一种LAMP氢离子驱动i-motif变换比率型电化学传感器及构建方法与流程

文档序号:20364904发布日期:2020-04-10 23:57阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种lamp氢离子驱动i-motif变换比率型电化学传感器的构建方法,其特征在于,先将用不同电活性物质标记的两条dna单链进行反应,然后将所得产物滴加至电极表面,最后在电极表面滴加lamp反应溶液,即可完成所述传感器的构建;其中,lamp反应溶液是通过以下方法制备得到的:利用hdna与两条特殊的茎-环发夹dna模板和前驱体进行扩增后,制备具有内引物结合位点的特殊双哑铃dna结构,然后以该结构为起始模板,经lamp扩增获得含大量副产物h+的lamp反应溶液。

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述的两条dna单链为s1和s2,它们分别用二茂铁fc和亚甲蓝mb标记,得fc-s1和mb-s2,即为电化学信号探针。

3.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,fc-s1和mb-s2的反应温度为室温,反应时间为2小时,所得产物滴加至电极表面并孵育16小时。

4.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述内引物为bip和fip。

5.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,lamp扩增的反应条件为:在pcr仪中于65℃闭管反应40分钟。

6.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,具体步骤如下:

(1)制备具有内引物bip和fip结合位点并能延伸的特殊双哑铃dna结构;

(2)加入内引物bip和fip,该双哑铃dna结构为起始模板,进行快速、简便、高效的延伸和扩增,得到含大量副产物h+的lamp反应溶液;

(3)将两电化学信号探针fc-s1和mb-s2在室温反应2小时后,滴加到电沉积金的玻碳电极表面;

(4)在上述电极表面滴加lamp反应溶液。

7.根据权利要求6所述的构建方法,其特征在于,特殊双哑铃dna结构的制备方法如下:目标物hdna与两条特殊的茎-环发夹dna模板ht和dna前驱体hp、dna聚合酶bst以及dntps,在pcr仪中于50℃闭管反应20分钟,形成具有内引物bip和fip结合位点并能延伸的特殊双哑铃dna结构。

8.利用权利要求1~7中任一项所述方法构建的一种lamp氢离子驱动i-motif变换比率型电化学传感器。

9.权利要求8所述传感器在hiv标志物dna定量检测中的应用。

10.一种lamp氢离子驱动i-motif变换比率型定量检测方法,其特征在于,利用权利要求8所述传感器对所述两种电活性物质的电化学响应信号进行测定,从而实现对hiv标志物dna的定量检测。


技术总结
本发明涉及一种LAMP氢离子驱动i‑motif变换比率型电化学传感器及构建方法,通过常规LAMP技术与电化学检测相结合,利用目标物短链DNA延伸形成的双哑铃状结构中间体进行LAMP扩增,其副产物H+诱导i‑motif构象转换实现比率型电化学信号的显著改变和放大输出,避免常规LAMP技术模板DNA及引物设计的复杂性和局限性,保障LAMP高特异性和简便快捷,同时提升检测灵敏度。两种电化学探针的信号比值能有效降低背景信号,确保高特异性和高灵敏度、良好的稳定性和再生性。本发明建立的电化学检测方法简单方便快捷;无需引入其他辅助反应物,提高定量检测的特异性和灵敏度,缩短分析时间,降低检测成本。

技术研发人员:许文菊;滑笑雨;廖羽梦
受保护的技术使用者:西南大学
技术研发日:2019.12.05
技术公布日:2020.04.10
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