1.一种埃博霉素b的氮乙酰葡萄糖苷或半乳糖苷化合物,其特征在于,所述埃博霉素b的氮乙酰葡萄糖苷化合物是化合物1:埃博霉素b7-o-β-d氮乙酰葡萄糖苷;所述埃博霉素b的半乳糖苷化合物是化合物2:埃博霉素b7-o-β-d半乳糖苷。
2.根据权利要求1所述的埃博霉素b的氮乙酰葡萄糖苷或半乳糖苷化合物,其特征在于:所述埃博霉素b的半乳糖苷类化合物是化合物2:埃博霉素b7-o-β-d半乳糖苷。
3.权利要求1或2所述埃博霉素b的氮乙酰葡萄糖苷或半乳糖苷化合物酶法制备的方法,步骤是:
埃博霉素b氮乙酰葡萄糖苷酶法制备:以如下比例量,在50mmtris-hcl,10mmmgcl2的缓冲液环境下,以终浓度为10mm的埃博霉素b和终浓度为50mm的udp-o-α-dn-acetyl-glucose与500μg/ml的糖基转移酶bsgt-1的q318c突变蛋白进行体外酶活反应实验;
埃博霉素b半乳糖苷酶法制备:以如下比例量,在50mmtris-hcl,10mmmgcl2的缓冲液环境下,以终浓度为10mm的埃博霉素b和终浓度为50mm的udp-o-α-d-galactose与500μg/ml的糖基转移酶bsgt-1的m296a突变蛋白进行体外酶活反应实验;
分别将以上反应混合液在37±1℃孵育12±2小时,然后添加3倍体积量的甲醇终止反应,14000r/min,30min去除蛋白沉淀,对样品旋转蒸干处理,再添加甲醇重悬产物,14000r/min再次离心30min后将产物通过半制备液相进行分离纯化;色谱柱尺寸规格选ymc-packproc18,250mm×10.0mm,5μm;流动相体系:以35:65乙腈水系统洗脱,埃博霉素b糖苷的出峰时间:化合物1:13.9min;化合物2:14.4min;分离后的糖苷化合物分别蒸干,用cd3od溶解,再使用uhplc-esi-q-tof高分辨质谱和核磁共振分别进行鉴定;
其中,所述的糖基转移酶bsgt-1的q318c突变蛋白是以pet28a-bsgt-1重组质粒为模板,设计突变引物为:
f-q318c:gtatgagtgcgagctcactgcaaatcgggttg;
r-q318c:tgagctcgcactcatacatttgcggaatgacg;
通过一次pcr产生线性重组突变质粒片段,再通过重组反应环化,形成q318c突变的pet28a-bsgt-1重组质粒,经重组质粒的转化和蛋白的诱导表达及纯化获得;
同样,糖基转移酶bsgt-1的m296a突变蛋白获取与糖基转移酶bsgt-1的q318c突变蛋白获取步骤一致,其中设计突变引物为:
f-m296a:ggggcaaacagtacgatggaagcgatgaacgc;
r-m296a:atcgtactgtttgccccgccatgagagatgaaca;
上述的糖基转移酶bsgt-1(cub50191),其蛋白序列已经公布,其是通过提取b.subtilisjrs11基因组,设计引物(f-bamhi:cgcggatccatgaaaaagtaccatatttcgat;r-sali:acgcgtcgacttactgcgggacagcggattttt),经过双酶切连接形成pet28a-bsgt-1重组质粒,由重组载体转化大肠杆菌bl21(de3)诱导表达获得。
4.根据权利要求3所述埃博霉素b的氮乙酰葡萄糖苷或半乳糖苷化合物酶法制备的方法,其特征在于:所述埃博霉素b和udp-o-α-n-acetyl-dglucose或udp-o-α-d-galactose混合的摩尔比优选为1:5,其与糖基转移酶bsgt-1的q318c或m296a突变蛋白介导糖基化反应的反应混合液在37℃孵育12小时。
5.权利要求1或2所述埃博霉素b的氮乙酰葡萄糖苷或半乳糖苷化合物在制备预防和治疗肝癌的药物中的应用。