1.一种同时被敲除三个基因的且花药表面带有黑斑标记的棉花雄性不育系的创制方法,其特征包括下列步骤:
(1)在陆地棉中筛选得到可以作为标记的ghems1基因的三个dna片段,所述的dna片段分别如seqidno:1(片段命名:ghir_a08g010860),seqidno:2(片段命名:ghir_d08g010810)和seqidno:3所示(片段命名:ghir_a09g018830),以上述三个dna片段的保守区域设计共有的靶位点sgrna1和sgrna2;
其中sgrna1的核苷酸序列如下所示:
sgrna1:aacctgaccgctctttacat;
sgrna2的核苷酸序列分别如下所示:
sgrna2:cagtgaaattgttggagtca;
(2)利用pcr方法将sgrna1-guidrna与sgrna2-guidrna进行串连,通过一步克隆法构建到crispr/cas9载体上,最终得到高效转化载体ghu6.7::sgrna1-sgrna2;
(3)利用农杆菌介导的方法转化宿主棉花,获得花药表面带有黑斑标记的棉花雄性不育系。
2.一种植物表达载体,其特征在于,所述的表达载体含有seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3所示的dna片段。
3.权利要求1所述的sgrna1、sgrna2序列在培育棉花雄性不育系中的应用。