1.一种分离的双特异性表皮生长因子受体(egfr)/肝细胞生长因子受体(c-met)抗体,其包含:
a)第一重链(hc1),其包含hc1恒定域3(hc1ch3)和hc1可变区1(vh1);
b)第二重链(hc2),其包含hc2恒定域3(hc2ch3)和hc2可变区2(vh2);
c)第一轻链(lc1),其包含轻链可变区1(vl1);和
d)第二轻链(lc2),其包含轻链可变区2(vl2),
其中所述vh1和所述vl1配对以形成特异性结合egfr的第一抗原结合位点,所述vh2和所述vl2配对以形成特异性结合c-met的第二抗原结合位点,所述hc1在所述hc1ch3中包含至少一个替换,并且所述hc2在所述hc2ch3中包含至少一个替换,并且当根据eu索引对残基进行编号时,所述hc1ch3中的替换和所述hc2ch3中的替换在不同氨基酸残基位置处发生,其中
i)所述vh1包含分别为seqidno:210、211和212的重链互补决定区(hcdr)1(hcdr1)、hcdr2和hcdr3氨基酸序列;并且
ii)所述vl1包含分别为seqidno:213、214和215的轻链互补决定区(lcdr)1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3氨基酸序列;
iii)所述vh2包含分别为seqidno:216、217和218的hcdr1、hcdr2和hcdr3氨基酸序列;并且
iv)所述vl2包含分别为seqidno:219、220和221的lcdr1、lcdr2和lcdr3氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体,其中:
a)所述抗体为人抗体,和其中所述vh1、所述vl1、所述vh2和所述vl2分别包含seqidno:189、190、193和194的氨基酸序列;和/或
b)其中所述抗体抑制nci-h292、nci-h1975或skmes-1细胞系中胞外信号相关激酶1和2(erk1/2)的磷酸化,其中与用包含重链3(hc3)和轻链3(lc3)的对照单价egfr抗体以及包含重链4(hc4)和轻链4(lc4)的对照单价c-met抗体的混合物抑制nci-h292、nci-h1975或skmes-1细胞系中erk1/2的磷酸化的ic50值相比,所述抗体的ic50值小至少约10倍、小至少约20倍、小至少约30倍、小至少约40倍、小至少约50倍或小至少约60倍,其中
所述hc3与所述hc1、所述lc3与所述lc1、所述hc4与所述hc2、以及所述lc4与所述lc2分别具有相同的氨基酸序列,并且
通过夹心免疫测定法,将抗磷酸化erk1/2抗体用作捕获抗体并将与电化学发光化合物缀合的结合于非磷酸化和磷酸化erk1/2的抗体用作检测抗体,在全细胞裂解物中测量erk1/2的磷酸化;
任选其中:
i)所述抗体以约2×10-9m或更小、约1×10-9m或更小、或约1×10-10m或更小的ic50值抑制erk1/2的磷酸化;和/或
ii)erk1在残基thr202和tyr204处被磷酸化,并且erk2在残基thr185和tyr197处被磷酸化;和/或
c)所述抗体抑制nci-h1975细胞系中蛋白激酶b(akt)在ser473处的磷酸化,其中与用包含所述hc3和所述lc3的对照单价egfr抗体以及包含所述hc4和所述lc4的对照单价c-met抗体的混合物抑制nci-h1975细胞系中akt在ser473处的磷酸化的ic50值相比,所述抗体的ic50值小至少约70倍,其中
所述hc3与所述hc1、所述lc3与所述lc1、所述hc4与所述hc2、以及所述lc4与所述lc2分别具有相同的氨基酸序列,并且
通过夹心免疫测定法,将结合于非磷酸化和磷酸化akt的抗体用作捕获抗体并将与电化学发光化合物缀合的抗磷酸化aktser473抗体用作检测抗体,在全细胞裂解物中测量akt在ser473处的磷酸化;任选其中所述抗体以1×10-9m或更小的ic50值抑制akt在ser473处的磷酸化;和/或
d)其中所述抗体抑制nci-h1975细胞系中akt在thr308处的磷酸化,其中与用包含所述hc3和所述lc3的对照单价egfr抗体以及包含所述hc4和所述lc4的对照单价c-met抗体的混合物抑制nci-h1975细胞系中akt在thr308处的磷酸化的ic50值相比,所述抗体的ic50值小至少约100倍,其中
所述hc3与所述hc1、所述lc3与所述lc1、所述hc4与所述hc2、以及所述lc4与所述lc2分别具有相同的氨基酸序列,并且
通过夹心免疫测定法,将结合于非磷酸化和磷酸化akt的抗体用作捕获抗体并将与电化学发光化合物缀合的抗磷酸化aktthr308抗体用作检测抗体,在全细胞裂解物中测量akt在thr308处的磷酸化;
任选其中所述抗体以1×10-9m或更小的ic50值抑制akt在thr308处的磷酸化;和/或
e)其中所述双特异性抗体在egfr残基k489、i491、k467和s492处结合具有以seqidno:73示出的氨基酸序列的egfr且在残基pefrdsypikyvhaf(seqidno:238)和faqskpdsaepmdrsa(seqidno:239)处结合c-me;和/或
f)其中所述抗体抑制nci-h292或nci-h1975细胞的生长,其中当nci-h292或nci-h1975细胞在低附着条件下生长时,与用西妥昔单抗抑制nci-h292或nci-h1975细胞的生长的ic50值相比,所述抗体的ic50值小至少约300倍、小至少约400倍、小至少约500倍、小至少约600倍、小至少约700倍或小至少约800倍;和/或
g)其中所述抗体抑制scidbeige小鼠中表达hgf的skmes-1细胞瘤的生长,当所述双特异性抗体和西妥昔单抗以20mg/kg剂量施用时,与西妥昔单抗相比,在第36天,所述抗体的t/c百分比(%)值小至少500倍;和/或
h)其中所述抗体中和egfr与c-met信号传导。
