1.一种工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于,
采用菌种为类球红细菌(rhodobactersphaeroides),已于2018年10月24日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏中心登记入册编号为cgmccno.16625;
所述方法包括如下步骤:
s1:菌种的平板培养:将菌种接种于平板,放入温度32.0±0.5℃、湿度35%-45%的培养箱中培养5-7天;
s2:菌种的斜面培养;从s1中选择培养成熟的菌种,放入温度32.0±0.5℃、湿度35%-45%的培养箱中培养,培养周期为5-7天;
s3:20l种子培养;从s2中选择斜面培养成熟的菌种,放入灭菌后的20l种子罐中,培养条件为0-12h转速控制60~80rpm,13h后转速为160~200rpm,空气流量为0.6±0.2m3/h,温度32.0±1℃,培养22~30h;
s4:一级种子罐培养:待s3中种子液培养成熟后利用压差法按接种量0.1~0.5%接入一级种子罐中,一级种子罐培养条件为罐压0.03~0.05mpa,通气量100±20m3/h,罐温为32~34℃,转速180~200rpm,培养周期24~32h;
s5:二级种子培养:将s4中培养成熟的一级种子液利用压差法按接种量8~20%接入二级种子罐中,二级种子罐培养条件为罐压0.03~0.05mpa,通气量400±200m3/h,罐温为32~34℃,转速120~160rpm,培养周期18~26h;
s6:三级发酵培养:将s5中培养成熟的二级种子液利用压差法按接种量20~30%接入三级发酵罐中,三级发酵罐培养条件为罐压0.03~0.05mpa,发酵前40h通气量控制800±200m3/h,40h后至结束通气量控制1000±200m3/h,转速控制80~100rpm,罐温为32~34℃,发酵过程需要进行3次补料;
s7:倒种再培养发酵:选取s6中培养至50~65h符合纯种培养标准的1批或1批以上给出罐发酵液,将其转入同一个灭菌完成的接收罐中继续培养,接收罐的罐压0.03~0.05mpa,发酵前40h通气量控制800±200m3/h,40h后至结束通气量控制1000±200m3/h,转速控制80~100rpm,罐温为32~34℃,发酵过程需要进行3次补料。
2.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s1平板培养和s2斜面培养所用的培养基配方为:酵母粉1.0-10.0g/l,磷酸二氢钾0.1-2.5g/l,硫酸镁1.0-5.0g/l,硫酸亚铁0.1-1.0g/l,氯化钠0-5.0g/l,硫酸铵1.5-3.5g/l,谷氨酸钠0.5-3.0g/l,玉米浆干粉0.5-3.0g/l,葡萄糖5-20g/l,琼脂15-20g/l,ph=6.5-7.3。
3.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s3中20l种子培养的培养罐培养基配方为:葡萄糖30-60g/l,硫酸铵10-30g/l,玉米浆干粉5-10g/l,谷氨酸钠1-10g/l,一水硫酸镁0.1-0.5g/l,酵母浸粉5-20g/l,工业盐15-30g/l,磷酸氢二钾5-10g/l,磷酸二氢钾5-10g/l,七水硫酸镁10-30g/l,七水硫酸亚铁1-10g/l,ph=6.5-7.3。
4.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s4中一级种子罐培养基配方为:葡萄糖0.1-0.4%,硫酸铵0.2-0.5%,磷酸氢二钾0.03-0.06%,磷酸二氢钾0.03-0.06%,七水硫酸镁0.1-0.3%,七水硫酸亚铁0.01-0.03%,工业盐0.1-0.4%,碳酸钙0.5-1.0%,消泡剂0.01-0.05%,玉米浆干粉0.03-0.08%,谷氨酸钠0.03-0.08%,一水硫酸镁0.001-0.005%,六水氯化钴0.0001-0.0005%,酵母浸粉0.1-0.5%,ph=6.5-7.3。
5.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s5中二级种子罐培养基配方为:葡萄糖1-2%,硫酸铵0.1-0.5%,磷酸氢二钾0.05-1.0%,磷酸二氢钾0.05-1.0%,七水硫酸镁0.1-0.5%,七水硫酸亚铁0.01-0.04%,工业盐0.1-0.5%,碳酸钙0.5-1.0%,消泡剂0.01-0.05%,玉米浆干粉0.05-0.15%,谷氨酸钠0.05-0.1%,一水硫酸镁0.005-0.015%,六水氯化钴0.0001-0.0005%,酵母浸粉0.1-0.5%,ph=6.5-7.3。
6.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s6中三级发酵培养中三级发酵罐培养基配方为:硫酸铵0.2-0.6%,磷酸二氢钾0.01-0.06%,七水硫酸镁1.0-1.5%,七水硫酸亚铁0.1-0.5%,工业盐0.1-0.5%,消泡剂0.01-0.05%,氯化钙0.005-0.01%,玉米浆干粉0.3-0.8%,谷氨酸钠0.1-0.5%,一水硫酸镁0.005-0.01%,ph=6.5-7.3。
7.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s4中发酵终点判断标准为:发酵液od≥5.0,还原糖浓度降至0~0.5g/l。
8.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s5中发酵终点判断标准为:发酵液od≥10.0,还原糖浓度降至0~0.5g/l。
9.根据权利要求1所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s6和s7中接种后每隔4h取样测定糖、磷、镜检观察菌形并监测染菌情况。
10.根据权利要求9所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s6的三级发酵和s7的倒种再培养发酵前40h控制糖浓度0.8~1.2%,发酵中期40~80h控制糖浓度0.5~0.8%,80h后至结束糖浓度控制在0.2%左右,发酵前4~40h控制补磷速度35~40l/h,40~65h补磷速度控制10~15l/h,65~80h补磷速度控制在25~30l/h。
11.根据权利要求10所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s6的三级发酵和s7的倒种再培养发酵过程需要进行3次补料,第一次补料时间为20-30h,第二次补料时间为40-50h,第三次补料时间为倒种前,培养周期90~105h。
12.根据权利要求11所述的工业发酵生产辅酶q10的方法,其特征在于:所述s6的三级发酵和s7的倒种再培养发酵过程补料配方为:硫酸铵0.5-1.0%,磷酸二氢钾0.1-0.5%,七水硫酸镁1.5-3.5%,七水硫酸亚铁0.1-0.5%,消泡剂0.1-0.3%,氯化钙0.01-0.03%,玉米浆干粉1.0-3.0%,谷氨酸钠0.5-1.0%,一水硫酸镁0.01-0.03%。