒酵母经流化床沸腾干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中酿酒酵母含量5×1010个/克。

所述种子罐和发酵罐的培养基配方相同,培养基的配方为葡萄糖25g/l、糖蜜30g/l、酵母粉10g/l、硫酸镁5g/l、磷酸氢二钾5g/l和硫酸铵10g/l。

步骤8、培养米曲霉cicc41478

将纯化培养的斜面培养基上的米曲霉cicc41478菌种接种至摇瓶中,所述摇瓶装有体积百分含量为30%的活化培养基;所述活化培养基的配方为pda培养基,培养温度为28℃,摇瓶转速150rpm培养40h。

将活化培养好的米曲霉菌种接种到种子罐内,所述种子罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为1%,培养温度为28℃,种子罐搅拌转速220rpm培养45小时,菌体大量繁殖;

将培养好的种子罐菌种接种到发酵罐内,所述发酵罐装有体积百分含量为70%发酵培养基;体积接种量为10%,在培养温度为28℃,发酵罐搅拌转速220rpm培养4天,发酵罐中米曲霉孢子含量7.5×108个/ml,然后将发酵得到的米曲霉经流化床干燥制备成休眠体微生物干粉,干粉中米曲霉含量8.6×109个/克。

所述种子罐和发酵罐的配方相同,培养基的配方为麸皮20g/l、葡萄糖20g/l、豆粕35g/l、氯化钠5g/l、氯化钙1g/l、磷酸二氢钾10g/l、硫酸亚铁3mg/l、硫酸铜1mg/l、硫酸猛5mg/l。

步骤9、制得成品

分别将制备的枯草芽孢杆菌cicc10090、枯草芽孢杆菌cicc20445、解淀粉芽孢杆菌cicc23043、乳酸乳球菌cicc23609、两歧双歧杆菌cicc6168、嗜酸乳杆菌accc11073、产朊假丝酵母cicc1807、酿酒酵母cicc1421、米曲霉cicc41478的休眠体微生物干粉,按照杂交肉羊专用复合菌制剂的配方进行复配,混合得到杂交肉羊专用复合菌制剂。

实施例5试验检测

实验肉羊为纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代肉羊,并为断奶后3月龄的健康杂交肉羊,体重均为30kg左右,实验时间为4个月,杂交肉羊数量为60只,随机分为两组,每组30只,分别为对照组和实验组;对照组饲喂精料和粗饲料,实验组饲喂精料和粗饲料,并在精料中添加0.1%的实施例3的复合菌制剂(按照实施例4的制备方法制备而成),其它饲养条件均相同。

在实验过程中注意观察断奶羔羊的发病情况及羊舍臭味。

经过四个月的饲喂,将羔羊进行屠宰;并统计纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代杂交肉羊屠宰性能及肉品质的各项指标,具体见表1,本实验数据处理和分析采用excel2007进行数据整理,spss17.0进行单因素方差分析,数据以平均数±标准差表示。

表1杂交肉羊屠宰性能及肉品质的检测指标

注:同行标注不同大写字母者差异极显著(p<0.01),不同小写字母者差异显著(p<0.05),相同字母或者不标注者差异不显著(p>0.05)。

由上表可以看出,本发明对纯种黑头杜泊羊与小尾寒羊杂交的f1代肉羊的生长具有显著的影响;7个月龄的羔羊实验组和对照组宰前活重、酮体重和背最长肌滴水损失差异极显著(p<0.01),实验组宰前活重达62.8kg;胴体重达34.1kg,背最长肌滴水损失为1.25%,实验组和对照组屠宰率、酮体产肉率、眼肌面积和熟肉率差异显著(p<0.05),实验组屠宰率为54.3%,酮体产肉率为78.6%,眼肌面积为13.09cm2,熟肉率为58.2%,肉羊品质高;并且实验过程中发现,对照组羊舍的臭味明显高于实验组,实验组羊舍气味无任何异常,说明实验组羔羊的肠道消化食物较好,可见,本发明可很好的调理羔羊肠道菌群,提高肠道消化性能。

除特殊说明的外,本发明所述的百分数均为质量百分数,所述的比值均为质量比。

最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

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