3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体,其中所述hc1和所述hc2属于igg1、igg2、igg3或igg4同种型,例如,,其中所述hc1和所述hc2属于igg1同种型;任选其中当根据eu索引对残基进行编号时,在残基位置350、366、368、370、399、405、407或409处,所述hc1ch3包含至少一、二、三、四、五、六、七或八个替换,并且所述hc2ch3包含至少一、二、三、四、五、六、七或八个替换,例如,
a)其中在残基位置350、370、405或409处,所述hc1ch3包含至少一、二、三或四个替换,并且所述hc2ch3包含至少一、二、三或四个替换;
b)其中在残基位置405或409处,所述hc1ch3包含至少一个替换,并且所述hc2ch3包含至少一个替换;
c)其中所述hc1ch3包含k409r或f405l替换,并且所述hc2ch3包含k409r或f405l替换;或
d)其中所述hc1ch3包含所述f405l替换,并且所述hc2ch3包含所述k409r替换。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的双特异性抗体:
a)其还包含所述hc1、所述lc1、所述hc2或所述lc2中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个保守氨基酸替换;任选其包含所述hc1和/或所述hc2中的替换m252y/s254t/t256e,其中根据eu索引对残基进行编号;和/或b)其中所述抗体具有岩藻糖含量约在1%至约15%之间的二天线聚糖结构。
5.一种药物组合物,其包含权利要求1-4中任一项所述的双特异性抗体和药学上可接受的载体。
6.权利要求1-4中任一项的双特异性抗体在制备治疗癌症的方法的药物中的用途,所述方法包括向对其有需要的患者施用治疗有效量的所述的双特异性egfr/c-met抗体足以治疗所述癌的时间,任选其中:
a)所述癌与egfr激活突变、egfr基因扩增、升高水平的循环hgf、c-met激活突变、c-met基因扩增或突变体kras相关,例如其中:
(i)所述egfr激活突变为g719a、g719x(x为任何氨基酸)、l861x(x为任何氨基酸)、l858r、e746k、l747s、e749q、a750p、a755v、v765m、l858p或t790m替换、e746-a750的缺失、r748-p753的缺失、ala(a)在m766与a767之间的插入、ser、val和ala(sva)在s768与v769之间的插入、以及asn和ser(ns)在p772与h773之间的插入;任选其中所述egfr激活突变为l858r、del(e476,a750)和/或t790m替换;或
(ii)所述突变体kras具有g12v或g12c替换;或
(iii)所述受检者抵抗厄洛替尼、吉非替尼、阿法替尼、co-1686、azd9192或西妥昔单抗治疗,或已获得对所述治疗的抗性;或
(iv)所述癌为上皮细胞癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、非小细胞肺癌(nsclc)、肺腺癌、小细胞肺癌、结肠直肠癌、肛门癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、咽癌、鼻癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、舌癌、食道癌、阴道癌、宫颈癌、脾癌、睾丸癌、胃癌、胸腺癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、肝细胞癌(hcc)、或散发性或遗传性乳头状肾细胞癌(prcc);或
b)所述受检者对于cd16的位置158处的苯丙氨酸为纯合的或对于cd16的位置158处的缬氨酸和苯丙氨酸为杂合的。
7.根据权利要求6(a)(iv)中介绍的用途,包括施用第二治疗剂;任选其中
a)所述第二治疗剂为化学治疗剂或靶向抗癌疗法,例如其中i)所述化学治疗剂为顺铂或长春碱;或ii)所述化学治疗剂或所述靶向抗癌疗法为egfr、c-met、her2、her3、her4或vegfr的酪氨酸激酶抑制剂,任选其中所述酪氨酸激酶抑制剂为厄洛替尼、吉非替尼或阿法替尼;或
b)所述第二治疗剂同时地、顺序地或单独地施用。
8.权利要求1-4中任一项的双特异性抗体在制备抑制表达egfr和/或c-met的细胞的生长或增殖的药物中的用途。
9.权利要求1-4中任一项的双特异性抗体在制备抑制受检者中表达egfr和/或c-met的瘤或癌细胞的生长或转移的方法的药物中的用途,所述方法包括向所述受检者施用有效量的所述的双特异性抗体以抑制表达egfr和/或c-met的瘤或癌细胞的生长或转移,任选其中所述表达egfr和/或c-met的瘤为上皮细胞癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、非小细胞肺癌(nsclc)、肺腺癌、小细胞肺癌、结肠直肠癌、肛门癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、咽癌、鼻癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、舌癌、食道癌、阴道癌、宫颈癌、脾癌、睾丸癌、胃癌、胸腺癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、肝细胞癌(hcc)、或散发性或遗传性乳头状肾细胞癌(prcc,例如其中所述表达egfr和/或c-met的瘤与egfr激活突变、egfr基因扩增、升高水平的循环hgf、c-met激活突变、c-met基因扩增或突变体kras相关,任选其中
a)所述egfr激活突变为g719a、g719x(x为任何氨基酸)、l861x(x为任何氨基酸)、l858r、e746k、l747s、e749q、a750p、a755v、v765m、l858p或t790m替换、e746-a750的缺失、r748-p753的缺失、ala(a)在m766与a767之间的插入、ser、val和ala(sva)在s768与v769之间的插入、以及asn和ser(ns)在p772与h773之间的插入;或
