一种带有标记的棉花雄性不育系的创制方法与流程

文档序号:23339161发布日期:2020-12-18 16:33阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种同时被敲除三个基因的且花药表面带有黑斑标记的棉花雄性不育系的创制方法,其特征包括下列步骤:

(1)在陆地棉中筛选得到可以作为标记的ghems1基因的三个dna片段,所述的dna片段分别如seqidno:1(片段命名:ghir_a08g010860),seqidno:2(片段命名:ghir_d08g010810)和seqidno:3所示(片段命名:ghir_a09g018830),以上述三个dna片段的保守区域设计共有的靶位点sgrna1和sgrna2;

其中sgrna1的核苷酸序列如下所示:

sgrna1:aacctgaccgctctttacat;

sgrna2的核苷酸序列分别如下所示:

sgrna2:cagtgaaattgttggagtca;

(2)利用pcr方法将sgrna1-guidrna与sgrna2-guidrna进行串连,通过一步克隆法构建到crispr/cas9载体上,最终得到高效转化载体ghu6.7::sgrna1-sgrna2;

(3)利用农杆菌介导的方法转化宿主棉花,获得花药表面带有黑斑标记的棉花雄性不育系。

2.一种植物表达载体,其特征在于,所述的表达载体含有seqidno:1、seqidno:2和seqidno:3所示的dna片段。

3.权利要求1所述的sgrna1、sgrna2序列在培育棉花雄性不育系中的应用。


技术总结
本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及一种带有标记的棉花雄性不育系的创制方法。本发明提供利用CRISPR‑Cas9系统创造带有新型标记的棉花雄性不育系。本发明的特征在于,选取特异针对GhEMS1基因的靶位点sgRNA1、sgRNA2,与Cas9蛋白在棉花内稳定表达,获得带有新型标记的棉花雄性不育系。转基因再生植株的花药表面带有黑斑表型可稳定地遗传至下一代,且不育性稳定。本发明的优点在于克服了传统人工去雄方法做杂交费时费力的缺陷,并且不育株带有黑斑标记,便于早期确定不育株。

技术研发人员:闵玲;张军;徐孝兰;李宁;张献龙;郭小平
受保护的技术使用者:华中农业大学
技术研发日:2019.12.17
技术公布日:2020.12.18
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