b)所述突变体kras具有g12v或g12c替换。
10.权利要求1-4中任一项的双特异性抗体在制备治疗癌症的药物中的用途,任选其中癌症为上皮细胞癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、非小细胞肺癌(nsclc)、肺腺癌、小细胞肺癌、结肠直肠癌、肛门癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、咽癌、鼻癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、舌癌、食道癌、阴道癌、宫颈癌、脾癌、睾丸癌、胃癌、胸腺癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、肝细胞癌(hcc)、或散发性或遗传性乳头状肾细胞癌(prcc)。
11.根据权利要求10的用途,其中所述双特异性抗体可联合第二治疗剂同时地、顺序地或单独地施用,任选其中所述第二治疗剂是化学治疗剂,例如
a)烷化剂,诸如噻替哌和环磷酰胺;
b)烷基磺酸酯,诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡;
c)氮丙啶类,诸如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa);
d)乙撑亚胺或甲基蜜胺,包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺;
e)氮芥,诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、胆磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸氧氮芥、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、松龙苯芥、曲磷胺、尿嘧啶氮芥;
f)亚硝基脲,诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀;
g)抗生素,诸如阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、加利车霉素、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素、放线菌素d、柔红菌素、6-重氮-5-氧-l-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星;
h)抗代谢药,诸如甲氨蝶呤和5-fu;
i)叶酸类似物,诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙;
j)嘌呤类似物,诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤;
k)嘧啶类似物,诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷;
l)雄激素类,诸如二甲睾酮、丙酸甲雄烷酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯;
m)抗肾上腺类,诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦;
n)叶酸补充剂,诸如亚叶酸;
o)醋葡醛内酯;醛磷酰胺糖苷;氨基乙酰丙酸;安吖啶;bestrabucil;比生群;依达曲沙(edatraxate);地磷酰胺(defofamine);秋水仙胺;地吖醌;依氟鸟氨酸(elfornithine);依利醋铵;依托格鲁;硝酸镓;羟基脲;香菇多糖;氯尼达明;米托胍腙;米托蒽醌;莫哌达醇;硝氨丙吖啶;喷司他丁;苯来美特(phenamet);吡柔比星;足叶草酸;2-乙基酰肼;丙卡巴肼;psk®;雷佐生;西索菲兰;锗螺胺;细交链孢菌酮酸;三亚胺醌;2,2',2"-三氯三乙胺;乌拉坦;长春地辛;达卡巴嗪;甘露醇氮芥;二溴甘露醇;二溴卫矛醇;哌泊溴烷;加西托星(gacytosine);阿拉伯糖苷;环磷酰胺或噻替哌;
p)紫杉类或紫杉烷家族的成员,诸如紫杉醇多西他赛及其类似物;苯丁酸氮芥;吉西他滨;6-硫鸟嘌呤;巯嘌呤;甲氨蝶呤;
q)铂类似物,诸如顺铂和卡铂;
r)长春碱;铂;依托泊苷(vp-16);异环磷酰胺;丝裂霉素c;米托蒽醌;长春新碱;长春瑞滨;诺维本;诺消灵;替尼泊苷;柔红霉素;氨基蝶呤;希罗达;伊班膦酸盐;cpt-11;拓扑异构酶抑制剂rfs2000;二氟甲基鸟氨酸(dmfo);维甲酸;艾司波霉素(esperamicins)或卡培他滨;
s)受体酪氨酸激酶和/或血管生成的抑制剂,包括索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、托西尼布、凡德他尼、西地尼布、瑞格非尼、阿西替尼、来他替尼、厄洛替尼(tarceva®)、吉非替尼、bibw2992、拉帕替尼、来那替尼;
t)抗激素剂,其用于调节或抑制激素对瘤的作用,诸如抗雌激素类,包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制芳香化酶的4(5)-咪唑类、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、可莫昔芬(keoxifene)、ly117018、奥那司酮和托瑞米芬;或
u)抗雄激素类,诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林;
以及任何上述物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。